三种人脐静脉内皮细胞的培养鉴定及表面抗原表达比较

目的探索建立稳定有效的原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外培养方法,并比较原代HUVECs与HUVEC-CS、EA.hy926细胞株之间的表面抗原表达情况。方法Ⅱ型胶原酶消化人脐静脉分离HUVEC,M199完全培养液培养,HUVEC-CS及EA.hy926用DMEM完全培养液。胰蛋白酶消化传代,对三种细胞进行形态学观察,流式细胞仪分析比较表面抗原的表达率。结果原代HUVECs细胞为多角形,"铺路石样"排列;HUVEC-CS和EA.hy926细胞为圆形或扁平形,生长速度快,呈典型"鹅卵石状排列。v WF因子免疫荧光染色:原代HUVECs及EA.hy926大部分细胞内可见绿色荧光,而HUVEC-CS为阴性。流式细胞仪分析原代HUVECs(77.7%)或EA.hy926(78.6%)CD31表达率明显高于HUVEC-CS(4.2%),原代HUVECs CD34表达率(43.3%)明显高于HUVEC-CS或EA.hy926(分别为1.6%、0.2%),差异有统计学意义。结论脐静脉灌注Ⅱ型胶原酶消化法配合M199完全培养液可获得高纯度的内皮细胞,EA.hy926永生细胞株培养方法简单,短时间内可获得足够数量的细胞,两者均是组织工程及相关医学基础研究较好的细胞来源。

乙型肝炎表面抗原基因重组2型腺相关病毒的免疫原性研究

目的观察含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-HBsAg)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的重组病毒颗粒单次注射Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBsAg基因cD-NA:ELISA检测肝组织中HBsAg的表达;RIA法检测血清中表面抗体(抗一HBs)滴度;51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果外源性HBsAg基因己整合到肝细胞染色体DNA并有效地转录和翻译,表达水平最高可达33.8pg/(mglivertissue),rAAV-HBsAg免疫小鼠后可以诱导机体产生表面抗体并激发特异性CTL。结论外源性HBsAg基因可以转移到小鼠肝细胞并稳定表达;rAAV-2-HBsAg免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现。提示基于rAAV-2载体的乙型肝炎(HBV)疫苗,对于防止HBV感染,尤其是作为慢性乙型肝炎的治疗性疫苗可能只有潜在的应用价值,值得做进一步的系统研究。

放线菌酮体外强烈抑制小鼠活化T淋巴细胞CD69表达

目的 :利用淋巴细胞的早期活化标记物CD6 9的表达 ,探讨放线菌酮 (CHX)对T淋巴细胞体外活化的影响 ,以进一步揭示CHX对免疫系统的影响 .方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,与CHX预孵 1h ,加入多克隆刺激剂继续培养 ,总计培养 2 4h后收获细胞 ,进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术对T细胞的CD6 9分子表达情况进行分析 .结果 :在CHX(终浓度 10 μmol/L)作用下 ,ConA和PDB活化的T细胞CD6 9表达百分率依次为 12 33%± 4 75 %、13 0 7%± 11 0 5 %,与对照组比较均有显著差异 (P <0 0 1) .结论 :CHX(10 μmol/L)对ConA、PDB活化的T淋巴细胞均显示了强烈的抑制效应 .