α-淀粉酶AmyP对有机溶剂和表面活性剂的耐受性

AmyP是一个来自海洋宏基因组文库的α-淀粉酶。AmyP不仅对log P ow值从4.5到-0.24的各种有机溶剂均具有良好的耐受性,而且能被正辛醇、正辛烷和甲苯提高活性为139%、118%和119%。正辛醇影响AmyP的淀粉水解产物、葡萄糖的含量增加、麦芽三糖的含量降低。非离子型的表面活性剂Tween-20、Tween-80和Triton X-100存在条件下,AmyP的活性反而有不同程度的提高。但是,AmyP对阴离子型的SDS和阳离子型CTAB的耐受性稍差。结果表明AmyP是一个同时具有有机溶剂和表面活性剂耐受性的新型α-淀粉酶。

耐有机溶剂低温碱性脂肪酶产酶条件优化及其酶学性质

[目的]研究沙雷氏菌JXJ-54胞外脂肪酶的产酶条件以及粗酶酶学性质。[方法]以沙雷氏菌JXJ-54为出发菌株,采用单因素分析优化其产胞外脂肪酶的条件并对该酶进行酶学性质研究。[结果]该菌株的最佳产酶条件为牛肉浸膏10 g/L、K_2HPO_4 2 g/L、菜籽油乳化液体积分数2.25%,初始pH 9.0、培养温度20℃、装样量40 mL、接种量2%、发酵时间20 h。JXJ-54脂肪酶的最适底物为对硝基苯酚辛酸酯和对硝基苯酚葵酸酯,在30℃、pH 8.5～9.5时酶活力最高,且具有一定的热稳定性和较好的pH稳定性;酶样品受到多数供试金属离子和EDTA的抑制,在供试表面活性剂和有机溶剂中具有良好耐受性,甚至处于激活状态。[结论]该菌株能利用简单的发酵培养基达到较好的产酶效果,其所产胞外脂肪酶为低温碱性脂肪酶,具有一定的热稳定性和较好的pH稳定性,在供试表面活性剂和有机溶剂中具有良好的耐受性,在食品加工、洗涤剂、低温环境修复等低温碱性环境的工业领域中有一定的应用潜力。

南海深海新颖低温脂肪酶的克隆、表达及酶学性质鉴定

从南海深海放线菌Pseudonocardia antitumoralis SCSIO 01299中克隆一个脂肪酶基因lipase B5。lipase B5基因片段大小为972bp,编码的蛋白质具有323个氨基酸残基并与Pseudonocardia sp.HH130629-09中假定脂肪酶有98%的同源性。以p ET28a（＋）为载体,将重组质粒转化到E.coli BL21（DE3）中,实现lipase B5高效表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化lipase B5。Lipase B5最适反应底物为对硝基苯酚癸酸酯（p-NPD）,最适温度为30℃,最适反应p H为7.5。Lipase B5催化p-NPD水解反应的活性达到140.14U/mg,Vmax和Km分别为109.8μmol/min、0.976mmol/L,催化橄榄油的活力为32.019 7U/mg。Lipase B5在p H7.5~8.5保持良好的p H稳定性;在10～20℃低温下保持较高的酶活力,在10~40℃内具有温度稳定性。Lipase B5对大部分金属离子有很好的耐受性,低浓度的Li^＋、Mg^2＋对该酶活性有促进作用。Lipase B5对高浓度的Na Cl有很好的耐受性,在100mmol/L的Na Cl存在下,酶活性大约保持在103%。Lipase B5对多种短链醇类有机溶剂和表面活性剂有很好的耐受性,Triton X-100、Tween-80和Tween-20对lipase B5酶有激活作用。