HPS OmpP2表面环状结构诱导猪肺泡巨噬细胞炎性因子mRNA转录的研究

副猪嗜血杆菌(HPS)对养猪业造成了严重的影响。外膜蛋白P2(OmpP2)是HPS外膜中最丰富的蛋白,能介导宿主的炎症反应。试验通过人工合成OmpP2的表面环状结构(Loop)氨基酸序列体外刺激猪肺泡巨噬细胞(PAMs),探究OmpP2中不同Loop在炎性反应中的作用。用HPS血清4型SC096菌株OmpP2作为参照,通过real-time PCR方法测量8个Loop刺激PAMs细胞6 h后IL-1ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8、CCL-4、CCL-5细胞因子mRNA的转录水平。与对照细胞相比,8个Loop均能诱导PAMs中IL-1ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8、CCL-4、CCL-5细胞因子mRNA转录出现不同程度的上调,其中Loop7和Loop8刺激细胞后细胞因子mRNA转录水平上调显著(P<0.05)。提示Loop7和Loop8是OmpP2发挥促炎功能的一个重要组成结构。

精密深孔表面环状硬挤条纹的产生机理与控制

本文建立了不同条件下环状硬挤条纹的生成模型,详细分析了其产生机理.用理论解析和试验验证了所建模型的可靠性,最后提出了控制其产生的方法.

Loop6、Loop7和Loop8参与副猪嗜血杆菌OmpP2抗血清的杀菌作用研究

为研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P2(OmpP2)不同表面环状结构(Loop)在HPS抗血清杀菌过程中发挥的作用。本研究以pBAD18-Km质粒和HPS SC096为模板,PCR扩增卡那霉素抗性基因(Km)片段和含ompP2 TTA终止密码子下臂基因片段。通过重叠延伸PCR扩增融合基因片段Km-ompP2克隆至自杀性质粒pK18mobsacB中,获得重组自杀性质粒pZY01。以HPS SC096为模板经PCR分别扩增ompP2 Loop1~Loop8上臂片段和ompP2 Loop1~Loop 8下游片段,并经重叠延伸PCR扩增各loop基因融合片段(分别缺失Loop1~Loop8基因序列的ompP2片段)并克隆至pZY01,构建各Loop基因缺失的自杀性质粒pZY02~pZY08,所有的自杀性质粒均经PCR鉴定。将正确构建的自杀性质粒pZY01~pZY08通过自然转化法转化至ompP2基因缺失的HPS SC096(SC096ΔompP2)中,构建了HPS ompP2ΔLoop缺失菌株,并均经PCR鉴定后在TSA中传10代,通过PCR方法检测其遗传稳定性。结果显示,正确构建了8个自杀性质粒pZY01~pZY08及缺失各Loop基因的HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8,共5个HPS ompP2ΔLoop缺失菌株,且各缺失菌株的Loop基因均能够稳定缺失,表明其均具有较好的遗传稳定性。未获得HPS ompP2ΔLoop1、ompP2ΔLoop3和ompP2ΔLoop4缺失菌株。制备新鲜兔血清并分别测定不同HPS ompP2ΔLoop缺失菌株在50%和90%兔血清中的存活率,分析不同缺失菌株的抗兔血清中补体介导的杀菌作用。结果显示,与HPSΔompP2菌株相比,HPS ompP2ΔLoop2菌株在50%和90%兔血清中的存活率分别增加了4×10^(5)倍和1×10^(6)倍;HPS ompP2ΔLoop5菌株在50%和90%兔血清中的存活率分别增加了3×10^(5)倍和1×10^(6)倍;HPS ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8的存活率无显著变化。与野生型SC096株相比,在50%兔血清中,HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8缺失菌株的存活率分别降低了53.7%、60.1%、99.8%、99.6%和99.9%;在90%兔血清中,上述HPS ompP2ΔLoop菌株的存活率分别降低了78.0%、84.4%、99.9%、99.9%和99.9%。以上结果表明Loop6、Loop7和Loop8参与OmpP2的抗血清杀菌作用,且这三者可能是OmpP2重要的活跃肽段。本研究为探究HPS ompP2的毒力机制提供参考。

环状构象PEG改性表面及其优越的抗凝血性能

聚乙二醇(PEG)因其优异的抗蛋白质吸附能力成为抗凝血材料的首选.目前,多数研究都集中在PEG链长和接枝密度对蛋白质吸附的影响,鲜有关注PEG链构象影响的研究.本文利用硫金键在石英晶体微天平金片表面构建了两种不同分子量(MW=1000和MW=5000)的环状(SH-PEG-SH)和线型(m PEG-SH)构象的PEG改性表面,并研究了其抗纤维蛋白原吸附机理和抗凝血性能.X射线光电子能谱仪和原子力显微镜确定了不同表面的组成及其相结构.结果发现,环状构象的PEG表面相对于线型PEG构象能更加有效地抑制纤维蛋白原的吸附,同时具有更加优异的抗血小板和红细胞黏附性能.分析其蛋白质吸附机理发现,当PEG分子量较低时(MW=1000),其环状构象PEG表面抗纤维蛋白原吸附机理源于较高的表面覆盖率;当PEG分子量较高时(MW=5000),其抗纤维蛋白原吸附机理源于高黏弹性和高表面覆盖率共同作用的结果.本工作为构建抗凝血涂层提供了新的思路,并为制备高性能生物医用材料提供了理论基础.