应用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱对结肠癌组织蛋白质的初步分析

[目的]检测结肠癌组织与正常结肠黏膜组织中差异蛋白质的表达,寻找与结肠癌相关的肿瘤标记物。[方法]采用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱仪(SELDI-TOF MS)对42例结肠癌组织及其配对的正常结肠黏膜组织进行蛋白质指纹图谱检测。[结果]结肠癌与正常对照共有38种蛋白质质谱峰强度差异有统计学意义(P<0.01),有分类意义的蛋白质有7种,质核比(M/Z)为M1678.47、M2182.19、M3358.44的蛋白质在大肠癌组织中低表达,M/Z为M1688.43、M2718.72、M3241.60、M3893.13的蛋白质在大肠癌组织中高表达。[结论]利用SELDI-TOF MS技术筛选出的具有分类意义的7种蛋白质,有可能成为大肠癌诊断及预后判断的一组生物学指标。

SELDI-TOF-MS技术对胃炎诊断的应用

目的采用蛋白质剖析技术同时解析和分析多种蛋白质,从而找出更好的生物标记物,用于检测胃炎。方法用SELDI-TOF-MS技术及配套蛋白质芯片检测30例慢性胃炎和64例非胃炎疾病患者的血清蛋白质指纹图谱,建立诊断模型。结果2个蛋白质峰[5084和8691质荷比(m/z)]组合构建的诊断模型鉴别慢性胃炎和健康志愿者,灵敏度为96.66%(29/30),特异性为93.55%(29/31)。2个蛋白质峰(5910和6440m/z)组合的诊断模型鉴别胃炎和胃癌患者的灵敏度为96.6%(29/30),特异性为90.9%(30/33)。结论SELDI-TOF-MS在慢性胃炎的诊断尤其是早期诊断及候选标志物筛选等方面具有一定价值,值得进一步深入研究。

应用SELDI-TOF-MS技术初步建立结直肠癌分类树模型

目的:分析结直肠癌期患者血清蛋白质组变化,初步建立结直肠癌期分类树模型.方法:将335例血清样本(其中结直肠癌患者169例,健康人166例)随机分为训练组和测试组,将血清样本加至IMAC30-Cu2+蛋白芯片,利用SELDI-TOF-MS得到血清蛋白质谱,利用Biomarker Wizard软件进行蛋白峰值鉴定和聚类.利用Biomarker Pattern以训练组建立由1个差异蛋白组成的结直肠癌期分类树模型,以测试组进行独立样本的双盲验证.另外,应用电化学发光免疫测定法检测测试组血清样本CEA.结果:软件识别了59个质峰,其中由质荷比为5765的蛋白构成的分类树模型可以有效鉴别结直肠癌患者与正常人,灵敏度和特异度分别是98.81%及100.00%,经双盲验证其灵敏度,特异度及阳性预测值分别是97.65%,98.80%及98.81%.CEA的灵敏度及特异度低于SELDI分类树模型(P<0.05).结论:SELDI-TOF-MS检测得到的血清蛋白质组分类树模型可以准确的鉴别结直肠癌患者与正常人,对结直肠癌的筛查有重要的意义.

SELDI-TOF-MS筛选微小病变型肾病综合征尿液生物标志物

目的探讨应用优化的表面增强激光解析电离-飞行时间-质谱(surface enhanced laser desorption/ionizationtime of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)进行微小病变型肾病综合征(minimal-changed nephrotic syndrome,MCNS)大鼠尿液生物标志物筛选的意义。方法 SD大鼠30只随机分为正常对照组(n=10)、模型对照组(n=10)和强的松治疗组(n=10)。除正常对照组外,其余大鼠经尾静脉一次性注射阿霉素5.5mg/kg复制MCNS模型,造模10d后分别予以强的松和蒸馏水灌胃治疗。21d后收集大鼠尿液,经弱阳离子交换芯片CM10捕获蛋白质,应用SELDI-TOF-MS获取3组大鼠的尿液蛋白质指纹图谱,采用Biomarker wizard软件比对分析差异蛋白。结果优化实验条件后获得较理想的尿液蛋白质指纹图谱,质控峰强度的平均CV值为18.0%(7.50%～35.89%)。在模型对照组与正常对照组之间检测到不同质荷比处有33个具统计学意义的差异蛋白峰(P<0.05),其中21个蛋白表达上调,12个蛋白表达下调。在正常对照组、模型对照组与强的松治疗组之间有6个蛋白质表达存在差异(P<0.05),这些差异蛋白峰在模型对照组中高表达,而在强的松治疗组中蛋白表达下调,峰强度接近正常对照组。结论通过优化实验条件并实行质量控制,SELDI-TOF-MS可为MCNS大鼠尿液生物标志物的筛选提供一个可行的检测途径。所获得的差异性蛋白峰对MCNS的早期诊断、治疗监测和寻找药物治疗的靶目标具有重要的意义。

利用SELDI-TOF MS筛选不同中医证型胃癌的差异蛋白

目的探讨利用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)比较不同中医证型胃癌患者的血清蛋白指纹图谱并筛选其差异蛋白。方法选取本院收治的36例胃癌患者,依据中医证型的不同分为虚证组19例与实证组17例。针对两组样本均应用SELDI TOF-MS检测其血清的蛋白指纹图谱,并通过相关数据处理软件进行分析。结果实证组与虚证组患者中4 620 m/z的蛋白质峰具有显著差异,其原始判别中特异度为94.1%(16/17),灵敏度为94.7%(18/19),准确率为94.4%(34/36)。结论应用SELDI-TOF MS检测胃癌患者的蛋白指纹图谱对其中医辨证分型具有可靠的筛选作用,能够对中医治疗起到一定的指导作用。

应用SELDI-TOF-MS技术筛选不同分型卵巢上皮性癌血清标志物

目的:应用表面增强激光解析离子化—飞行时间—质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选不同分型的卵巢上皮性癌患者血清标志物。方法:选择卵巢上皮性癌68例,健康妇女87例,卵巢良性肿瘤组20例血清,以及体外培养的卵巢恶性肿瘤细胞系SKOV3、A2780、HO8910、HO8910PM为材料,采用WCX2蛋白质芯片分析血清和体外培养的恶性肿瘤细胞系蛋白质表达差异蛋白,选择卵巢上皮性癌血清与细胞均存在表达的差异蛋白建立卵巢上皮性癌诊断模型进行验证。结果:WCX2芯片捕获的M/Z为5343和5640蛋白质,在卵巢浆液性上皮癌和浆液性上皮癌细胞系HO8910、HO8910PM中均上调表达。以上述2个蛋白质建立诊断模型判别浆液性卵巢癌的敏感性为97.8%,特异性为82.7%,优于CA125的检测结果。结论:M/Z为5343和5640蛋白质在卵巢浆液性上皮癌发生和发展的过程中的变化可以反映到血清中,而且可以验证血清标志蛋白的组织特异性,为其作为卵巢癌的肿瘤标志物提供强有力的支持。

河南林州食管癌高发区食管癌和癌前病变患者血清蛋白质质谱

背景与目的:食管癌和癌前病变组织中部分分子改变可在血液中反映出来,但这些指标的灵敏度和特异性较低,临床应用受到限制。血清蛋白质质谱分析技术有助于筛选癌变密切相关蛋白。本研究通过探讨食管癌高发区人群食管正常粘膜(normal,NOR)、食管上皮基底细胞过度增生(basalcellhyperplasia,BCH)、不典型增生(dysplasia,DYS)和食管癌(esophagealcarcinomc,EC)患者的血清蛋白质质谱的变化特征,为筛选和建立早期诊断和高危人群检测的血清学指标提供理论依据。方法:采用弱阳离子结合芯片(WCX2)及表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测EC高发区无症状普查人群130人(NOR63人、BCH40人、DYS27人)和高发区EC30人的血清蛋白质质谱进行分析。应用BiomarkerPattern软件建立决策树分类模型,经10倍交叉验证得到该分类模型进行验证,测试组病变人群的诊断率和特异性(排除率)。结果:BCH组质荷比(M/Z)为M9306.61u的一种、DYS组M/Z为M13765.90u的一种及EC组M/Z为M2942.15u和M15953.40u的两种蛋白质分别建立决策树分类模型,训练组BCH、DYS和EC的敏感性(检出率)分别为57.5%(23/40)、88.8%(24/27)和96.6%(29/30),特异性分别为96.8%(61/63)、63.4%(40/63)和92.0%(58/63);测试组BCH、DYS和EC敏感性分别为57.5%(23/40)、66.6%(18/27)和60.0%(18/30),特异性为95.2%(60/63)、71.4%(45/63)和84.1%(53/63)。结论:M/Z为M9233.09u、M13657.15u、M2918.91u和M15827.37u的4种蛋白质可能包含有可用于食管癌高发区人群筛查的血清标记物,血清蛋白质质谱检测为食管癌和癌前病变的诊断和筛查提供了新的手段。

高发区自然人群贲门癌血清蛋白指纹图诊断模型的建立及临床价值

目的用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELD I-TOF-MS)分析食管癌高发区自然人群中贲门癌和正常对照血清蛋白表达谱的改变,筛选并建立高发区贲门癌血清蛋白指纹图诊断模型并探究其临床价值。方法采用CM10蛋白芯片及SELD I-TOF-MS技术对34例贲门癌和38例正常对照者血清蛋白指纹图谱进行检测,所得结果用ZUC I-蛋白芯片数据分析系统(ZUC I-Prote in Ch ip Data Analyze System)软件包分析,建立贲门癌蛋白指纹图诊断模型,并用留一法交叉验证作为评估模型、判别效果的方法。结果通过软件包运算,用3个质荷比峰(5 643.457 93、8 570.821 26、15 940.153 3 m/z)建立了贲门癌蛋白指纹图诊断模型,其准确度93.06%,敏感度85.29%,特异度100%,阳性预测值100%。结论本组建立的诊断模型可以有效区分贲门癌和健康人,为肿瘤高发区贲门癌的诊断与筛查提供了一条崭新途径。

食管贲门双源癌与单发食管癌和贲门癌基因组与蛋白质组对比

目的:对食管贲门双源癌和单发食管癌及单发贲门癌患者血清蛋白质组和癌组织基因变化差异进行分析,筛选食管癌、贲门癌关键候选蛋白和基因。方法:采用表面增强激光解析离子化-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)与比较基因组杂交(CGH)技术分析比较食管贲门双源癌(4例)和单发食管癌(107例)、单发贲门癌(86例)患者血清蛋白质组和癌组织全基因组。结果:根据SELDI-TOF-MS蛋白质组所筛选的候选蛋白与CGH所筛选的基因进行一致性对比分析发现:双源癌中食管癌血清蛋白质组和癌组织CGH变异基因位点相一致的蛋白有14种(52%,11/21);双源癌中贲门癌与单发贲门癌位点相一致的蛋白有2种(Beta-defensin 123,GARP);双源癌、单发贲门癌和单发食管癌3者相一致的蛋白有1种(sPLA2-ⅡA)。结论:所发现的基因变异位点与蛋白质组候选蛋白对比相一致的17种蛋白可能是食管和贲门癌变关键候选蛋白和基因。

血清蛋白指纹图谱筛选胃癌血清标志物的初步探讨

目的利用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱仪及其配套蛋白质芯片筛选胃癌生物学标志物,初步探讨建立的诊断模型在胃癌诊断中的临床意义。方法用美国Ciphergen公司研制的蛋白指纹图谱仪和蛋白质芯片检测40例胃癌患者、20例胃溃疡患者和20例正常人血清蛋白质的相对含量,用SPSS 11.5软件分析处理数据,筛选标志物,建立诊断模型。结果在正常人中未发现差异蛋白质峰表达;胃溃疡患者中仅1例有差异蛋白质峰表达,质荷比分别为5910和4095;在胃癌中共发现5个差异有统计学意义的蛋白质峰表达,质荷比分别为:3300、5329、4095、5910和8691。筛选质荷比为4095、5910和8691建立诊断模型,诊断灵敏度和特异度分别为92.5%和97.5%。结论蛋白指纹图谱技术在胃癌的早期诊断及筛选生物学标志物方面有很大的价值,值得进一步研究及推广应用。

滋阴清热方对阴虚内热证型系统性红斑狼疮患者外周血单—核细胞蛋白表达谱的影响

目的:观察滋阴清热方对SLE阴虚内热证患者外周血单一核细胞(PBMC)蛋白表达谱的影响。方法:用滋阴清热含药血清与阴虚内热型SLE患者的PBMC共孵育,用表面增强激光解析电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)检测检测孵育后PBMC蛋白表达谱。结果:滋阴清热含药血清和空白对照比较,3个蛋白峰表达有统计学差异;滋阴清热含药血清和大鼠空白血清比较,1个蛋白峰表达有统计学差异。结论:滋阴清热含药血清对阴虚内热证型系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞蛋白表达谱的具有影响,SELDI-TOF-MS是寻找SLE患者PBMC表达差异蛋白的有效方法,结果对SLE研究具有积极意义。

血清蛋白质谱模型对胃腺癌诊断的应用性研究

[目的]探讨用蛋白质芯片技术筛选胃腺癌患者血清蛋白质表达谱,寻找血清中的标志性蛋白。[方法]采用蛋白质生物芯片表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI)技术,运用SAX2(StrongAnionicExchanger)蛋白质芯片检测胃腺癌患者、胃炎患者和健康者血清,建立诊断模型,然后进行单盲模型验证。[结果]发现5910Da、5084Da和8691Da的三个蛋白质荷比峰(M/Z)在胃腺癌和健康组比较中具有显著性差异。5910Da、6440Da的两个蛋白质荷比峰(M/Z)在胃腺癌和胃炎组中比较具有显著性差异。[结论]建立了胃腺癌的血清蛋白指纹质谱,为以后的胃癌蛋白质组学研究奠定了一定的基础,建立了以5910Da、5084Da、8691Da和6440Da四个蛋白质峰为模型区分胃腺癌与非胃腺癌的血清蛋白表达质谱诊断模型,为胃腺癌的临床诊断提供了一条崭新的途径和方法。

中药肾康灵干预阿霉素肾病大鼠血蛋白质质谱表达的实验研究

目的：应用血蛋白质组学筛选阿霉素肾病（AN）大鼠血清中差异表达的蛋白质,旨在蛋白质分子水平探索频复发性肾病综合征（FRNS）的诊断标志物及中药肾康灵治疗的作用靶点。方法：利用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）联合CM10蛋白质芯片技术检测各组大鼠血蛋白质组质谱的表达,采用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机自动收集数据,使用Ciphergen Proteinchip Software3.2.1和Biomarker Wizard分析软件筛选出各组大鼠血清差异表达的蛋白质。结果：在质荷比值（M/Z）2000~50000范围内,P〈0.05,芯片共捕获到30种差异蛋白质,质谱仪筛选出B组与A组比较的25种差异蛋白,C组与B组比较筛选出5种差异蛋白,其中3种差异蛋白在B、C、D、E组间差异有统计学意义,且从B组→C组→D、E组→A组呈递减趋势,这3种蛋白峰分别为8837.7、15013.0、15053.2。结论：SELDI-TOF-MS能有效分析阿霉素肾病大鼠血清蛋白质质谱,中药肾康灵干预治疗后蛋白质质谱表达差异有统计学意义。

基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠患儿诊断中的应用

目的建立蛋白质芯片技术检测血清蛋白质指纹图谱的方法,探讨基于人工神经网络(ANN)的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠(HD)患儿诊断中的应用价值。方法应用蛋白质指纹图谱分析仪测定HD患儿64例、巨结肠类缘病患儿25例和健康儿童23例血清标本的蛋白质指纹图谱,并结合ANN方法进行数据分析。112例标本随机分成训练组66例(HD40例,巨结肠类缘病14例,健康儿童12例)和盲法测试组46例(HD24例,巨结肠类缘病11例,健康儿童11例)。利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型,对46例未知血清进行检测,并与X线影像学检查结果进行比较。结果筛选出质荷比(m/z)位于7211.6和2864.8的蛋白质标志物2个。在HD组表达强度分别为6.15±2.21和2.78±1.21,巨结肠类缘病组表达强度分别为12.82±7.56和4.86±0.91(Pa<0.01)。筛选出m/z位于6884.2和5639.2的蛋白质标志物2个。HD组表达强度分别为4.09±1.78和15.57±8.87,健康对照组表达强度分别为8.31±3.07和30.31±6.18(P<0.01)。应用该方法对HD患儿进行诊断的准确率、敏感度和特异度分别为89.13%(41/46例)、87.50%(21/24例)和90.91%(20/22例),明显高于X线影像学检查68.8%(77/112例)、82.8%(53/64例)和50.0%(24/48例)。结论在HD患儿的诊断中,利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型较传统方法有更高的敏感性和特异性。

异烟肼敏感与耐药结核杆菌临床分离株培养滤液蛋白比较分析

目的：寻找异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白。方法应用弱阳离子交换蛋白质芯片（ WCX2）捕获并应用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱（ SELDI-TOF-MS）技术对1株异烟肼单耐药结核杆菌和1株异烟肼敏感结核杆菌临床分离株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液蛋白进行比较，描述性分析其差异。结果在异烟肼敏感和异烟肼单耐药结核杆菌株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液中分别检测到164、175、133、147种蛋白质/多肽，其相对分子量（依质荷比m/z而得）范围分别为982～9328、997～9327、1050～8903、996～9369，表达丰度（通过质谱峰面积计算）分别为17～2100、21～1943、60～5355、41～3267；异烟肼单耐药结核杆菌株与异烟肼敏感结核杆菌株相比较，7和14天培养滤液分别存在47与58种差异蛋白质/多肽，这些差异蛋白质相对分子量在1083～8812、1012～9327之间，表达丰度在76～1811、25～3010之间。结论异烟肼敏感结核杆菌和耐药结核杆菌液体培养早中期滤液蛋白质存在差异，但是否为异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白则有待进一步证实。

基于人工神经网络的血浆蛋白质谱在卵巢癌诊断中的应用性研究

目的:建立应用蛋白质芯片技术检测血浆蛋白质指纹图谱的方法,探讨基于人工神经网络的血浆蛋白质指纹图谱模型在卵巢癌诊断中的应用价值。方法:应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱仪测定卵巢癌和健康人血浆标本的蛋白质指纹图谱,并结合人工神经网络进行数据分析。将160例标本随机分成训练组120例(卵巢癌40例,健康人80例)和盲法测试组40例(卵巢癌20例,健康人20例)。利用从训练组得出的基于人工神经网络的血浆蛋白质指纹图谱模型,对40例未知血浆标本进行检测,并与CA125检测结果进行比较。结果:应用该方法对卵巢癌进行诊断的敏感性和特异性分别为95%(19/20),100%(20/20),明显高于CA125检测结果。结论:基于人工神经网络的血浆蛋白质指纹图谱模型在卵巢癌的诊断中较传统方法具有更高的敏感性和特异性,值得进一步研究与应用。

结直肠癌肝转移血清蛋白指纹图谱诊断模型的建立及临床应用

目的:检测结直肠癌肝转移、结直肠癌和健康人血清中蛋白质质谱,筛选特异的生物标记物,构建结直肠癌肝转移血清蛋白指纹图谱的早期诊断模型。方法:利用表面增强激光解析/电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测76例血清标本的蛋白质质谱,其中结直肠癌肝转移8例,结直肠癌无肝转移58例,健康人10例。运用支持向量机(SVM)和判别分析法处理数据、建立和评估诊断模型。结果:⑴留一法交叉验证区分结直肠癌肝转移与健康人的诊断模型,训练集和测试集的敏感性和特异性均达到100%;⑵留一法交叉验证区分结直肠癌肝转移与结直肠癌无肝转移组的诊断模型,训练集敏感性和特异性均达到100%,测试集的敏感性87.5%,特异性98.28%;⑶留一法交叉验证区分结直肠癌肝转移组和对照组的诊断模型,训练集的敏感性、特异性分别为100%、98.53%,测试集的敏感性、特异性分别为75.0%、97.06%。结论:SELDI技术结合生物信息学分析工具,是筛选和鉴定结直肠癌肝转移候选标志物的非常有效方法,建立的诊断模型为结直肠癌肝转移的早期临床诊断尤其是定性诊断提供了新手段。

胃癌血清蛋白质谱的差异性研究

目的对比胃癌患者手术前后与正常人血清蛋白质谱的差异,筛选出诊断胃癌的特异性蛋白标志物。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术和CM10蛋白质芯片,对22例胃癌患者和18名正常人的血清蛋白质谱进行检测。结果通过对胃癌术前血清与正常人血清蛋白质谱分析,发现由5个蛋白质峰组成的生物标记物可将胃癌术前患者与正常人准确分组。结论建立胃癌的血清蛋白质谱,为胃癌蛋白质组学研究奠定一定的基础,建立了以8961.2404M/Z、3947.264M/Z、5919.7541M/Z、4103.348M/Z、8711.0363M/Z5个蛋白质峰组成的生物标记物检测胃癌。

大鼠胰腺上皮内瘤变和胰腺癌模型血清蛋白质谱的差异表达

目的:利用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)技术,分析由7,12-二甲基苯并蒽(DMBA)诱导建立的大鼠胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺癌(PC)模型血清蛋白质谱的差异表达.方法:40只♂清洁级SD大鼠为模型组,DMBA胰腺局部种植建立PanIN和PC模型,根据PanIN标准进行病理学分级.26只♂清洁级SD大鼠为正常对照组.采用SELDI-TOF MS和铜离子鳌合芯片(IMAC-Cu2+芯片)检测大鼠血清蛋白质谱,Biomarker Wizard3.0软件分析比较对照组、PanIN组和PC组之间的差异表达蛋白.结果:DMBA胰腺局部种植后共获得PC11例,PanIN18例.与对照组比较,PanIN组和PC组表达强度显著上调(P<0.001)的蛋白质峰有19个,显著下调(P<0.001)的蛋白质峰有11个;其中质荷比分别为5835.2、4087.3、4786.5、4800.5、3932.2、5765.9、5924.8、5001.9、3913.7的9个蛋白质峰表达强度在对照组、PanIN组和PC组呈逐级递增趋势,质荷比分别为1096.9、1478.9、8572.9、1007.1的4个蛋白质峰表达强度呈逐级递减趋势.结论:与正常大鼠比较,PanIN和PC模型大鼠血清蛋白质谱表达发生显著变化,这些差异表达蛋白质在胰腺癌中的作用值得进一步深入研究.