表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱在甲状腺癌诊断及临床分期中的应用

目的:用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析正常人和甲状腺癌患者血清蛋白指纹图谱的变化,建立能鉴别正常人和甲状腺癌及Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌和Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌患者的诊断模型。方法:应用SELDI-TOF-MS技术检测72例血清标本的蛋白质质谱,其中甲状腺癌40例(Ⅰ-Ⅱ期26例,Ⅲ-Ⅳ期14例),正常人32例。应用支持向量机和判别分析的方法分析质谱数据,建立甲状腺癌诊断模型并留一法交叉验证。结果:区分甲状腺癌和正常人的诊断模型交叉检验敏感性为100%,特异性为86%,总的符合率为93%;区分Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌和Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌患者的诊断模型对Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌检出的敏感性为77%,特异性为86%,对Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌检出的敏感性为86%,特异性为77%,总的符合率为80%。结论:应用SELDI-TOF-MS技术平台和生物信息技术建立的诊断模型为甲状腺癌的早期诊断及临床分期提供了新的手段。

表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术在急性重症胰腺炎预后相关蛋白质谱检测中的应用

目的应用蛋白芯片表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-Ms）技术检测急性重症胰腺炎不同预后相关蛋白质谱，探讨急性重症胰腺炎轻重程度及预后评估的新方法。方法用SELDI-TOF-MS方法检测浙江省人民医院2008年3月至2010年10月23例急性重症胰腺炎患者的蛋白质谱，按是否发生器官功能衰竭、胰腺脓肿、腹内压异常、死亡将全部患者分组进行蛋白指纹图谱比较。结果蛋白质峰谱特征显示，在1094U、2751U、5904U处并发胰腺脓肿（13例）的重症胰腺炎患者峰值（13．21±3．73，45．62±10．31，48．37±9．24）明显高于未并发胰腺脓肿组（70例）（4．33±1．79，8．87±3．21，4．45±1．59），差异有统计学意义，均P〈0．05。在635U并发器官功能衰竭组（11例）峰值（8．56±3．21）明显低于未并发器官功能衰竭组（12例）（37．82±12．65）；而在4103U、4187U处并发器官功能衰竭组（21．63±8．23，9．81±2．32）峰值则高于未并发器官功能衰竭组（3．32±1．29，1．14±0．49）。在4173U处并发腹内压增高组（10例）峰值（8．94±3．58）明显高于无腹内压增高组（13例）（1．97±0．73）；而在5635U处并发腹内压增高组峰值（0．62±0．23）则低于无腹内压增高组（15．78±6．34）。2例死亡患者蛋白指纹表现为血清蛋白全面合成功能减退，峰值降低。结论蛋白指纹图谱技术可筛选出有意义的生物标记蛋白，为急性重症胰腺炎并发症的早期诊断与治疗提供了新的路径，对急性重症胰腺炎预后评估具有重要意义。

表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术在血液系统疾病中的应用

表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术是当前临床蛋白质组学研究中比较理想的技术平台,文章介绍该技术在评价铁代谢紊乱性疾病与Hepcidin之间关系和戈谢病与CCL18之间关系方面的应用,以及该技术在发现、诊断、治疗管理、病情判定、预后评估血栓性血小板减少性紫癜、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性移植物抗宿主病等多种血液系统疾病中的应用。

应用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术建立非活动性HBsAg携带者血清蛋白质谱筛选模型

目的比较非活动性HBsAg携带者和健康人的血清蛋白标记物并建立相关筛选模型。方法用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及CM10蛋白芯片对35例非活动性HBsAg携带者、35例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱用计算机软件进行比较分析,建立非活动性HBsAg携带者的比较筛选模型。结果非活动性HBsAg携带者组与健康人对照组共有28个差异有统计学意义的蛋白峰;建立诊断模型的灵敏度94%(33/35),特异度80%(28/35),准确率为87%(61/70)。结论建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分非活动性HBsAg携带者与健康人,SELDI技术在诊断及特异性血液生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值。

基质辅助激光解析电离——飞行时间质谱仪的研制及在临床微生物鉴定中的应用

目的探究基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪在临床微生物鉴定中的应用,为真菌微生物的鉴定提供临床技术支持。方法选取于2015年3月到2017年2月我院临床采集的真菌作为实验标本,利用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪对菌种进行鉴定,分析基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪对菌种鉴定的检查效果。结果300株真菌中有290株(96.67%)经鉴定后可以正确归类到种水平,6株(2%)未能给出鉴定成果,4株(1.33%)鉴定结果出现错误,且正确率与传统方法相比差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪稳定性高,可重复性好,并且具有快速准确的优点,是临床鉴定微生物种类的一种快速可靠的高通量方法,可以为临床的微生物鉴定提供一定的技术支持。

应用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱对结肠癌组织蛋白质的初步分析

[目的]检测结肠癌组织与正常结肠黏膜组织中差异蛋白质的表达,寻找与结肠癌相关的肿瘤标记物。[方法]采用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱仪(SELDI-TOF MS)对42例结肠癌组织及其配对的正常结肠黏膜组织进行蛋白质指纹图谱检测。[结果]结肠癌与正常对照共有38种蛋白质质谱峰强度差异有统计学意义(P<0.01),有分类意义的蛋白质有7种,质核比(M/Z)为M1678.47、M2182.19、M3358.44的蛋白质在大肠癌组织中低表达,M/Z为M1688.43、M2718.72、M3241.60、M3893.13的蛋白质在大肠癌组织中高表达。[结论]利用SELDI-TOF MS技术筛选出的具有分类意义的7种蛋白质,有可能成为大肠癌诊断及预后判断的一组生物学指标。

表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱技术对卵巢不同病变组织差异蛋白质的检测

目的 检测正常卵巢组织及良性、交界性和恶性卵巢肿瘤组织蛋白的指纹图谱，寻找差异表达蛋白质。方法取卵巢不同病变组织，提取蛋白质，采用表面增强激光解吸电离一飞行时间质谱仪对其进行蛋白质指纹图谱检测并进行初步分析。结果良、恶性卵巢肿瘤蛋白指纹图谱比较，癌组织中一些蛋白质高表达，如质荷比（M／Z）为15112．15、15296．79、7560．78、16049．39、7682．06、7932．30、15851．32、4619．68和8052．10的蛋白质。交界性卵巢肿瘤蛋白指纹图谱介于良、恶性图谱之间，如M／Z为15112．15、15851．32、7560．78、7682．06和7932．30的蛋白质。结论卵巢不同病变组织的蛋白指纹图谱中具有差异蛋白质，其有可能为卵巢肿瘤的临床诊断和治疗奠定分子基础。

SELDI-TOF-MS技术对胃炎诊断的应用

目的采用蛋白质剖析技术同时解析和分析多种蛋白质,从而找出更好的生物标记物,用于检测胃炎。方法用SELDI-TOF-MS技术及配套蛋白质芯片检测30例慢性胃炎和64例非胃炎疾病患者的血清蛋白质指纹图谱,建立诊断模型。结果2个蛋白质峰[5084和8691质荷比(m/z)]组合构建的诊断模型鉴别慢性胃炎和健康志愿者,灵敏度为96.66%(29/30),特异性为93.55%(29/31)。2个蛋白质峰(5910和6440m/z)组合的诊断模型鉴别胃炎和胃癌患者的灵敏度为96.6%(29/30),特异性为90.9%(30/33)。结论SELDI-TOF-MS在慢性胃炎的诊断尤其是早期诊断及候选标志物筛选等方面具有一定价值,值得进一步深入研究。

飞行时间质谱技术在食管鳞癌血清学诊断中的应用

目的用蛋白质质谱分析法寻找食管鳞状细胞癌相对特异的生物标志物。方法用金属亲和表面(IMAC3)芯片和表面增强激光解析/电离飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测44例食管鳞癌患者、42例正常人血清的蛋白质质谱。应用Bio-marker Pattern软件建立决策树分类模型,经交叉验证得到该分类模型对测试组病变人群的诊断率。结果用食管鳞癌患者与正常人质荷比为M9479.43的一种蛋白质建立的决策树分类模型,在学习模式下44例食管鳞癌患者中有43例被正确诊断,42例正常人有40例被诊断正常,诊断准确率为96.5%(83/86),敏感性和特异性分别为97.7%(43/44)、95.2%(40/42);在检测模式下44例食管鳞癌患者中有42例被正确诊断,42例正常人中有40例被正确分组,敏感性和特异性分别为95.4%(42/44)、95.2%(40/42)。结论该方法可快速、准确检测食管鳞癌,敏感性、特异性高。

SELDI-TOF-MS筛选微小病变型肾病综合征尿液生物标志物

目的探讨应用优化的表面增强激光解析电离-飞行时间-质谱(surface enhanced laser desorption/ionizationtime of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)进行微小病变型肾病综合征(minimal-changed nephrotic syndrome,MCNS)大鼠尿液生物标志物筛选的意义。方法 SD大鼠30只随机分为正常对照组(n=10)、模型对照组(n=10)和强的松治疗组(n=10)。除正常对照组外,其余大鼠经尾静脉一次性注射阿霉素5.5mg/kg复制MCNS模型,造模10d后分别予以强的松和蒸馏水灌胃治疗。21d后收集大鼠尿液,经弱阳离子交换芯片CM10捕获蛋白质,应用SELDI-TOF-MS获取3组大鼠的尿液蛋白质指纹图谱,采用Biomarker wizard软件比对分析差异蛋白。结果优化实验条件后获得较理想的尿液蛋白质指纹图谱,质控峰强度的平均CV值为18.0%(7.50%～35.89%)。在模型对照组与正常对照组之间检测到不同质荷比处有33个具统计学意义的差异蛋白峰(P<0.05),其中21个蛋白表达上调,12个蛋白表达下调。在正常对照组、模型对照组与强的松治疗组之间有6个蛋白质表达存在差异(P<0.05),这些差异蛋白峰在模型对照组中高表达,而在强的松治疗组中蛋白表达下调,峰强度接近正常对照组。结论通过优化实验条件并实行质量控制,SELDI-TOF-MS可为MCNS大鼠尿液生物标志物的筛选提供一个可行的检测途径。所获得的差异性蛋白峰对MCNS的早期诊断、治疗监测和寻找药物治疗的靶目标具有重要的意义。

应用SELDI-TOF-MS筛选多囊卵巢综合征卵泡液中差异蛋白的研究

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者与正常排卵妇女卵泡液中差异蛋白质的表达,建立PCOS的卵泡液诊断模型。方法采用表面增强激光解吸-电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测24例PCOS患者的卵泡液和20例排卵正常的对照患者卵泡液中的蛋白质,采用支持向量机方法建立PCOS的诊断模型,评估诊断模型的预测效能;采用卡方检验检验PCOS的卵泡液模型间特异性和敏感度的不同。结果 PCOS患者与排卵正常妇女的卵泡液中共检测到89个差异的蛋白质,选取前10个统计学意义的蛋白质峰(P<0.05)合并建立诊断模型,获得5个差异的蛋白质,其中2033和5828质荷比(m/z)两个蛋白质峰在PCOS组卵泡液中的表达低于对照组(P<0.05),其余3个蛋白质峰2873、6452、8137m/z在PCOS组卵泡液中呈现高表达(P<0.05);5个卵泡液差异蛋白质峰组合所构建的诊断模型的特异性为99%,敏感度为97%。结论 PCOS患者的卵泡液与正常排卵妇女卵泡液中存在差异表达的蛋白质,PCOS患者卵泡液中表达的蛋白质的变化可能与PCOS患者的卵泡内卵子发育异常和排卵异常有关。

SELDI-TOF-MS在筛选肝癌高发家系与无癌家系血清蛋白差异中的应用

目的比较肝癌高发家系患者和无癌家系患者血清蛋白质谱图,探寻两者间的血清蛋白差异。方法用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及CM10蛋白芯片对25例肝癌高发家系患者和25例无癌家系患者血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析,建立高发家系患者和无癌家系患者的比较筛选模型。结果肝癌高发家系组与无癌家系组共有15个蛋白质差异有统计学意义。筛选出4个蛋白峰建立诊断模型的灵敏度为96.0%(24/25),特异度为88.0%(22/25),准确率为92.0%(46/50)。结论肝癌高发家系患者组和无癌家系患者组的血清存在一定的差异蛋白,SELDI技术在特异性蛋白生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用前景。

利用SELDI-TOF MS筛选不同中医证型胃癌的差异蛋白

目的探讨利用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)比较不同中医证型胃癌患者的血清蛋白指纹图谱并筛选其差异蛋白。方法选取本院收治的36例胃癌患者,依据中医证型的不同分为虚证组19例与实证组17例。针对两组样本均应用SELDI TOF-MS检测其血清的蛋白指纹图谱,并通过相关数据处理软件进行分析。结果实证组与虚证组患者中4 620 m/z的蛋白质峰具有显著差异,其原始判别中特异度为94.1%(16/17),灵敏度为94.7%(18/19),准确率为94.4%(34/36)。结论应用SELDI-TOF MS检测胃癌患者的蛋白指纹图谱对其中医辨证分型具有可靠的筛选作用,能够对中医治疗起到一定的指导作用。

应用SELDI-TOF-MS技术筛选不同分型卵巢上皮性癌血清标志物

目的:应用表面增强激光解析离子化—飞行时间—质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选不同分型的卵巢上皮性癌患者血清标志物。方法:选择卵巢上皮性癌68例,健康妇女87例,卵巢良性肿瘤组20例血清,以及体外培养的卵巢恶性肿瘤细胞系SKOV3、A2780、HO8910、HO8910PM为材料,采用WCX2蛋白质芯片分析血清和体外培养的恶性肿瘤细胞系蛋白质表达差异蛋白,选择卵巢上皮性癌血清与细胞均存在表达的差异蛋白建立卵巢上皮性癌诊断模型进行验证。结果:WCX2芯片捕获的M/Z为5343和5640蛋白质,在卵巢浆液性上皮癌和浆液性上皮癌细胞系HO8910、HO8910PM中均上调表达。以上述2个蛋白质建立诊断模型判别浆液性卵巢癌的敏感性为97.8%,特异性为82.7%,优于CA125的检测结果。结论:M/Z为5343和5640蛋白质在卵巢浆液性上皮癌发生和发展的过程中的变化可以反映到血清中,而且可以验证血清标志蛋白的组织特异性,为其作为卵巢癌的肿瘤标志物提供强有力的支持。

应用SELDI-TOF-MS技术研究急性胰腺炎特异性血清标志物

目的 应用蛋白芯片表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-MS）术揭示胰腺炎患者血清蛋白指纹特征,查找病情特异性血清标志物,探讨急性重症胰腺炎的早期诊断及评估的新方法.方法 收集急性胰腺炎患者血清标本52份,其中急性重症胰腺炎患者24份（SAP组）,急性轻型胰腺炎28份（MAP组）,同期健康人群血清52份（正常对照组）,应用SELDI检测急性胰腺炎患者及健康人群的蛋白质谱,按照临床胰腺炎分级,获得不同临床级别胰腺炎和健康人群的血清蛋白指纹图谱,应用计算机软件分析处理所有峰谱.结果 在质荷比（M/Z）1 000~20 000检出到127个蛋白峰,其中MAP组与正常对照组比较5个峰差异有明显统计学意义（P＜0.05）,MAP组与SAP组比较3个峰值差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 用SELDI-TOF-MS蛋白指纹图谱技术可筛选出有意义的生物标记差异蛋白,这对急性胰腺炎的诊断以及病情轻重的评估提供了新的路径.

蛋白质芯片SELDI-TOFMS技术的研究进展及其在临床中的应用

蛋白质芯片为新一代的蛋白质组研究技术,由美国Ciphergen生物系统公司引进,表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOFMS)提供一个高通量和高灵敏度的检测平台。投放至今虽短短10来年,但卓越的成果已广为医学科学界重视,尤其在恶性肿瘤的早期诊断、监控和预后研究上。蛋白质是细胞内执行生物功能的最终分子,蛋白质组学研究让人类更深入了解疾病和生命的本源,不断发现的特异性肿瘤标志物更为攻克癌症带来新希望。这里除对表面增强激光解吸电离_飞行时间质谱作较详尽的介绍外,更重点阐述其近年来蛋白质芯片近期的研究进展和在临床中的应用,并就其优劣和发展前景作出评估。

应用SELDI-TOF-MS技术筛选人肝癌细胞多药耐药相关差异表达蛋白

【目的】通过SELDI-TOF-MS技术筛选体外培养人肝癌细胞多药耐药相关差异表达蛋白。【方法】采用体外培养人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-FU,MTT法检测Bel-FU的多药耐药性;SELDI-TOF-MS技术结合CM-10芯片检测Bel-7402与Bel-FU蛋白质指纹图谱。【结果】细胞Bel-FU对于5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、长春新碱、阿霉素、柔红霉素的耐药指数分别为:89.6倍、3.9倍、37.2倍、16.5倍、3.7倍。在质荷比(M/Z)2 000～50 000的范围内,Bel-FU与Bel-7402间共检测到8个差异蛋白(P<0.05),其中上调蛋白有3个,下调蛋白有5个。【结论】SELDI-TOF-MS技术为筛选肝癌MDR蛋白标志物提供了一个简便、有效的方法。

基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠患儿诊断中的应用

目的建立蛋白质芯片技术检测血清蛋白质指纹图谱的方法,探讨基于人工神经网络(ANN)的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠(HD)患儿诊断中的应用价值。方法应用蛋白质指纹图谱分析仪测定HD患儿64例、巨结肠类缘病患儿25例和健康儿童23例血清标本的蛋白质指纹图谱,并结合ANN方法进行数据分析。112例标本随机分成训练组66例(HD40例,巨结肠类缘病14例,健康儿童12例)和盲法测试组46例(HD24例,巨结肠类缘病11例,健康儿童11例)。利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型,对46例未知血清进行检测,并与X线影像学检查结果进行比较。结果筛选出质荷比(m/z)位于7211.6和2864.8的蛋白质标志物2个。在HD组表达强度分别为6.15±2.21和2.78±1.21,巨结肠类缘病组表达强度分别为12.82±7.56和4.86±0.91(Pa<0.01)。筛选出m/z位于6884.2和5639.2的蛋白质标志物2个。HD组表达强度分别为4.09±1.78和15.57±8.87,健康对照组表达强度分别为8.31±3.07和30.31±6.18(P<0.01)。应用该方法对HD患儿进行诊断的准确率、敏感度和特异度分别为89.13%(41/46例)、87.50%(21/24例)和90.91%(20/22例),明显高于X线影像学检查68.8%(77/112例)、82.8%(53/64例)和50.0%(24/48例)。结论在HD患儿的诊断中,利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型较传统方法有更高的敏感性和特异性。

河南林州食管癌高发区食管癌和癌前病变患者血清蛋白质质谱

背景与目的:食管癌和癌前病变组织中部分分子改变可在血液中反映出来,但这些指标的灵敏度和特异性较低,临床应用受到限制。血清蛋白质质谱分析技术有助于筛选癌变密切相关蛋白。本研究通过探讨食管癌高发区人群食管正常粘膜(normal,NOR)、食管上皮基底细胞过度增生(basalcellhyperplasia,BCH)、不典型增生(dysplasia,DYS)和食管癌(esophagealcarcinomc,EC)患者的血清蛋白质质谱的变化特征,为筛选和建立早期诊断和高危人群检测的血清学指标提供理论依据。方法:采用弱阳离子结合芯片(WCX2)及表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测EC高发区无症状普查人群130人(NOR63人、BCH40人、DYS27人)和高发区EC30人的血清蛋白质质谱进行分析。应用BiomarkerPattern软件建立决策树分类模型,经10倍交叉验证得到该分类模型进行验证,测试组病变人群的诊断率和特异性(排除率)。结果:BCH组质荷比(M/Z)为M9306.61u的一种、DYS组M/Z为M13765.90u的一种及EC组M/Z为M2942.15u和M15953.40u的两种蛋白质分别建立决策树分类模型,训练组BCH、DYS和EC的敏感性(检出率)分别为57.5%(23/40)、88.8%(24/27)和96.6%(29/30),特异性分别为96.8%(61/63)、63.4%(40/63)和92.0%(58/63);测试组BCH、DYS和EC敏感性分别为57.5%(23/40)、66.6%(18/27)和60.0%(18/30),特异性为95.2%(60/63)、71.4%(45/63)和84.1%(53/63)。结论:M/Z为M9233.09u、M13657.15u、M2918.91u和M15827.37u的4种蛋白质可能包含有可用于食管癌高发区人群筛查的血清标记物,血清蛋白质质谱检测为食管癌和癌前病变的诊断和筛查提供了新的手段。