表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱检测宫颈浸润癌相关蛋白质的研究

目的探讨宫颈浸润癌患者与健康女性间血清中的蛋白质差异,以寻找评价治疗效果和判断预后的生物学指标,为制定合理的治疗方案寻找依据。方法通过表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(sur-face enhanced lazar desorption/ionisation-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS),铜离子结合芯片(immobilized metal affinity capture arrays-Cu,IMAC-Cu)以及配套软件,检测49例宫颈浸润癌,71例年龄相配的健康女性血清,筛选出有分类意义的差异蛋白,寻找出合理的运算规则,构建决策树分类模型。结果宫颈浸润癌与正常对照组比较,共有47种蛋白质质谱峰差异有显著性(P<0.05),有分类意义的蛋白质有6种,质荷比为M8929.31,M7930.52,M9127.31,M8141.01,M7963.06,M9280.63,在宫颈浸润癌患者血清中低表达,含量明显低于正常对照,用质荷比为M8929.31的蛋白质建立决策树分类模型,分类正确率为98.33%(118/120),敏感性为97.96%(48/49),特异性为98.59%(70/71)。结论质荷比为M8929.31,M7930.52,M9127.31,M8141.01,M7963.06,M9280.63的一组蛋白质与宫颈浸润癌密切相关,有可能成为评价宫颈癌治疗效果以及预后判断的一组生物学指标。

表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术筛选蕈样肉芽肿血清生物标志物

目的应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛选蕈样肉芽肿患者血清中的生物标志物。方法采用CM10蛋白质芯片捕获14例蕈样肉芽肿患者(研究组)和17例对照者(对照组)血清中的蛋白质,结合Biomarker Wizard软件进行分析。结果所有标本在相对分子质量0~50 000范围内均能检测出131个左右的蛋白峰。两组血清样本的蛋白质指纹图谱存在14个差异表达蛋白质峰,其中相对分子质量为7 670的蛋白质峰与C-C基序趋化因子22相符。结论SELDI-TOF-MS可用于蕈样肉芽肿患者血清生物标志物的筛选。

表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱血清蛋白指纹图谱在喉癌诊断中的应用

目的：用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF—MS）分析喉癌和正常人血清蛋白指纹图谱的变化，建立能鉴别喉癌和正常人血清标志物的诊断模型。方法：收集46例喉癌患者和51例正常人的血清，用WCX2（弱阳离子交换芯片）蛋白质芯片和SELDI—TOF—MS检测蛋白质质谱的表达。用Biomarker Patterns Software分析软件进行数据处理，建立区分喉癌与正常人血清中蛋白质谱差异表达模型，并用此模型对另外12例喉癌患者及13例正常人进行盲法交叉验证。结果：在分子量2000～20000范围内，共检测到76个有差异的蛋白峰，其中27个有统计学意义（P〈0．05），建立了由3个差异蛋白组成的喉癌诊断模型，其准确率为88．7％（86／97），敏感性为87％（40／46），特异性为90．2％（46／51），双盲法验证结果其敏感性为83．3％（10／12），特异性为84．6％（11／13）。结论：用SELDI—TOF—MS技术初步建立的区分喉癌与正常人血清蛋白差异表达模型可以区别喉癌和正常人，可能为喉癌的早期诊断提供了新的手段。

表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱在胃炎诊断中的应用研究

胃炎是常见消化道疾病之一。目前确诊主要依赖胃黏膜活检，但这种创伤性诊断会给患者造成痛苦。而现用的诸多实验室方法的假阳性较高。本研究用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术对胃炎患者、胃溃疡、胃癌和健康志愿者血清蛋白质行对比分析，以筛选可用于临床胃炎诊断的特异性生物标志。

应用表面增强激光解吸附离子化飞行时间质谱技术筛检博莱霉素肺纤维化大鼠血清蛋白标志物

目的鉴定博莱霉素肺纤维化大鼠模型血清差异表达蛋白,寻找肺纤维化疾病早期诊断标志物。方法48只雄性大鼠随机分为博莱霉素组和对照组,每组24只,分别于建模后7、14、28 d各取8只动物处死,取肺组织制作石蜡切片,苏木精-伊红和天狼星红染色,普通光学显微镜和偏振光显微镜观察肺纤维化反应;表面增强激光解吸附离子化飞行时间质谱和弱阳离子蛋白芯片检测血清样本,生物信息学软件分析获得的蛋白指纹图谱,鉴定差异蛋白表达。结果在博莱霉素组大鼠血清中找到4个差异表达的蛋白质,用生物信息学分析软件产生1个肺纤维化动物诊断模型,由质荷比分别为3 530.7、7 043.5、8 332.6和9 068.0的蛋白质组成,与对照组比较,其峰强度均显著升高。结论博莱霉素诱导的肺纤维化血清蛋白表达谱发现的4个差异表达蛋白有可能成为早期诊断博莱霉素肺纤维化大鼠模型的特异血清生物标志物。

表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术在肝脏肿瘤和肝移植蛋白质组学研究中的作用

一、表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术的特点和用途 蛋白质是生命活动的真正执行者，各种疾病的发展过程中伴有蛋白质的动态变化，蛋白质表达水平的变化早于症状出现之前，蛋白质组学的研究能提供大量完整的蛋白质谱变化，为疾病的早期诊断、治疗和预防提供重要的科学依据。无论基因突变还是基因转录或翻译后的变化，均导致基因表达产物蛋白质的改变，从而改变了蛋白质信号通路，负性抑制信号减弱或旁路传递正性激活信号，为肿瘤细胞的转化、生存创造条件，对肿瘤生长的不同阶段（癌前病变、癌发生和治疗过程）中出现差异表达的蛋白质进行定性、定量分析，能够发现肿瘤发生、发展过程中关键性因子及诊断标志物，利于早期诊断、疾病进展监测、确定新的治疗靶点。

表面增强激光解吸/离子化蛋白质芯片技术在肝细胞癌早期诊断研究中的应用

随着蛋白质组学研究技术的飞速发展,集样品分离、纯化、检测和数据分析为一体的表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱蛋白质芯片技术已成为蛋白质组学研究的有力工具,它可以快速、简便地直接检测各种体液及分泌物,具有标本用量少、高通量分析等特点,并在筛选、鉴定肿瘤标志物及临床疾病的诊断、防治方面发挥了重要作用。本文介绍了该技术的特点和分析步骤,以及该技术在肝细胞癌早期诊断中的应用情况,并对其前景进行展望。

采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱结合树状分析模式诊断膀胱移行细胞癌

复旦大学附属华山医院检验医学科刘维薇等采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱测量法（surface—enhanced laser desorption／ionization time—of-flight mass spectrometry，SELDI-TOF—MS）技术在膀胱移行细胞癌患者的尿液中找到一组蛋白，并结合树状分析模式，通过盲筛试验，获得较高的敏感度和特异度。SELDI-TOF—MS是近年出现的蛋白质研究新技术，其综合了蛋白芯片和质谱技术的优点，目前已在前列腺癌、肺癌、乳腺癌等许多肿瘤中发现肿瘤相关蛋白。

基于表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术的慢性肾衰竭中医湿证尿液中相关蛋白研究

目的采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术研究慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)中医湿证患者的尿液蛋白标志物。方法采集CRF湿证患者90例和非湿证患者60例的尿液,采用H4蛋白芯片技术进行尿液蛋白质组学研究,用蛋白芯片阅读器PBSⅡ对芯片进行扫描、分析。结果 (1)湿证组与非湿证组尿液样本的蛋白质图谱在质荷比1000-20000范围内检测到25个差异蛋白峰(P<0.01)。(2)经生物信息学分析建立CRF中医湿证尿液蛋白预测模型,得到M/Z8654.96、M/Z2081.65、M/Z18667.3和M/Z2242.14共4个差异蛋白峰组成的生物标记物可以将湿证组和非湿证组样本较好地分类,其正确率84.7%,灵敏度为92.2%,特异性为73.3%。(3)湿证组与非湿证组尿液中差异蛋白峰经SwissProt数据库鉴定,可能为7种蛋白质。结论初步筛选出CRF中医湿证的尿液蛋白标志物,建立了CRF中医湿证尿液蛋白预测模型,通过数据库对尿液蛋白标志物进行了鉴定,为CRF中医湿证的临床辨证提供了一定的实验依据。

表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术筛选的肺腺癌血清标志蛋白与传统肿瘤标志物的比较

目的比较表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛选的肺腺癌血清标志蛋白与传统肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原(CA125)和细胞角蛋白19片断(CYFRA21-1)对肺腺癌诊断价值的差异。方法肺腺癌组和健康对照组各71例,按性别、年龄配对,采用SELDI-TOF-MS检测血清蛋白质质谱,筛选出血清肺腺癌标志蛋白。采用化学发光法检测血清CYFRA21-1、CEA、CA125和NSE水平。并比较联合检测对肺腺癌的诊断价值。结果①SELDI-TOF-MS检测结果:肺腺癌组有5个蛋白质峰明显呈高表达,该5个峰的相对分子质量分别为4047.79±1.60、4203.99±1.91、4959.81±2.13、5329.30±2.55和7760.12±4.11。②肺腺癌组血清CEA、CA125、NSE和CYFRA21-1水平分别为(54.38±12.79)μg/L、(130.45±54.36)mg/L、(16.85±4.65)μg/L和(23.45±5.75)μg/L,均显著高于健康对照组[(5.26±1.74)μg/L、(21.01±8.1 6)mg/L、(8.53±3.08)μg/L和(2.48±1.23)μg/L,P值均<0.05]。③5个蛋白质峰联合检测中,以3项指标阳性对肺腺癌的诊断效率最高(灵敏性、特异性分别为92.96%、90.14%);CEA、CAl25、NSE和CYFRA21-1联合检测中,2项指标阳性对肺腺癌的诊断效率较高(灵敏性、特异性分别为63.38%、56.34%)。结论SELDI-TOF-MS技术是一种快速、简便易行且高通量的分析方法,可直接筛选出相对特异的肿瘤标志蛋白,与传统肿瘤标志物相比,更利于肺腺癌早期诊断和筛查。

表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱技术在神经管缺陷胎儿母亲血清、尿液和羊水蛋白质标志物筛查中的研究

目的探讨利用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术结合分类与回归树分析(classification and regression tree analysis,CART)在筛选神经管缺陷胎儿母亲血清和尿液蛋白质标志物的应用。方法孕母血清样本31例,尿液样本35例和羊水样本20例用于检测。采用PBSIIC型蛋白质芯片阅读机读取数据。SELDI数据结果采用分类与回归树分析(CART)建立血清和尿液诊断模型,用于区分神经管缺陷组与正常对照组。结果与正常组比较,神经管畸形组血清中有8种蛋白质高表达,4种蛋白质低表达;尿液中有4种蛋白质高表达,1种蛋白质低表达;羊水中有6种蛋白质高表达,1种蛋白质低表达。4种蛋白质峰用于建立决策分类树诊断模型,血清诊断灵敏度88.20%,特异度100%;尿液诊断灵敏度80.00%,特异度93.33%。结论血清和尿液蛋白质谱的高灵敏度和特异度提示表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱结合分类与回归树分析能够筛选神经管缺陷胎儿和正常对照。

表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术研究神经管缺陷胎儿母亲尿液中蛋白质谱改变规律

目的探讨表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在筛选神经管缺陷胎儿母亲尿液中蛋白质标志物的应用。方法经超声确诊为神经管缺陷胎儿的孕妇20例和正常孕妇15例。神经管缺陷包括脊柱裂10例,无脑儿5例,脑积水5例。所有孕妇均取清晨空腹尿5ml,离心后取上清,选用CM10芯片检测。采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据。设定优化相对分子质量范围1000～30000Da。数据分析使用Ciphergen protein chip 3.1.1软件。结果共检测到39个尿液差异蛋白质峰,有统计学意义的差异蛋白质峰5个。病例组中有4种蛋白质高表达,相对分子质量分别为8320,8209,9099,10567;1种蛋白质低表达,相对分子质量3458。建立决策分类树,得到带有3个终结点的决策分类树,获得2个标志性蛋白质,分子量为9096,8244。进行留一法交叉验证后,神经管缺陷诊断模型的灵敏度为80.0%,特异度为93.3%。结论应用SELDI-TOF-MS技术可以在孕妇尿液中筛查出神经管缺陷的特异性蛋白质标志物,进一步可用于神经管缺陷产前早期无创诊断。

表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术筛查早期肺腺癌的临床价值

目的探讨表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛查结节状磨玻璃影的早期肺腺癌的临床应用价值。方法所有患者进行CT检查显示:病灶直径≤2cm,结节状磨玻璃影,且实性成分大于30%。对CT检查上述异常的患者,术前采用SELDI-TOF-MS进行血清蛋白指纹图谱检测,显示某一肺癌相关的蛋白峰增高,即考虑为早期肺腺癌。分别将SELDI-TOF-MS、CT检查检查结果与术后病理诊断结果进行对比,计算诊断的正确率、灵敏度和特异度。结果 CT检测的诊断正确率为72.29%(60/83),灵敏度为72.97%(54/74),特异度为66.7%(6/9);SELDITOF-MS检测的诊断正确率为97.50%(78/80),灵敏度为97.3%(72/74),特异度为100%(6/6)。两者比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论血清蛋白指纹图谱技术筛查结节状磨玻璃影的早期肺腺癌具有较高的灵敏度和特异度,可提高早期肺癌的正确率。

基于磁性金属有机框架材料的表面辅助激光解吸离子化质谱在食用油快速鉴定中的应用

以羧基化的Fe_3O_4为核,通过室温自组装方法合成了核壳结构的磁性沸石咪唑酯框架-8(Fe_3O_4@ZIF-8)微球。以此为基质,建立了一种基于磁性金属有机框架(Fe_3O_4@MOFs)的表面辅助激光解吸离子化质谱(SALDI-MS)新方法。分别考察了干点法、薄层法、三明治法3种不同制样方法对质谱检测信号的影响。研究表明,"三明治"样品制备法具有基质分布均匀、"甜点"效应小、灵敏度高、信号重现性好等优点。以花生油、猪油、菜籽油中的甘油三酯为研究对象,利用SALDI-MS方法实现了对不同食用油的快速鉴别。与传统MALDI-MS相比,基于Fe_3O_4@ZIF-8的SALDI-MS方法可以获得更丰富的油品成分信息、更好的质量分辨率和更高的检测灵敏度,可成功应用于食用油实际样品的快速鉴定。

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术筛查肺癌血清特异性蛋白质及其临床意义

目的:探讨用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛查肺癌血清特异性蛋白质的临床意义。方法:应用SELDI-TOF-MS对35例正常对照组、43例治疗前肺癌病人的血清样品进行蛋白质指纹图谱测定,用BioMarker Wizard 3．01及BioMarker Parrern System 5．01分析软件对测得的数据进行处理及建立诊断模型。结果:共检测到251个蛋白质峰,筛选出差异蛋白质峰11个,以质荷比(m/z)分别为M2799_26,M3227_41,M5739_70和M8164_30的4个蛋白质峰为依据组合构建分类决策树模型,分出5个终节点。决策树模型的原始判别总准确率为91．0%(71/78),敏感性为88．4%(38/43),特异性为94．3%(33/35);交叉验证总准确率为85．9%(67/78),敏感性为88．4%(38/43),特异性为82．9%(29/35)。结论:SELDI-TOF-MS在肺癌血清特异性蛋白质的筛选及诊断模型的建立有一定的临床意义。

表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱在甲状腺癌诊断及临床分期中的应用

目的:用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析正常人和甲状腺癌患者血清蛋白指纹图谱的变化,建立能鉴别正常人和甲状腺癌及Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌和Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌患者的诊断模型。方法:应用SELDI-TOF-MS技术检测72例血清标本的蛋白质质谱,其中甲状腺癌40例(Ⅰ-Ⅱ期26例,Ⅲ-Ⅳ期14例),正常人32例。应用支持向量机和判别分析的方法分析质谱数据,建立甲状腺癌诊断模型并留一法交叉验证。结果:区分甲状腺癌和正常人的诊断模型交叉检验敏感性为100%,特异性为86%,总的符合率为93%;区分Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌和Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌患者的诊断模型对Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌检出的敏感性为77%,特异性为86%,对Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌检出的敏感性为86%,特异性为77%,总的符合率为80%。结论:应用SELDI-TOF-MS技术平台和生物信息技术建立的诊断模型为甲状腺癌的早期诊断及临床分期提供了新的手段。

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术在病原微生物分析中的应用

病原微生物引起的感染性疾病是危害人类健康、导致患者死亡的重要原因之一。然而，目前病原微生物的鉴定主要依赖传统的鉴定方法，不能满足临床快速诊断和及时治疗的需要。

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术在白血病诊断中的应用

本研究对白血病患者及健康对照者的血清样本进行检测分析,筛选新的生物标记物并建立白血病的蛋白质指纹图谱诊断模型。应用SELDI-TOF-MS技术检测40例白血病标本及37例健康对照标本,用Biomarker Wizard软件分析筛选新的生物标记物,使用Biomarker Patterns 5.0软件进行标记物的比较判别,建立白血病决策树诊断模型。结果表明,蛋白质指纹图谱分析发现有22个差异显著的蛋白峰(P<0.05);由m/z为4650,8609及11660建立的决策树诊断模型对白血病的诊断灵敏度为97.5%(39/40),特异性为91.9%(34/37)。结论:由3个蛋白标记物构成的白血病蛋白质指纹图谱诊断模型为白血病的诊断提供了新的借鉴和参考。

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术及其在器官移植领域中的应用

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术是较有效的蛋白质组学研究手段,虽然目前尚未应用于临床常规实验室诊断,但已广泛应用于肿瘤、传染病、心血管病和神经系统疾病的研究。近年来,SELDI-TOF-MS技术试用于器官移植领域,如急性移植排斥反应的早期诊断、移植相关疾病的诊断、疾病相关蛋白的鉴定,探讨疾病的发生机制,展现了该技术在器官移植中的广阔应用前景。

应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱联合磁珠技术寻找肺癌血清蛋白标志物

目的 建立肺癌蛋白质指纹图谱诊断模型,探讨用于肺癌早期诊断及手术疗效评估的血清蛋白标志物。方法 收集38例肺癌患者、12例肺部良性肿瘤患者及32名正常对照者的血清标本,应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS）联合磁珠技术,获得蛋白质指纹图谱,采用BPS分析软件对数据分组及相关性进行分析,初步建立肺癌的血清蛋白质指纹图谱诊断模型,并验证其诊断效率;同时对比肺癌患者手术前后的差异蛋白质谱,结合肺癌的诊断模型,选取合适的蛋白作为肺癌手术疗效的观察指标。结果 在质荷比为1000-50 000范围内,肺癌患者、肺部良性肿瘤患者和正常对照者之间共检测到215个蛋白质峰。其中,质荷比为1115.37、1929.70、3217.57、3246.34、3318.57、11 508.90的6个蛋白质峰表达差异具有统计学意义（P〈0.05）。决策树模型对肺癌的原始判别敏感性为92.11%（35/38）,特异性为90.91%（40/44）;交叉验证敏感性为86.67%（13/15）,特异性为86.67%（13/15）。其中质荷比为1115.37、1929.70、3246.34和11 508.90的蛋白质峰在肺癌患者中明显升高（P〈0.05）,当肺癌患者手术治疗后表达量较术前明显降低（P〈0.01）,表明这4个蛋白质峰对肺癌的诊断及疗效判定具有潜在应用价值。结论 应用SELDI-TOF-MS技术建立的肺癌血清蛋白质指纹图谱诊断模型具有较高的敏感性和特异性,为发现肺癌早期生物标志物并判断疗效奠定基础。