乙型肝炎表面抗原酶联免疫吸附试验试剂在血液筛查中的临界值设置

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂设置灰区的范围及必要性。方法使用国产试剂和进口试剂平行检测HBsAg阳性血清样本(423份)和HBsAg阴性献血者样本(2996份),计算2种试剂不同吸光度值/临界值(S/CO值)下的灵敏度及特异度,并通过约登指数分析2种试剂设置灰区的合理范围。结果S/CO值为0.4时,国产试剂的约登指数(0.957)最大;S/CO值为0.7时,进口试剂的约登指数(0.971)最大。结论若对献血者HBsAg实施1遍ELISA试剂检测策略,本实验室使用的2种试剂均有必要设置灰区,其中国产试剂的反应性判定值宜设置为S/CO值≥0.4,进口试剂宜设置为S/CO值≥0.7。

国产乙型肝炎病毒表面抗原酶联免疫吸附试验试剂盒的检测效果评价

目的:评价6种国产乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒的检测效果。方法:应用AXSYM全自动微粒子酶免疫化学发光分析仪检测测定后余留标本,对相关样品进行稀释,然后选取6种国产HBsAgELISA试剂盒进行检测,评价6种国产试剂盒的灵敏度、精密度、特异度、检测范围和钩状效应(Hook效应),确立临界值(cut-off)对应的浓度范围以及不同孵育时间对检测灵敏度的影响等。结果:6种试剂盒的灵敏度有一定差异,范围在0.40～0.60ng/mL之间。对低浓度标本,6种试剂盒的批内精密度变异系数(CV)分别为6.21%、9.45%、9.42%、13.04%、10.49%和4.84%;批间精密度CV分别为15.76%、19.12%、19.54%、23.89%、24.22%和14.99%。HBsAg质量浓度与临界值指数(COI)呈S型曲线关系。在本实验所分析的HBsAg浓度范围内未发现高剂量Hook效应。6种试剂盒临界值对应的质量浓度在0.3～0.5ng/mL之间。结论:国产HBsAgELISA试剂盒的灵敏度有待进一步提高。

乙型肝炎表面抗原酶联免疫吸附法中包被板的回收与利用

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）测定是诊断乙肝及乙肝病毒携带者的主要指标和直接证据之一。而酶联免疫吸附试验,因其快捷、简便,成为目前各医疗单位应用最多的检测手段。我们将日常工作中的阴性包被板条经过处理，再次用于试验，结果满意，报道如下：

半抗原直接包被的四环素酶联免疫吸附分析法的建立

为建立更优的四环素(tetracycline,TC)酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),将TC与蛋白质偶联制备人工完全抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗TC的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)。采用酸性高锰酸钾羧化酶标板,将TC直接包被在酶标板上,并对ELISA反应体系条件进行优化,构建一种半抗原直接包被的TC ELISA检测方法。所制备的MAb特异性良好,交叉反应率低。所构建的检测方法最低检测限IC_(10)值为0.306 ng/mL,半数抑制率IC_(50)值为9.26 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为96.46%~101.89%、96.84%~102.50%。与人工完全抗原包被的检测方法相比(IC_(10)值:0.624 ng/mL,IC_(50)值:28.24 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为93.86%~105.12%、94.04%~105.56%),检测灵敏度有明显提高,并可用于实际样品中TC含量的检测,具备良好的应用前景。

酶联免疫吸附试验乙型肝炎表面抗原弱阳性血液标本中3种检测方法的结果分析

目的分析酶联免疫吸附试验(ELISA)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)弱阳性标本中3种检测方法[增加标本的离心时间和提高离心速度、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、抗体中和确认试验]的应用。方法选取2014年1月至2015年12月来该院检验科验血的200例检验报告作为血样获取目标,其中HBsAg弱阳性的血液标本112例,即作为该研究的血液标本;分别通过增加标本的离心时间和提高离心速度、TRFIA、抗体中和确认试验进行检测,继而对不同方法检出的结果进行分析比较,其中以经抗体中和确认试验检测出的结果作为金标准。结果ELISA检测过程中,与ELISA初测(3 000r/min离心8 min)阳性率(61.6%)相比,增加离心时间和提高离心速度(3 500r/min离心20min)后,ELISA检测阳性率(48.2%)明显偏低,差异有统计学意义(P<0.05)。以抗体中和确认试验检测结果作为金标准,ELISA检测112例HBsAg弱阳性血液标本,其敏感度为57.3%(47/82),漏检35例,占比42.7%(35/82),另外误检7例,占比23.3%(7/30);TRFIA检测112例HBsAg弱阳性血液标本,其敏感度为93.9%(77/82),漏检率6.1%(5/82),错检率3.3%(1/30),并且TRFIA敏感度明显高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ELISA检测HBsAg可能出现假阳性结果,通过增加标本的离心时间和提高离心速度可有效减少假阳性例数;TRFIA敏感度较ELISA更高。

2种检测乙型肝炎病毒表面抗原的酶联免疫吸附试验试剂盒的性能比较

目的:比较2种不同孵育时间的检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒的性能差异。方法:使用同一厂商生产的2种不同孵育时间(30min和60min)的HBsAgELISA试剂盒同时检测血清样本,比较2种试剂盒的检测精度、抗干扰能力和检测结果的一致性。结果:2种试剂盒的检测精度没有统计学差异,批内变异系数(CV)均小于10%,批间CV均小于15%;血红蛋白<4.0g/L、三酰甘油<2.2mmol/L、胆红素<260μmol/L对2种试剂均不产生影响。2种试剂平行检测229份样本,其中有33例样本检测结果不一致,进一步用电化学发光法全自动检测系统复检,结果均为弱反应性样本。结论:2种试剂盒的检测精度和抗干扰能力无差异,但60min孵育试剂盒对于HBsAg弱反应性样本的检出率明显高于30min孵育试剂盒。

酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒表面抗原假阳性的影响因素分析

目的分析酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒表面抗原出现假阳性的影响因素。方法把血清标本分为两组,抗凝组和不抗凝组,采用胶体金标法进行检测比较,全部的标本进行同步检测,分析两组乙型肝炎病毒表面抗原的阳性率。结果采用酶联免疫吸附法检测不同血清状态乙型肝炎病毒表面抗原的阳性率,抗凝组的阳性率明显高于不抗凝组(P<0.05),抗凝组的假阳性率比较高;酶联免疫吸附法比金标法的灵敏度高,特异性相比则略低。结论采用酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒表面抗原产生不同结果的原因是多方面的,标本溶血是最主要的原因,因此对血清标本实行必要的处理可提高检测结果的准确度。

金标法与酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原的方法学比较

目的对金标法与酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝表面抗原(HBsAg)进行方法学比较。方法对1024份健康体检血清标本同时用金标法和ELISA检测HBsAg,以ELISA法为标准,对金标法的灵敏度、特异性进行评价。结果以ELISA为标准,1024份血清中金标法有5份假阴性,9份假阳性,灵敏度为99.51%,特异度为99.12%,准确度为98.63%。结论ELISA步骤多,时间长,特异性强,灵敏度高,适合批量检测。金标法快速简便,单份检测,无需任何仪器,适合急诊检测,但灵敏度、特异性稍差,特别是针对小三阳和乙肝携带者有漏诊可能。因此实验室应根据需要并结合工作情况选用。

血浆甘油三酯对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响探讨

目的探讨甘油三酯(TG)对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的影响。方法收集HBsAg阳性血浆样本,用蒸馏水做对倍稀释至1∶8,分成4个组,对照组用蒸馏水稀释10倍,实验组用TG浓度不同的脂血浆稀释10倍。用ELISA法检测HBsAg的吸光度(A)值并做定性判读。结果试验组HBsAg的A值与对照组之间差异有统计学意义,试验组间HBsAg A值差异有统计学意义;HBsAg的定性判读试验组1与对照组间差异无统计学意义,试验组2、3与对照组间差异有统计学意义,试验组间差异有统计学意义。结论 TG浓度明显影响ELISA法检测HBsAg,TG浓度和A值有明显的相关性。在HBsAg滴度相同TG浓度不同的样本中,TG浓度增高,A值减低。在低滴度的HBsAg样本中,高TG浓度可导致A值低于临界值,出现假阴性。样本HBsAg滴度越低,高浓度TG的影响越明显。

胶体金试纸条与酶联免疫吸附法联合检测乙型肝炎表面抗原对比分析

目的:对比分析胶体金试纸条法与酶联免疫吸附(ELISE)法检测HBsAg的结果差异。方法:分别用胶体金试纸条与ELISE法检测500例病人血标本HBsAg对阳性率进行比较。结果:两种方法的阳性率无差异统计学意义,ELISE法灵敏度高于胶体金试纸条法。结论:胶体金试纸条法与ELISE法均为检测HBsAg的有效方法,胶体金试纸条检测法操作简单、快捷方便,可用于快速检查,并可与ELISE法相互验证,ELISE法适于检验科常规检查。

酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎病毒表面抗原阳性结果复检确认方法

目的利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg),对阳性标本进行复检确认。方法按试剂说明书测定HBsAg,对强阳性标本(S/CO≥4.0)用金标法进行确认,对弱阳性标本(S/CO<4.0)留作双孔复检。结果在强阳性标本中有18例,弱阳性标本中有87例为假阳性,假阳性率为0.17%。结论对乙型肝炎病毒表面抗原阳性的标本,分别用金标法和双孔复检的方法进行确认实验,可以降低假阳性率,减少医疗纠纷,临床应用满意。

酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原临界值标本复检分析

应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的过程中影响因素较多，为确保检测质量，我们对初检HBsAg吸光度（A）值0.075～0．135（临界值设置为Cutoff±30％）的421例标本进行了复检。

贝氏柯克斯体5种重组表面蛋白抗原包被酶联免疫吸附试验的特异性和敏感性分析

目的使用贝氏柯克斯体5种重组表面蛋白作为包被抗原的酶联免疫吸附试验用于血清学检测的特异性和敏感性分析。方法本研究建立由贝氏柯克斯体的Com1、GroEL、Mip、OmpH、RplL重组表面蛋白抗原分别包被的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,然后分别检测贝氏柯克斯体实验感染小鼠血清和Q热患者血清中IgG特异性抗体。结果 8份贝氏柯克斯体感染小鼠血清中除1份血清与RplL反应为阴性外其它均为阳性;11份Q热患者血清中除1份血清与RplL、1份血清与OmpH反应为阴性外,其它血清反应均为阳性。将这5种重组蛋白分别与莫氏立克次体、黑龙江立克次体、恙虫病东方体实验感染小鼠血清反应,除1份黑龙江立克次体感染小鼠血清与GroEL反应为阳性外,其它血清反应均为阴性。另外,Com1对斑疹伤寒、斑点热、恙虫病患者血清的阳性反应率平均为22.2%,GroEL为25.0%,Mip为25.0%,OmpH为25.0%,RplL为13.9%。结论这些结果证明这5种重组蛋白抗原均可被贝氏柯克斯体感染血清所识别。所建立的ELISA方法具有良好特异性和敏感性,可用作Q热血清学诊断。

酶联免疫吸附试验与电化学发光免疫法检测孕妇乙型肝炎表面抗原效果

目的:探讨酶联免疫吸附试验在孕妇乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的诊断效果及与电化学发光免疫法符合率。方法:选取2016年1月—2018年1月本院收治的孕妇88例,分别应用酶联免疫吸附法(ELISA)和电化学发光免疫法(ECLIA)检测妇HBsAg,比较两种方法检测效果。结果:两种方法检测HBsAg阳性符合率、检测效能及对血清HbcAb和HbsAb指标项检测结果均未见差异(P>0.05)。结论:对孕妇HBsAg进行检测,ELISA和ECLIA检测结果相同,均具有较高的检出率。

全自动酶联免疫吸附法检测血清乙型肝炎表面抗原检测限的建立与评价

目的建立全自动酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的检测限并进行评价.方法参考美国临床实验室标准委员会(CLSI)EP17-A文件,对全自动酶联免疫酶联免疫吸附法检测血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)结果的分布进行统计描述,建立全自动酶联免疫吸附法检测血清乙肝表面抗原的检测限.结果空白限(LOB)为0.027μg/L,检出限(LOD)为0.083μg/L,定量限(LOQ)为0.125μg/L.结论参考CLSI EP17-A文件建立的全自动ELISA法检测限更能满足临床实验室的要求,为临床提供可靠的检验结果.

溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原影响的分析

目的:探讨溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原结果的影响。方法:对400份不同的血清标本采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的测定,其中阴性标本217份,强阳性标本95份,弱阳性标本88份;用人为方法造成溶血,对溶血标本重新测定,对2次检测结果进行比较。结果:217例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性标本和95例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)强阳性标本,非溶血标本和溶血标本血清检测结果(阴性或强阳性)全部一致,非溶血标本和溶血标本血清的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的OD值无统计学意义;88例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)弱阳性标本,溶血标本血清检测出现假阴性率为7.95%(7,88),非溶血标本和溶血标本血清的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的OD值具有统计学意义。结论:溶血对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性及乙型肝炎表面抗原(HBsAg)强阳性的标本影响不大,而对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)弱阳性标本的检验结果具有一定影响,甚至可能造成假阴性。