肺表面活性蛋白C基因突变相关性新生儿呼吸窘迫综合征2例并文献复习

目的总结2例肺表面活性蛋白C基因(SFTPC)突变的新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的临床特点和基因诊断,提高对该病的认识。方法总结分析本文2例NRDS患儿的临床资料和基因检测结果,并进行文献复习。结果 2例患儿分别为38^(+3)周足月儿和35(+2)周早产儿,均于生后即发生呼吸窘迫,X线胸片示NRDS,病原学检查均为阴性。均否认肺部疾病家族史。表面活性物质替代治疗和正压辅助通气支持有效。基因检测显示:1例为SFTPC基因c.68G>G/A,p.R23Q杂合错义突变,为首次报道;1例为SFTPC基因c.115G>G/T,p.V39L杂合错义突变,为已报道致病突变。共检索到临床资料完整的SFTPC突变NRDS 6篇文献7例,结合本文2例,9例均生后呼吸窘迫,影像学以弥漫性侵润和间质性改变为主,多予机械通气、PS对症支持治疗,2例死亡,1例间质性肺病,1例支气管肺发育不良,4例随访健康,1例失访。结论中国NRDS病例中存在SFTPC基因突变,相关基因突变的识别,可为早期干预、预后判断以及遗传咨询提供依据。

硫酸羟氯喹治疗肺表面活性蛋白C基因突变致婴儿间质性肺病1例并文献复习

目的报道硫酸羟氯喹治疗肺表面活性蛋白C基因(SFTPC)突变致婴儿间质性肺病的疗效,提高对该病诊断和治疗的认识。方法总结分析1例SFTPC突变致婴儿间质性肺病的临床特点、诊断过程和硫酸羟氯喹的疗效,并进行文献复习。结果患儿女,2月龄,因"生后反复咳嗽伴气促2个月"于2015年9月9日就诊。患儿在新生儿期即发生呼吸窘迫,持续无法离氧。影像学示肺部渗出,病原学检查均阴性,常规抗感染治疗无效,否认肺部疾病家族史。基因检测发现SFTPC基因外显子4有1个杂合错义突变位点(c.T337C:p.Y113H),目前尚无报道。患儿13月龄时开始硫酸羟氯喹治疗,治疗6个月后,呼吸窘迫、生长发育情况和胸部CT影像学表现明显改善。在Pub Med、Web of Science、中国知网、维普数据库和万方数据库中检索SFTPC基因突变的间质性肺病,检索时间均从建库至2016年12月1日,共检索到相关文献12篇,均为英文文献。总结包括本文1例患儿在内的51例SFTPC基因突变致间质性肺病病例使用硫酸羟氯喹的治疗情况,随访0.3~15.8年,其中单用硫酸羟氯喹治疗的有12例,均取得良好疗效,未提及或未发现药物不良反应;全身糖皮质激素合用硫酸羟氯喹治疗39例,33例(84.6%)有效,2例(5.1%)无改善,4例(10.3%)恶化(1例死亡)。结论对于SFTPC基因突变的婴儿间质性肺病,早期发现和早期诊断很重要,及早使用硫酸羟氯喹治疗可以改善临床症状、体征和生长发育情况,减少终末肺的发生。

肺表面活性物质相关蛋白C原核表达载体的构建、表达及纯化

背景:研究表明肺表面活性物质蛋白基因缺陷导致肺表面活性物质蛋白的结构发生变化。早期检测肺表面活性物质的含量对于预测肺部疾病的发生意义重大。目的:克隆人肺表面活性物质相关蛋白C(surfactant associated protein C,SP-C)基因,构建原核表达载体PET-28a/SP-C,并纯化SP-C蛋白。方法:提取正常人肺组织总RNA,RT-PCR技术获得SP-C cDNA序列,纯化后的SP-C基因插入至中间载体PMD-18T,得到重组质粒PMD-18T-SP-C,重组质粒经过Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后纯化回收得到具有黏性末端的SP-C cDNA,将质粒PET-28a同样经过双酶切后纯化回收得到与SP-C cDNA具有相同黏性末端的质粒片段,将具有黏性末端的SP-C cDNA与PET-28a定向连接后得到重组质粒PET-28a/SP-C。然后将鉴定正确的PET-28a/SP-C重组质粒转入BL21中诱导表达。结果与结论:酶切鉴定及核苷酸序列测序证实扩增的SP-C cDNA及其重组质粒经过Bam HⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后,在5000～7500bp和250～1000bp处可检测到2条条带。核苷酸序列测序结果证实,质粒中插入基因长597bp,为一开放阅读框架,与GeneBank中公布的人SP-C cDNA序列相符。Western-blot检测结果显示,纯化后的SP-C蛋白在相对分子质量约27000处出现1条新生条带,与预期的大小一致。结果证实,实验成功克隆人SP-C基因并插入至质粒PET-28a中,构建了PET-28a/SP-C重组质粒,将其体外转化至BL21后可以表达SP-C蛋白。

高氧对早产大鼠肺表面活性蛋白C表达的影响

目的探讨高氧对早产大鼠肺表面活性蛋白C(SP-C)表达的影响。方法孕21dSD早产大鼠,生后12～24h内随机分为空气组、高氧组。于空气或高氧暴露后1、4、7、10和14d提取肺组织,采用RT-PCR测定SP-C mRNA表达,免疫组化和Western-blot检测SP"C蛋白表达。结果早产大鼠生后肺组织SP-C表达1d时最高,4d后表达渐减弱,其阳性染色信号主要定位于Ⅱ型肺泡上皮细胞。高氧暴露1d,肺组织SP-C mRNA及蛋白表达显著低于空气组,以后增加,高氧7d增加最明显,高氧14d时SP-C表达较空气组又减弱。结论SP-C参与了早产大鼠肺发育及高氧肺损伤的生理与病理过程,高氧暴露导致SP-C表达下调或功能障碍是促使高氧肺损伤发生发展的重要因素。

高碳酸培养环境对A549细胞合成、分泌肺泡表面活性蛋白C的影响

目的研究不同培养浓度CO2对A549活性、合成和分泌肺泡表面活性蛋白C(SP-C)的影响,为允许性高碳酸血症的肺保护机制提供理论依据。方法 A549细胞按不同CO2培养浓度分为A组(5%CO2)、B组(10%CO2)和C组(18%CO2)。细胞培养24 h、36 h、48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;免疫印迹法检测细胞内肺泡表面活性蛋白C前体蛋白(proSP-C)的水平;酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中SP-C的浓度。结果 (1)与A组比较,B组各观测点的细胞活性均增高;C组的细胞活性则在36 h、48 h降低。(2)B组36 h、48 h细胞培养液中SP-C浓度较A组升高,但是细胞内proSP-C差异无统计学意义。(3)与A组比较,C组24 h培养液中的SP-C浓度已开始降低,但胞内proSP-C在36 h才开始下降。结论 (1)一定的CO2培养浓度升高不影响A549的活性,对SP-C的合成和分泌起促进作用;(2)过高的CO2培养浓度可抑制A549的活性、SP-C的合成和分泌。

老年大鼠肺表面活性物质相关蛋白CmRNA表达

目的探讨老年大鼠肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)的变化。方法观察老年组大鼠(26月)及青年组大鼠(3月)光镜下肺组织结构、肺组织SP-CmRNA表达。结果老年组大鼠肺泡囊扩张、肺泡腔轻度扩大。肺组织SP-CmRNA表达降低,占青年组的50%。结论老年大鼠SP-CmRNA表达下降。肺泡Ⅱ型上皮细胞可能参与了肺老化过程。

急性肺损伤对大鼠肺表面活性物质蛋白C合成的影响

目的探讨急性肺损伤对肺泡Ⅱ型上皮细胞合成肺表面活性物质蛋白C(SP-C)蛋白的影响。方法48只SD大鼠腹腔注射内毒素-脂多糖(LPS,5mg/kg)建立急性肺损伤(ALI)模型,对照组48只注射等量生理盐水。LPS注射12、24、36、48h后处死大鼠,以光学显微镜观察肺组织病理变化,测量肺系数及支气管-肺泡灌洗液(BALF)总蛋白质变化,采用Western印迹、流式细胞术(FCM)检测肺组织SP-C蛋白质的表达情况。结果ALI组光镜观察可见肺泡间隔增宽,肺泡腔出现渗出物,部分肺泡萎陷。肺系数及总蛋白检测结果显示ALI各组与对照组相比差异均有统计学意义。Western印迹检测发现ALI组SP-C蛋白质相对表达量均较相应对照组降低,36h、48h组差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测结果显示ALI36h、48h组SP-C含量分别为0.79±0.10、0.67±0.09,明显低于相应对照组的0.96±0.11、0.97±0.13(P<0.05)。结论急性肺损伤导致肺组织SP-C合成减少。

变形链球菌表面蛋白V区、P区及C末端遗传多态性与龋病发生关系的研究

目的 了解变形链球菌表面蛋白 V区、P区及 C末端遗传多态性与其粘附性能的关系。方法 实验菌株选自本实验室前期工作所获得的粘附力较强和较弱的血清 c型变形链球菌临床分离株 ,提取全菌 DNA ,经PCR分别扩增表面蛋白 V区、P区编码基因 spa P- pv(2 0 6 0～ 315 7bp)、C末端编码基因 spa P- c(4 0 0 3～ 4 85 1bp)后 ,用限制性内切酶 Alu 进行限制性片段长度多态性分析。结果 两组不同粘附力的变形链球菌 (血清 c型 )临床分离株全菌 DNA扩增产物 spa P- pv经 Alu 酶切后 ,出现了两种基因型 a、b。两种基因型在不同粘附力菌株的分布不同 (P<0 .0 5 ) ,a型在低粘附力菌株中的比例高于高粘附力菌株 ,而 b型在高粘附力菌株中的比例高于低粘附力菌株。 spa P- c经 Alu 酶切后 ,共呈现两种基因型 c、d。 d型在高、低粘附力的菌株中各占 1例 ,其分布无统计学差异。结论 spa P-

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中表面活性蛋白C表达与呼吸参数的关系

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中表面活性蛋白C(SP-C)表达与呼吸功能的关系。方法将20只Sprague Dawley大鼠随机分为COPD组和对照组,每组10只。COPD组大鼠每日香烟烟雾暴露2次,每次30 min,持续暴露28 d,第1、14天气管内滴注脂多糖1 mg·kg^-1。对照组大鼠正常饲养,不做任何处理。第29天,2组大鼠腹腔注射40 g·L^-1水合氯醛(10 mL·kg^-1)麻醉,暴露膈肌,使用2个针式电极连接膈肌和BL-420生物信号采集处理系统,采集呼吸曲线,记录吸气时间、呼气时间、呼吸幅度、呼吸频率。呼吸曲线参数采集后处死大鼠,完整取出双侧肺脏;采用免疫组织化学染色观察肺组织中SP-C蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测肺组织中SP-C蛋白水平,反转录-聚合酶链反应检测肺组织中SP-C mRNA表达。结果COPD组大鼠吸气时间、呼气时间、呼吸幅度、呼吸频率分别为(263.29±14.01)ms、(429.32±13.52)ms、(3.79±1.02)g、(82.39±7.15)次·min^-1,对照组大鼠吸气时间、呼气时间、呼吸幅度、呼吸频率分别为(290.51±17.24)ms、(371.45±12.19)ms、(4.93±1.27)g、(71.21±5.04)次·min^-1;与对照组比较,COPD组大鼠吸气时间缩短,呼气时间延长,呼吸幅度变小,呼吸频率升高(P<0.05)。COPD组和对照组大鼠肺组织匀浆中SP-C蛋白表达水平分别为(346.19±17.03)、(465.82±21.60)μg·L^-1,COPD组大鼠肺组织匀浆中SP-C蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)。COPD组和对照组大鼠肺组织中SP-C mRNA相对表达量分别为0.141±0.012、0.224±0.003,COPD组大鼠肺组织中SP-C mRNA相对表达量显著低于对照组(P<0.05)。结论香烟烟雾和脂多糖可损伤大鼠肺泡上皮,使SP-C释放减少,肺顺应性降低,导致肺通气及肺换气不足,呼吸功能下降。

不同胎龄新生儿肺表面活性蛋白C水平初步调查

目的探讨不同胎龄新生儿肺表面活性蛋白C(SP-C)水平。方法选择2013年1月-2014年1月收集的初生儿的外周血,不同胎龄早产儿的脐带血,羊水标本采集,胚胎胎龄不一。对这118份标本进行蛋白C含量的试验,了解不同胎龄的新生儿肺SP-C的变化。结果 SP-C的含量从25周开始就逐渐升高,新生儿出生时肺SP-C水平可达到(5.28±0.39)ng/L。结论肺SP-C随着胚胎的成熟逐渐达到高峰,其在新生儿出生时达到极点,并且这也是新生儿肺成熟的标志。

非小细胞肺癌患者外周血中肺表面活性蛋白CmRNA的表达及临床意义

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中肺表面活性蛋白C mRNA(SP-C mRNA)在病理确诊后的表达及其意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术来检测44例非小细胞肺癌患者外周血中SP-C mRNA的表达,并以20例肺良性病变患者和10名健康人作为对照。结果:44例肺癌患者外周血SP-C mRNA表达阳性率为59.1%;20例肺良性病变患者和10名健康人的外周血中无SP-C mRNA表达。结论:通过检测非小细胞肺癌患者外周血,SP-C mRNA可能是良好的微转移分子标志物。

肺表面活性蛋白C基因突变致婴幼儿间质性肺病3例并文献复习

目的:分析3例肺表面活性蛋白C基因(SFTPC)突变致婴幼儿间质性肺病(ILD)的临床资料,结合文献复习,分析特点。方法:总结近2年住院的3例患儿的临床特点并进行文献复习。结果:1) 例1为35周早产女婴,3月龄起病,有慢性缺氧,杵状指等表现。例2、3为31周早产双胎,生后起病,姐姐反复下呼吸道感染,生长发育落后;弟弟平素无症状,呼吸道感染后易出现咳嗽、气促。胸部CT均提示肺间质病变。基因检测SFTPC均有杂合错义突变,例1为c.218T】C (p.I73T),双胎为c.115G】T (p.V39L)。治疗上例1在气管镜下注入牛肺表面活性物质,例2口服激素,例3无特殊治疗。2) 检索到5例临床资料完整的SFTPC突变相关婴幼儿ILD,结合本文3例显示:多在1岁内起病,表现为咳嗽、气促、反复呼吸道感染,胸部CT示间质性改变,基因检查有助于早期诊断,激素、免疫抑制剂治疗可能有效。结论:SFTPC突变与部分婴幼儿ILD密切相关,重视基因检测在婴幼儿ILD中的作用。

肺表面活性物质蛋白C基因I73T突变相关性婴幼儿肺间质疾病一例

病例资料患儿,男,1岁,因咳嗽20余日,加重2d,伴发热。于我院免疫科病房住院治疗。入院前夜可见咳后伴呻吟及呼吸困难。查体：神志清,反应可,呼吸促,面色可,无发绀,咽充血,双肺呼吸音粗,可闻及干、湿性啰音,左肺呼吸音减低,心音有力,律齐,心率160次/分,各瓣膜听诊区未闻及病理性杂音,腹软不胀,未及包块,肝脾肋下未及,肠鸣音存,四肢活动正常。

肺炎链球菌蛋白PspC的制备与鉴定

目的对肺炎链球菌表面蛋白C(PspC)进行全基因合成、重组表达、纯化制备和鉴定。方法根据Gen Bank中Psp C的基因序列和氨基酸序列,通过密码子优化和全基因合成的方式获得目的蛋白基因,构建无标签、高效重组表达菌株,建立重组蛋白的纯化制备方法,并进行抗原鉴定及免疫原性检测分析。结果人工合成的Psp C基因序列经鉴定与预期一致,目的蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量在30%以上,经两步纯化后纯度达到95%。重组蛋白能与肺炎链球菌阳性血清产生特异性抗原抗体反应,免疫小鼠后可诱导产生较高水平的蛋白特异性抗体。结论获得了重组肺炎链球菌蛋白Psp C,其具有与天然抗原相似的抗原性和免疫原性,为今后开展疫苗研制、载体蛋白应用等研究奠定基础。

补肾益肺消癥方对α-SMA及SP-C蛋白对肺纤维化大鼠病变肺组织分布及表达的影响

目的探讨补肾益肺消癥方干预肺纤维化大鼠α-SMA及SP-C蛋白在病变肺组织中分布及表达的作用机制。方法以博来霉素致大鼠肺纤维化的动物模型,以吡非尼酮作为阳性对照药物,补肾益肺消癥方分别于模型过程中、造模后及实验全程进行干预,观察动物活动及体重变化,免疫组化检测病变肺组织中α-SMA、SP-C蛋白表达。结果大鼠体重显示,模型组体重较正常组明显减轻(P<0.05),中药防治组体重较模型组明显升高(P<0.05)。免疫组化、免疫荧光结果显示,模型组病变肺组织中α-SMA、SP-C蛋白表达较正常组明显升高(P<0.05),阳性组和中药组α-SMA、SP-C蛋白表达较模型组明显减低(P<0.05)。结论补肾益肺消癥方可以通过减少α-SMA的表达及成熟SP-C蛋白沉积,减少成纤维灶的形成,抑制内质网应激反应,延缓特发性肺纤维化的病理进程,从而达到治疗的目的。

脓毒症性ARDS大鼠肺泡表面活性物质结合蛋白的变化及乌司他丁的干预效果

目的:观察乌司他丁注射液干预前后盲肠结扎穿孔法(CLP)致脓毒症性急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺泡表面活性物质的改变,探讨表面活性物质在CLP致ARDS发生中的作用以及乌司他丁对其影响。方法:健康成年SD大鼠90只,体质量200~240 g,随机分为3组:假手术对照组(Sham组,n=30)、脓毒症组(CLP组,n=30)和乌司他丁组(UST组,n=30)。利用CLP法建立大鼠脓毒症模型。测定各组大鼠造模后6、12、24、48 h四个时间点肺湿/干质量比(肺水肿指数);使用苏木精-伊红(HE)染色方法和透射电镜对肺组织进行病理观察及急性肺损伤病理评分;通过实时荧光定量核酸扩增技术(RT-PCR)和免疫印迹试验(WB)分别检测肺泡表面活性物质结合蛋白B(SP-B)和肺泡表面活性物质结合蛋白C(SP-C)在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况。结果:与对照组相比,肺水肿指数和肺损伤病理评分显示乌司他丁组大鼠肺损伤明显减轻(P<0.05);乌司他丁组大鼠肺组织中SP-B和SP-C在mRNA水平和蛋白质水平的表达都较CLP组明显升高(P<0.01)。结论:乌司他丁可以提高脓毒症性ARDS大鼠肺泡表面活性物质结合蛋白含量,有效减轻肺损伤。

Wnt7b/β-catenin信号通路分子在肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化过程中的变化

目的探讨Wnt7b/β联蛋白(β-catenin)信号通路分子在胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(f AEC2)分化过程中的变化。方法取孕19 d胎鼠肺组织,分离、纯化得到fAEC2。培养细胞48、72、96 h,倒置显微镜观察fAEC2形态变化,免疫荧光染色观察β-联蛋白(β-catenin)的表达,实时定量PCR检测细胞中Wnt7b、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、表面蛋白C(SP-C)和水通道蛋白5(AQP5)的mRNA变化,Western blot法检测cyclin D1、细胞核β-catenin、SP-C、AQP5蛋白的表达。结果 fAEC2培养48 h,β-catenin在细胞膜表达;培养72 h,β-catenin在细胞膜的表达较前减弱,在细胞质、细胞核中表达增强;培养96 h,全细胞β-catenin表达下调。Wnt7b、cyclin D1 mRNA的表达在72 h时显著增高,96 h时下降明显;SP-C mRNA的水平随培养时间的延长逐渐下降,AQP5 mRNA的水平逐渐升高。Cyclin D1、细胞核β-catenin蛋白在72 h时表达上调,96 h时表达下调;SP-C蛋白的表达量逐渐降低;AQP5蛋白的水平逐渐升高。结论 Wnt7b/β-catenin信号通路可能在fAEC2转分化中起重要作用。

Foxp3在小鼠肺发育中的动态表达及意义

目的:通过分析叉头样转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)在小鼠肺发育过程中的表达及其与肺发育相关标志物之间的关系,探讨Foxp3在肺发育中的可能作用。方法:根据小鼠肺发育的进程,选取胎鼠及新生鼠分为6组,分别于孕17.5 d及出生后1、4、7、14、21 d留取肺组织,HE染色观察肺组织形态,免疫组织化学染色检测CD31含量并观察肺微血管密度。qRT-PCR检测Foxp3及肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)、血管生成素-1(angiopoietin 1,Ang-1)mRNA表达,蛋白质印迹法检测Foxp3及SP-C、VEGF-A、Ang-1蛋白表达。结果:肺组织内Foxp3 mRNA在孕17.5 d小管期表达最高,后呈现不断减少趋势。SP-C mRNA在小鼠出生后1 d表达最高,随后逐渐减弱,直至肺泡化晚期。VEGF-A、Ang-1 mRNA在孕17.5 d表达最高,之后呈现不断减少趋势,最终趋于稳定。Foxp3蛋白在小管期已有表达,且在小管期及囊泡期表达最高,其后逐渐趋于平稳,VEGF-A及Ang-1在小管期及囊泡期表达亦最高,后逐渐减少;SP-C表达于出生后1 d达到最高,随后逐渐减少,并于肺泡化中晚期趋于平稳。相关性分析显示,Foxp3与SP-C、VEGF-A及Ang-1存在相关性(r分别为0.661、0.630和0.738)。结论:Foxp3在胎肺期及出生后早期呈现动态表达,Foxp3在小管期及囊泡早中期的高表达与SP-C、VEGF-A及Ang-1呈正相关,提示Foxp3可能促进肺泡上皮细胞及肺血管内皮细胞的增殖,参与肺发育过程。

SP-C基因exonⅡ结构基因突变与新生儿呼吸窘迫综合征的关系

目的探讨表面活性物质蛋白C(SP-C)基因exonⅡ结构基因突变与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的关系。方法选取2014年2月至2017年12月在我院治疗的NRDS患儿110例(NRDS组),同时选取新生儿病房非NRDS患儿110例作为对照组,采用PCR及基因分析技术检测SP-C基因exonⅡ突变。结果 SP-C基因exonⅡ基因测序发现第115位基因位点杂合突变c.115G>T,为错义突变;NRDS组G/T基因型比例为8.18%,明显高于对照组0.00%,差异比较有统计学意义(P<0.05);G/T患儿胸片Ⅲ~Ⅳ级比例和病死率分别为100.00%和66.67%,明显高于GG型患儿51.49%和6.93%(P<0.05);G/T和GG型患儿性别、胎龄、出生体重、使用机械通气比例和PS使用3~4剂比例差异比较无统计学意义(P>0.05)。结论 SP-C基因exonⅡc.115G>T基因突变可能与NRDS严重程度有一定关系,值得进一步研究。