表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术筛选蕈样肉芽肿血清生物标志物

目的应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛选蕈样肉芽肿患者血清中的生物标志物。方法采用CM10蛋白质芯片捕获14例蕈样肉芽肿患者(研究组)和17例对照者(对照组)血清中的蛋白质,结合Biomarker Wizard软件进行分析。结果所有标本在相对分子质量0~50 000范围内均能检测出131个左右的蛋白峰。两组血清样本的蛋白质指纹图谱存在14个差异表达蛋白质峰,其中相对分子质量为7 670的蛋白质峰与C-C基序趋化因子22相符。结论SELDI-TOF-MS可用于蕈样肉芽肿患者血清生物标志物的筛选。

表面增强激光解吸/离子化蛋白质芯片技术在肝细胞癌早期诊断研究中的应用

随着蛋白质组学研究技术的飞速发展,集样品分离、纯化、检测和数据分析为一体的表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱蛋白质芯片技术已成为蛋白质组学研究的有力工具,它可以快速、简便地直接检测各种体液及分泌物,具有标本用量少、高通量分析等特点,并在筛选、鉴定肿瘤标志物及临床疾病的诊断、防治方面发挥了重要作用。本文介绍了该技术的特点和分析步骤,以及该技术在肝细胞癌早期诊断中的应用情况,并对其前景进行展望。

表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术筛选的肺腺癌血清标志蛋白与传统肿瘤标志物的比较

目的比较表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛选的肺腺癌血清标志蛋白与传统肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原(CA125)和细胞角蛋白19片断(CYFRA21-1)对肺腺癌诊断价值的差异。方法肺腺癌组和健康对照组各71例,按性别、年龄配对,采用SELDI-TOF-MS检测血清蛋白质质谱,筛选出血清肺腺癌标志蛋白。采用化学发光法检测血清CYFRA21-1、CEA、CA125和NSE水平。并比较联合检测对肺腺癌的诊断价值。结果①SELDI-TOF-MS检测结果:肺腺癌组有5个蛋白质峰明显呈高表达,该5个峰的相对分子质量分别为4047.79±1.60、4203.99±1.91、4959.81±2.13、5329.30±2.55和7760.12±4.11。②肺腺癌组血清CEA、CA125、NSE和CYFRA21-1水平分别为(54.38±12.79)μg/L、(130.45±54.36)mg/L、(16.85±4.65)μg/L和(23.45±5.75)μg/L,均显著高于健康对照组[(5.26±1.74)μg/L、(21.01±8.1 6)mg/L、(8.53±3.08)μg/L和(2.48±1.23)μg/L,P值均<0.05]。③5个蛋白质峰联合检测中,以3项指标阳性对肺腺癌的诊断效率最高(灵敏性、特异性分别为92.96%、90.14%);CEA、CAl25、NSE和CYFRA21-1联合检测中,2项指标阳性对肺腺癌的诊断效率较高(灵敏性、特异性分别为63.38%、56.34%)。结论SELDI-TOF-MS技术是一种快速、简便易行且高通量的分析方法,可直接筛选出相对特异的肿瘤标志蛋白,与传统肿瘤标志物相比,更利于肺腺癌早期诊断和筛查。

表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱检测宫颈浸润癌相关蛋白质的研究

目的探讨宫颈浸润癌患者与健康女性间血清中的蛋白质差异,以寻找评价治疗效果和判断预后的生物学指标,为制定合理的治疗方案寻找依据。方法通过表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(sur-face enhanced lazar desorption/ionisation-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS),铜离子结合芯片(immobilized metal affinity capture arrays-Cu,IMAC-Cu)以及配套软件,检测49例宫颈浸润癌,71例年龄相配的健康女性血清,筛选出有分类意义的差异蛋白,寻找出合理的运算规则,构建决策树分类模型。结果宫颈浸润癌与正常对照组比较,共有47种蛋白质质谱峰差异有显著性(P<0.05),有分类意义的蛋白质有6种,质荷比为M8929.31,M7930.52,M9127.31,M8141.01,M7963.06,M9280.63,在宫颈浸润癌患者血清中低表达,含量明显低于正常对照,用质荷比为M8929.31的蛋白质建立决策树分类模型,分类正确率为98.33%(118/120),敏感性为97.96%(48/49),特异性为98.59%(70/71)。结论质荷比为M8929.31,M7930.52,M9127.31,M8141.01,M7963.06,M9280.63的一组蛋白质与宫颈浸润癌密切相关,有可能成为评价宫颈癌治疗效果以及预后判断的一组生物学指标。

表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术筛查早期肺腺癌的临床价值

目的探讨表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛查结节状磨玻璃影的早期肺腺癌的临床应用价值。方法所有患者进行CT检查显示:病灶直径≤2cm,结节状磨玻璃影,且实性成分大于30%。对CT检查上述异常的患者,术前采用SELDI-TOF-MS进行血清蛋白指纹图谱检测,显示某一肺癌相关的蛋白峰增高,即考虑为早期肺腺癌。分别将SELDI-TOF-MS、CT检查检查结果与术后病理诊断结果进行对比,计算诊断的正确率、灵敏度和特异度。结果 CT检测的诊断正确率为72.29%(60/83),灵敏度为72.97%(54/74),特异度为66.7%(6/9);SELDITOF-MS检测的诊断正确率为97.50%(78/80),灵敏度为97.3%(72/74),特异度为100%(6/6)。两者比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论血清蛋白指纹图谱技术筛查结节状磨玻璃影的早期肺腺癌具有较高的灵敏度和特异度,可提高早期肺癌的正确率。

应用蛋白质芯片表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术探讨胃癌远处转移的机制

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,发病率及病死率居高不下。由于超过50%的患者诊断时已属晚期,因此根治手术切除率较低,5年生存率仅25%~30%。治疗失败的主要原因是肿瘤转移、复发。因此早期诊断、及早发现胃癌远处微小病灶、及早进行干预,将会大大提高胃癌患者的临床缓解率和长期生存率。

表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱在甲状腺癌诊断及临床分期中的应用

目的:用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析正常人和甲状腺癌患者血清蛋白指纹图谱的变化,建立能鉴别正常人和甲状腺癌及Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌和Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌患者的诊断模型。方法:应用SELDI-TOF-MS技术检测72例血清标本的蛋白质质谱,其中甲状腺癌40例(Ⅰ-Ⅱ期26例,Ⅲ-Ⅳ期14例),正常人32例。应用支持向量机和判别分析的方法分析质谱数据,建立甲状腺癌诊断模型并留一法交叉验证。结果:区分甲状腺癌和正常人的诊断模型交叉检验敏感性为100%,特异性为86%,总的符合率为93%;区分Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌和Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌患者的诊断模型对Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌检出的敏感性为77%,特异性为86%,对Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌检出的敏感性为86%,特异性为77%,总的符合率为80%。结论:应用SELDI-TOF-MS技术平台和生物信息技术建立的诊断模型为甲状腺癌的早期诊断及临床分期提供了新的手段。

发展表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术用于评估职业性暴露于丙烯酰胺环境的生物标记物

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)是一种用来检测生物样品中蛋白质的生物分析技术。血液或尿液中的蛋白质如果受毒性试剂的影响可能会发生变化。丙烯酰胺是一种广泛使用的工业化学品,很可能是一种致癌物,因此人们很担心暴露在丙烯酰胺中会产生健康问题。丙烯酰胺及其代谢产物环氧丙酰胺很容易与蛋白质结合。目前有多种分析技术评估丙烯酰胺对尿液和血红蛋白的影响,但是这些分析方法耗时而且昂贵。本文考察了SELDI-TOF-MS能否作为一种筛查工具以鉴定受丙烯酰胺影响而发生修饰的尿液蛋白质或血红蛋白。

应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱筛选大肠癌血清特异标志物

目的采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测大肠癌患者与健康对照者血清中蛋白的差异,为大肠癌的早期诊断提供理论依据。方法应用SELDI-TOF-MS技术及弱阳离子蛋白质芯片(WCX2)检测36例健康成人(对照组)和36例大肠癌患者(大肠组)血清中蛋白含量。结果在质荷比为2000Da～30000Da的范围内,两组样本检测到了对照组82个蛋白峰。其中3604.240Da蛋白峰大肠癌组明显高于对照组(P<0.05),而12861.368Da的蛋白峰对照组明显高于大肠癌组(P<0.05)。利用这两个蛋白筛查大肠癌的特异度为86.11%(31/36),敏感度为77.78%(28/36),阳性预测值为87.5%。结论质荷比为3604.240Da与12861.368Da的两个蛋白峰可以作为大肠癌早期诊断的备选标志物。

表面增强激光解吸/离子化质谱蛋白质芯片技术在筛选肾癌患者尿液标记物中的应用

目的 用表面增强激光解吸 /离子化 飞行时间质谱 (SEDLI TOF MS)蛋白质芯片技术筛选肾癌患者尿液相对特异标记物。方法 肾癌组 4 0例 ,均经手术病理和 /或临床影像证实 ;正常人群组 4 0名 ,非肾癌其他泌尿系疾病组 4 0例 ,二组合并为对照组。用IMAC Cu 3芯片检测各尿液标本。结果 将肾癌组与对照组尿液标本结果相比较 ,发现肾癌差异明显的潜在标记物 4个 ,相对分子量分别为 4 0 2 0、4 6 37、5 0 70、5 5 0 0 ,分别以 2 0、5 0、5 0、5 0为界值时 ,其诊断肾癌的敏感性为5 7 5 %、6 6 7%、6 3 7%、6 5 % ,特异性为 86 2 %、95 %、82 5 %、75 % ;其中 4 6 37、5 0 70差异表达蛋白质在对照组中高表达 ,肾癌组中低表达 ;而 4 0 2 0、5 5 0 0差异表达蛋白质在肾癌组中高表达 ,对照组中低表达。结论 SELDI TOF MS蛋白质芯片技术是一种快速、简便易行、用量少和高通量分析方法 ,不仅能直接筛选出肾癌患者尿液中相对特异的潜在标记物 ,而且具有较好的临床应用价值。

表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术在肝脏肿瘤和肝移植蛋白质组学研究中的作用

一、表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术的特点和用途 蛋白质是生命活动的真正执行者，各种疾病的发展过程中伴有蛋白质的动态变化，蛋白质表达水平的变化早于症状出现之前，蛋白质组学的研究能提供大量完整的蛋白质谱变化，为疾病的早期诊断、治疗和预防提供重要的科学依据。无论基因突变还是基因转录或翻译后的变化，均导致基因表达产物蛋白质的改变，从而改变了蛋白质信号通路，负性抑制信号减弱或旁路传递正性激活信号，为肿瘤细胞的转化、生存创造条件，对肿瘤生长的不同阶段（癌前病变、癌发生和治疗过程）中出现差异表达的蛋白质进行定性、定量分析，能够发现肿瘤发生、发展过程中关键性因子及诊断标志物，利于早期诊断、疾病进展监测、确定新的治疗靶点。

表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱在胃炎诊断中的应用研究

胃炎是常见消化道疾病之一。目前确诊主要依赖胃黏膜活检，但这种创伤性诊断会给患者造成痛苦。而现用的诸多实验室方法的假阳性较高。本研究用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术对胃炎患者、胃溃疡、胃癌和健康志愿者血清蛋白质行对比分析，以筛选可用于临床胃炎诊断的特异性生物标志。

表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱血清蛋白指纹图谱在喉癌诊断中的应用

目的：用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF—MS）分析喉癌和正常人血清蛋白指纹图谱的变化，建立能鉴别喉癌和正常人血清标志物的诊断模型。方法：收集46例喉癌患者和51例正常人的血清，用WCX2（弱阳离子交换芯片）蛋白质芯片和SELDI—TOF—MS检测蛋白质质谱的表达。用Biomarker Patterns Software分析软件进行数据处理，建立区分喉癌与正常人血清中蛋白质谱差异表达模型，并用此模型对另外12例喉癌患者及13例正常人进行盲法交叉验证。结果：在分子量2000～20000范围内，共检测到76个有差异的蛋白峰，其中27个有统计学意义（P〈0．05），建立了由3个差异蛋白组成的喉癌诊断模型，其准确率为88．7％（86／97），敏感性为87％（40／46），特异性为90．2％（46／51），双盲法验证结果其敏感性为83．3％（10／12），特异性为84．6％（11／13）。结论：用SELDI—TOF—MS技术初步建立的区分喉癌与正常人血清蛋白差异表达模型可以区别喉癌和正常人，可能为喉癌的早期诊断提供了新的手段。

应用SELDI-TOF-MS技术初步建立结直肠癌区域淋巴转移分类树模型

目的寻找血清中与结直肠癌淋巴结转移相关的特异性生物标志物。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测结直肠癌患者血清的蛋白质谱,利用配套软件进行蛋白质峰值鉴定、聚类并建立分类树模型。70例伴区域淋巴结转移的结直肠癌患者和75例年龄、性别匹配,无区域淋巴结转移的结直肠癌患者作为训练组,通过软件分析得到分类树模型,以35例伴区域淋巴结转移的结直肠癌患者和30例年龄、性别匹配,无区域淋巴结转移的结直肠癌患者作为测试组进行独立样本的双盲验证。结果共识别出46种组间差异蛋白,其中由质荷比(M/Z)为3104、3781、5867、7970、9290五种蛋白构成的分类树模型可以有效鉴别结直肠癌患者伴或不伴区域淋巴结转移,灵敏度和特异度分别为94.3%(66/70)和100.0%(75/75),经双盲验证其灵敏度、特异度、阳性预测值分别为91.4%(32/35)、96.7%(29/30)、97.0%(32/33)。结论所建立的分类树模型可以准确鉴别结直肠癌患者伴或不伴区域淋巴结转移,对结直肠癌的术前筛查有重要价值。

应用seldi-TOF MS技术分析高低转移肺腺癌细胞株差异表达蛋白

目的分析体外培养的高低转移肺癌细胞株蛋白质表达差异。方法采用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术检测了两种肺癌细胞株(肺腺癌细胞高转移株Anip973和肺腺癌细胞低转移株AGZY)的蛋白质谱。分析不同细胞株之间的蛋白质表达差异。每种细胞用WCX2和IMAC3两种芯片检测。采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的数据采用Ciphergen公司的Proteinchip Software 3.2.1软件分析。结果获得WCX2和IMAC3两种蛋白芯片上Anip973和AGZY细胞株蛋白质谱图谱;在对两种肺癌细胞株的蛋白质谱比较时发现,有14个蛋白质在两种肺癌细胞株中出现明显的变化,其中9个差异蛋白在Anip973细胞中高表达,5个差异蛋白在Anip973细胞中低表达。结论高低转移肺腺癌细胞之间蛋白质谱表达比较时有差异蛋向。

SELDI-TOF-MS技术检测肺腺癌血清生物标志物

[目的]用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术寻找肺腺癌病人血清蛋白标志物,探讨吸烟与肺腺癌血清中蛋白质组谱变化的关系。[方法]收集肺腺癌病人和正常对照人群血清各50例,按照年龄、性别、吸烟史进行一一配对,采用WCX2芯片技术对血清蛋白进行捕获,用蛋白芯片阅读器PBSⅡ对芯片进行扫描、分析。[结果]肺腺癌病人血清蛋白图谱与正常对照组相比,存在10个差异表达蛋白(P<10-5),其中包括6个高表达蛋白,分子量分别是4050Da、4205Da、5329Da、5899Da、7761Da、9285Da,4个低表达蛋白,分子量分别是2564Da、2932Da、3082Da、3442Da。肺腺癌病人有吸烟史的与不吸烟的进行比较,血清蛋白表达差异无显著性(P>0.01)。[结论]SELDI-TOF-MS技术能筛选出灵敏度和特异性较好的差异蛋白,为肺腺癌的早期发现提供了一种新的、无创实验方法。

蛋白质芯片表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术在肿瘤早期诊断中的研究进展

蛋白质芯片表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱(surface enhanced laser desorp-tion/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术是近年发展起来的蛋白质组学研究的新技术,在各种肿瘤的早期诊断和研究中,具有广阔的发展前景及临床意义。就其技术原理、组成、在肿瘤早期诊断中的运用及发展前景作一综述。

SELDI-TOF-MS技术在肝癌诊断和介入治疗评价中的价值

目的:建立肝癌血清学诊断模型,探讨评估SELDI-TOF-MS技术在肝癌诊断和介入治疗评价中的价值.方法:用弱阳离子交换芯片(CM10芯片)和表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪(surface-enhanced laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术,测定60例肝癌患者和60例正常对照者的血清蛋白质指纹图谱,应用BiomarkerWizard统计软件比较肝癌组和正常对照组血清蛋白质表达的差异性,采用Biomarker Pattern软件分析数据建立肝癌诊断模型,比较介入治疗前后血清蛋白质指纹图谱的差异性.结果:在质荷比(M/Z)为2000-10000范围内,和正常血清比较,肝癌的差异峰有3个(M/Z为4182Da、5710Da、6992Da;P<0.01),4182Da和5710Da下调,6992Da上调.用这3个差异蛋白峰建立肝癌诊断模型,诊断肝癌的灵敏度为93.3%(28/30),特异度为90.0%(27/30),正确率为91.7%(55/60),约登指数为0.833.差异蛋白峰(M/Z4182Da)在介入术后1mo明显上调(P<0.05).结论:应用SELDI-TOF-MS技术进行肝癌血清蛋白质指纹图谱分析,建立肝癌诊断树模型,对肝癌的诊断有一定的价值;筛选出的差异蛋白峰对肝癌的介入治疗评估有一定的应用价值.

应用SELDI-TOF-MS技术筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株差异表达蛋白

背景与目的:人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3及其在裸鼠体内建立的淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞株,为卵巢癌转移分子机制的研究提供了细胞模型。本研究应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片分析筛选卵巢癌淋巴结定向高转移与非定向转移细胞株之间的蛋白质表达差异。方法:采用动物实验测定SKOV3、SKOV3-pm2和SKOV3-pm3三种细胞株的淋巴结转移率。应用表面增强激光解吸离子化-飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption and ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测各细胞株提取的胞浆总蛋白和分泌蛋白,每种细胞分别采用CM-10型弱阳离子交换芯片和IMAC-3型固定金属亲和芯片检测。应用Ciphergen Protein Software3.2.0软件和Biomarker Wizard软件对采集3组细胞的蛋白峰进行比较,峰强度相差0.5倍以上者定义为差异蛋白。结果:动物实验显示,细胞株SKOV3及高转移亚克隆SKOV3-pm2、SKOV3-pm3的淋巴结转移率分别为20%、90%和100%,前者与后二者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。获得CM-10和IMAC3两种蛋白芯片上SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞株蛋白质谱图谱,对比发现:质荷比(m/z)为6971、7475、9089、9453、10103、11655的胞浆蛋白及质荷比(m/z)为4746的分泌蛋白在上述三种细胞株中存在不同程度差异表达。结论:应用SELDI-TOF-MS技术结合固定金属亲和芯片和弱阳离子交换芯片,可有效筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株中的特异性表达蛋白;寻找到的差异蛋白与淋巴结定向高转移潜能密切相关。