表面活性蛋白-B在新生儿呼吸机相关性肺损伤中的研究进展

机械通气是危重新生儿呼吸衰竭时主要的抢救技术，已广泛应用于临床。目前，呼吸机相关性肺损伤（ventilator-in—duced iung injury，VILI）已经受到广泛关注，同时，肺泡表面活性物质（pulmonary surfactant，PS）的质和量改变是VILI的一个重要发病环节。

肺表面活性物质蛋白-B缺陷与足月新生儿呼吸窘迫综合征的相关性研究

目的探讨肺表面活性物质蛋白(surfactant protein,SP)-B缺陷与足月儿新生儿呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distress syndrome,NRDS)的相关性。方法2019年7月至2023年6月,在解放军总医院第七医学中心等4家医院开展研究。NRDS组纳入因患NRDS死亡的足月新生儿60例;对照组纳入同期因其他原因手术后死亡的足月、非NRDS患儿60例。采集胸部X线片结果。新生儿死亡后30 min内进行支气管肺泡灌洗、肺组织取材,采用蛋白质印迹法检测SP-B表达。统计学方法采用χ^(2)检验。结果NRDS组患儿生后出现严重高碳酸血症和低氧血症,采用外源性肺表面活性物质、有创高频振荡通气呼吸支持、一氧化氮治疗降低肺动脉高压等综合治疗措施,10例接受体外膜肺氧合治疗,均治疗无效死亡。NRDS组的X线胸片均显示白肺。NRDS组患儿支气管肺泡灌洗液中SP-B单体(分子质量8 ku)及二聚体(分子质量16~18 ku)表达阳性的比例均明显低于对照组[8 ku:75.0%(45/60)与100.0%(60/60),χ^(2)=17.143;16~18 ku:73.3%(44/60)与100.0%(60/60),χ^(2)=18.462;P值均<0.001];NRDS组肺组织中SP-B分子质量8 ku及16~18 ku表达阳性的比例也明显低于对照组[8 ku:75.0%(45/60)与100.0%(60/60),χ^(2)=17.143;16~18 ku:70.0%(42/60)与100.0%(60/60),χ^(2)=21.176;P值均<0.001]。NRDS组筛出SP-B缺陷个体15例,对照组仅1例,NRDS组SP-B缺陷的比例高于对照组[25.0%(15/60)与1.7%(1/60),χ^(2)=14.135,P<0.001]。结论SP-B缺陷与足月儿NRDS发病存在一定的相关性。

甲状腺转录因子-1、表面活性蛋白-B及细胞角蛋白对鉴别肺原发和转移性腺癌的意义

目的 研究鉴别肺原发腺癌和肺转移性腺癌的一组免疫组化标记物。方法 对 72例肺叶切除标本 ,包括 4 2例肺原发腺癌和 30例肺转移性癌进行常规福尔马林固定 ,石蜡包埋切片 ,用免疫组化方法检测了甲状腺转录因子 1(TTF 1)、表面活性蛋白 (SP B)及细胞角蛋白 (CK7、CK2 0 )的表达。结果 TTF 1和SP B在肺原发腺癌中的表达率分别为 74 %和 5 2 %。两种抗体相结合 ,在肺原发腺癌中表达的阳性率和特异性分别为 79%和 94 %。肺原发腺癌CK7染色全部为阳性 ,CK7阳性 /CK2 0阴性者 2 4例 (5 7% ) ,CK7阳性 /CK2 0阳性者 18例。肺转移癌以结肠腺癌及乳腺癌为主。结肠腺癌CK2 0染色全部为阳性 :CK7阴性 /CK2 0阳性者 11例 (92 % ) ,CK7阳性 /CK2 0阳性者1例。乳腺癌对细胞角蛋白染色结果与肺原发腺癌相似 :CK7阳性 /CK2 0阴性者 4例 ,CK7阳性 /CK2 0阳性者 4例。联合 4种抗体染色结果 :肺原发腺癌以CK7阳性 /TTF 1或SP B阳性为主(79% ) ,肺转移性乳腺癌以CK7阳性 /TTF 1和SP B阴性为主 ,肺转移性结肠癌以CK2 0阳性 /CK7阴性 /TTF 1和SP B阴性为主 ,P均 <0 0 0 1。结论 联合使用TTF 1、SP B、CK7和CK2 0这一组抗体有助于鉴别肺原发腺癌和转移性腺癌 ,以及提示某些常见肺转移性腺癌的原发部位。

肺表面活性蛋白-B、三磷酸腺苷结合盒转运子A3基因变异与新生儿呼吸窘迫综合征的研究进展

新生儿呼吸窘迫综合征（neonatal respiratory distress syndrome，NRDS）是新生儿期的常见重症，进展快、病死率高。NRDS由肺表面活性物质缺乏引起，发病机制复杂，涉及基因因素、环境因素和修饰基因相互作用等方面。肺表面活性物质由90％的磷脂和8％～10％的肺表面活性蛋白（pulmonary surfactant—associated protein，SP）组成。

高体积分数氧致慢性肺疾病新生鼠信号转导转录活化因子3表达及其对表面活性蛋白-B的影响

目的探讨高体积分数氧(高氧)损伤状态下,肺组织内信号转导转录活化因子3(STAT3)的动态变化规律,及其对表面活性蛋白-B(SP-B)的影响。方法新生鼠160只,依据吸氧体积分数(FiO2)分为4组:实验1组(FiO2=800 mL·L-1)、实验2组(FiO2=600 mL·L-1)、实验3组(FiO2=400 mL·L-1)、空气对照组(FiO2=210 mL.L-1)。每组分别于实验1d、3d、5d、7d、14d,免疫组织化学检测STAT3水平,反转录-PCR检测SP-B水平。结果高氧暴露使SP-B mRNA表达异常,实验1组1d、3d SP-BmRNA水平与空气对照组比较差异均无统计学意义(Pa>0.05),实验1组5d、7d、14d SP-B mRNA水平与空气对照组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05),实验2组5d时SP-B mRNA水平与空气对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),实验3组与空气对照组差异无统计学意义(P>0.05)。实验各组肺组织STAT3蛋白的表达高氧刺激3 d明显增加,5d、7d差异更为显著(Pa<0.05)。实验组SP-B mRNA表达与STAT3呈明显正相关(r=0.892,P<0.001)。结论高氧肺损伤的早期伴随有信号转导酪氨酸蛋白激酶STAT3通路的激活发挥其对肺组织的保护作用,SP-B合成、分泌信号可能是STAT3途径转导的。

支气管肺发育不良患儿肺表面活性蛋白-B基因9306（A／G）多态性

目的了解支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）患儿肺表面活性蛋白-B（surfactant protein-B，SP—B）基因9306（A／G）位点多态性的分布情况。方法研究对象为2008年1月1日至2012年6月30日华中科技大学同济医学院附属同济医院新生儿重症监护病房收治的86例BPD患儿与156例无相关疾病的患儿（对照组），采用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应技术检测SP—B基因9306（A／G）位点基因型，样本的群体代表性进行HardyWeinberg平衡检验；2组病例基因型频率比较采用Armitage’s趋势检验。结果BPD组AA基因型频率为67．4％（58／86），AG基因型频率为23．3％（20／86），GG基因型频率为9．3％（8／86），对照组各基因型频率分别为63．5％（99／156）、30．8％（48／156）和5．8％（9／156），2组差异没有统计学意义（X^2=0．003，P=0．957）。BPD组A等位基因频率为79．1％（136／172），G等位基因频率为20．9％（36／172），对照组A、G等位基因频率分别为78．8％（246／312）和21．2％（66／312），2组差异没有统计学意义（X^2=0．003，P=0．954）。结论汉族婴儿SP—B基因9306（A／G）位点的基因多态性与BPD发病无直接相关性。

硫化氢对大鼠内毒素性急性肺损伤肺泡表面活性物质的影响

目的:观察脂多糖(LPS)所致内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡表面活性物质(PS)的变化及硫化氢(H2S)对PS的影响,探讨H2S对肺脏的作用机制。方法:雄性SD大鼠共48只,随机分为6组(n=8):空白对照组、LPS组、LPS+NaHS低、中、高剂量组、LPS+PPG组。空白对照组给予生理盐水,LPS组给予LPS,LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组分别在给予LPS 3 h时腹腔注射低、中、高剂量氢硫化钠(NaHS)或炔丙基甘氨酸(PPG)。各组均于给予生理盐水或LPS 6 h时电镜下观察肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC-Ⅱ)的形态改变,检测血浆中H2S含量、肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性、肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)和总磷脂(TPL)含量、及肺组织中肺泡表面活性蛋白A、B、C(SP-A、B、C)mRNA表达的变化。结果:①与空白对照组比较,LPS组AEC-Ⅱ超微结构明显受损,血浆中H2S含量、肺组织中CSE活性、BALF中TPL的含量、及肺组织中SP-A、B、CmRNA表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),BALF中TP的含量明显增加(P<0.01);②与LPS组比较,LPS+NaHS低、中、高剂量组,AEC-Ⅱ超微结构均有所恢复,血浆中H2S含量、肺组织中CSE活性、SP-AmRNA表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);LPS+NaHS中、高剂量组BALF中TPL含量明显增高,SP-BmRNA表达升高(P<0.05);LPS+NaHS高剂量组BALF中TP含量明显降低(P<0.05);LPS+NaHS各剂量组SP-CmRNA表达无明显变化;③与LPS组比较,LPS+PPG组AEC-Ⅱ超微结构仍损伤严重,血浆中H2S含量、肺组织中CSE活性、BALF中TPL的含量、及肺组织中SP-A、B、CmRNA表达均明显降低(P<0.05),BALF中TP的含量明显升高(P<0.05)。结论:PS降低是内毒素性ALI的重要病理生理过程,H2S对LPS诱导的ALI有保护性作用,其机制可能与H2S对PS的调节有关。

TTF-1相关蛋白26磷酸化位点对人SP-B基因表达的影响

目的探讨甲状腺转录因子-1相关蛋白26(TAP26)对人肺表面活性蛋白-B(hSP-B)基因表达的调控机制。方法采用定点诱变PCR技术,分别突变掉TAP26的4个磷酸化位点(S48,S66,T219和T167S168),并获得TAP26的4个相应突变体;通过体外细胞共转染和荧光素酶报告基因活性值检测技术分别检测上述4个突变体对hSP-B基因启动子活性的影响。结果与野生型TAP26比较,突变体质粒TAP26(T167S168→V167A168)、TAP26(S48→A48)和TAP26(T219→V219)分别与hSP-B基因启动子共转染后所测荧光素酶活性值无明显差异(P>0.05);而当DNA浓度为400 ng的突变体质粒TAP26(S66→A66)与hSP-B基因启动子共转染后所测荧光素酶活性值则明显降低(P<0.05)。结论突变体质粒TAP26(S66→A66)不能促进hSP-B的表达,从而TAP26的S66蛋白激酶C(PKC)位点是TAP26移位到细胞核的重要部位。

急性肺损伤发病过程中IL-6与肺表面活性蛋白SP-A、SP-B的关系研究

目的:分析急性肺损伤中IL-6与肺表面活性蛋白-A(surfactant protein A,SP-A)和SP-B的含量变化及其相互关系,探讨急性肺损伤的发病机制。方法:用Wistar大鼠复制油酸性急性肺损伤动物模型,在不同时间点收集急性肺损伤大鼠血清标本及肺泡灌洗液(bronchoalveo larlavage fluid,BALF),用放射免疫法测定血清细胞因子IL-6的动态变化;采用ELISA法检测BALF中SP-A、SP-B含量的变化。结果与结论:急性肺损伤后大鼠血清中细胞因子IL-6的分泌水平显著上升(P<0.05),而BALF中SP-A、SP-B含量显著降低,且血清中IL-6含量升高与BALF中SP-A、SP-B下降幅度呈显著负相关。结果提示急性肺损伤中IL-6分泌的升高与肺表面活性蛋白SP-A、SP-B含量的降低有显著的相关关系,炎症细胞因子IL-6可能通过影响SP-A、SP-B的表达产生致病作用。

西格列汀通过上调TTF-1/SP-B通路对LPS诱导小鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探讨小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)状态下DPP4(dipeptidyl peptidase 4 inhibitor,DPP4I)抑制剂西格列汀对肺组织的保护作用及潜在的分子机制。方法 将32只雄性BALB/C小鼠随机分为对照组、DPP4抑制剂西格列汀组(DPP4I组)、内毒素组(LPS组)和LPS+DPP4I组,每组8只。采用气道内注射LPS建立小鼠ALI模型,72 h后获取标本,通过HE染色观察肺组织病理学改变及损伤评分,采用Diff-Quik染色对肺泡灌洗液(alveolar larage fluid,BALF)中炎症细胞分类计数,使用湿/干比(W/D)检测肺水肿程度,使用qPCR和western blotting法分析肺组织中甲状腺转录因子-1(thyroid transcription Factor 1,TTF-1)和表面活性物质相关蛋白-B(surfactant-associated protein-B,SP-B)的mRNA和蛋白表达水平。结果 小鼠气道内注射LPS干预72 h后,肺组织出现明显的病理学改变,肺损伤评分增加,肺水肿指标W/D显著升高,BALF中细胞总数、中性粒细胞数、巨噬细胞数和淋巴细胞数明显增多,肺组织中TTF-1和SP-B的mRNA和蛋白表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。对照组与DPP4I组未见明显病理改变。与LPS组相比,LPS+DPP4I组小鼠的肺组织病理改变程度、肺损伤评分、W/D比值、BALF中细胞总数、中性粒细胞数、巨噬细胞数和淋巴细胞数均明显更低,肺组织TTF-1和SP-B的mRNA和蛋白表达水平均明显更高(P <0.05)。结论 在小鼠ALI模型中DPP4抑制剂西格列汀可能通过上调肺组织TTF-1促进SP-B分泌,减轻肺损伤和炎症反应水平,为DPP4I应用于急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的临床治疗奠定了实验基础。

不同成熟度肺脏冲击伤后肺泡灌洗液中SP-B等相关指标时间点差异与意义探讨

目的探索未成熟肺与成熟肺在重度冲击伤后同一时间点肺泡灌洗液中SP-B含量差异,伤后相关指标变化、特点及意义。方法 4周龄幼年健康新西兰白兔[幼年兔组,雌雄不拘40只,体质量(442.10±55.30)g]与24周龄成年健康新西兰白兔[成年兔组,雌雄不拘40只,体质量(2018.15±145.80)g],采用不同驱动压构建实验动物伤情一致的动物模型(驱动压:幼年兔组4.5 MPa,成年兔组4.0 MPa)。在两组伤情一致情况下分别于伤即刻(0 h),2、4、6、12、24、48、72 h检测肺泡灌洗液中SP-B浓度(ELISA法)、观测动物肺大体解剖和光镜病理、测定肺组织含水量和生理指标等。结果两组肺损伤程度较为一致(P>0.05),所有时间点幼年兔组SP-B浓度均低于成年兔组(P<0.05)。幼年兔以肺泡壁断裂和损伤居多,成年兔以肺泡及间质内出血及炎症细胞浸润多见。伤后2 h肺含水率(82.68±0.58 vs 81.06±0.34)、伤后0.5 h血氧饱和度(75.00±18.52 vs 42.20±21.84)均为幼年兔高于成年兔(P<0.05)。伤后6 h(36.92±16.01 vs 60.30±12.09)、12 h(31.42±11.30 vs 46.40±14.15)、24 h(29.48±4.76 vs 35.52±9.77)和48 h(25.70±11.66 vs 37.68±9.11)中性粒细胞百分比则为幼年兔组低于成年兔组(P<0.05)。结论冲击伤后幼年兔未成熟肺与成年兔成熟肺相比肺水肿恢复较快、炎症反应较轻;但SP-B含量较低、合成和分泌功能恢复较慢,可能导致其呼吸功能恢复较慢;从而用以指导不同成熟度肺损伤的临床救治。

甲状腺转录因子-1及相关蛋白26对SP-B基因表达的调控作用

甲状腺转录因子-1(thyroidtranscriptionfactor-1,TTF-1)是调节SP-B基因表达的关键因子。最近研究发现了一种新的蛋白即TTF-1相关蛋白(TAP26),它不仅能与SP-B基因启动子近侧序列相互作用,而且还能与TTF-1形成蛋白复合物,促进SP-B基因的表达。采用染色质免疫沉淀分析证实TAP26是肺细胞中SP-B启动子转录复合物的一个组成部分,为SP-B基因表达的调控提供分子机制。

新生小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离方法

目的提取新生小鼠的原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ),并进行培养和鉴定。方法应用酶消化和免疫磁珠分选方法分离并纯化C57B/L6新生小鼠AECⅡ。根据AECⅡ特异的细胞形态,利用透射电镜进行鉴定。正置荧光显微镜观察AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C前体(proSP-C)及表面活性蛋白-B(SP-B)的表达。免疫印记技术检测新生小鼠AECⅡ中特异性肺泡表面活性蛋白-A(SP-A)及proSP-C的表达。结果每只新生小鼠可获得(2±0.5)×10^5AECⅡ,纯度>90%。电镜下可见丰富的AECⅡ及其特异结构板层小体。正置免疫荧光显微镜观测AECⅡ中proSP-C和SP-B蛋白的表达,免疫印迹结果显示细胞内SP-A和proSP-C蛋白表达呈阳性。结论利用酶消化和免疫磁珠分选的方法可成功分离出高产量、高纯度的新生小鼠AECⅡ。

不同浓度VEGF对AECII表达SP-B和TGF-β1的影响及意义

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对肺泡II型细胞(type 2 alveolar epi-thelial cell,AECⅡ)表面活性蛋白-B(surfactant associated protein,SP-B)和转化生长因子-β1(transforming growth fac-tor beta-1,TGF-β1)表达的影响及意义。方法原代培养早产鼠AECII,采用real-time RT-PCR、细胞免疫染色等方法,观察VEGF对AECII SP-B及TGF-β1表达的影响。结果 Real-time PCR结果显示25ng/ml VEGF组与正常组相比SP-B mRNA表达水平明显上升(P<0.05)。25ng/ml VEGF组与正常组相比TGF-β1 mRNA表达明显下降(P<0.05),其他各组与正常组相比无统计学差异(P>0.05)。结论 VEGF在适宜浓度时有促进SP-B表达的作用,同时有抑制TGF-β1表达的作用,推测VEGF促进SP-B表达的作用与直接或间接抑制TGF-β1的表达有关。