BALB/c小鼠腹腔接种HBV表面S抗原疫苗引起的CTL反应(英文)

目的研究BALB/c小鼠免疫接种HBV表面S抗原疫苗(HBV small surface vaccine,S-HBsAg)能否引起特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应.方法分别给BALB/c小鼠腹腔内接种0～6μg S-HBsAg,两周后加强一次,4周后分离小鼠脾细胞,体外用S-HBsAg特异性CTL表位多肽刺激;用特异性多肽、51Cr标记的P815细胞作为靶细胞;4 h51Cr释放实验检测CTL反应.结果分别接种0、0.65、1.25、2.5、5μg S-HBsAg的小鼠,其脾淋巴细胞CTL特异性释放率分别为31.21%±9.23%、42.36%±19.32%、91.21%±22.97%、69.25%±24.13%、51.49%±21.661%;只接受一次免疫接种的小鼠,其脾淋巴细胞CTL特异性释放率分别为27.34%±14.25%、32.27%±15.35%、56.28%±24.35%、44.34%±18.65%、40.76%±56%.结论BALB/c(H-2d)小鼠腹腔内接种S-HBsAg引起剂量依赖性特异性CTL反应,加强免疫能够提高CTL反应.

乙型肝炎病毒表面s抗原检测的临床意义和应用评价

目的:探讨表面S抗原的测定对乙型肝炎诊断的作用及意义。方法:分析我院近期收治的156例乙型肝炎患者的表面S抗原结果和HBV-DNA定量结果,探讨表面S抗原的诊断意义。结果:本组156例乙型肝炎患者都显示不同指标阳性,以HBsAg阳性率为最高,达94.9%(150/156),其次为抗-HBc阳性率,为79.5%(140/156);其中,30岁年龄组所占的比例最高。结论:表面S抗原测定结果可以为临床诊断乙型肝炎提供重要的依据,适合在基层临床中广泛推广。

乙肝表面抗原小蛋白S基因导入番茄的遗传转化体系的建立

以丽春番茄无菌苗的子叶为外植体,以农杆菌菌株EHA105(包含质粒pBin438S)为载体,将乙肝表面抗原小蛋白S基因导入番茄组织中.基本培养基采用MS+6-BA1 0mg/L+IAA0 2mg/L,在共培养时加入乙酰香酮100μmol/L作为诱导剂,经过组织培养得到转基因植株.对转化植株基因组进行的分子学PCR检测表明,外源基因有可能已整合到番茄基因组中.该转基因遗传体系的建立为利用转基因植物生产乙肝口服疫苗奠定了基础.

乙型肝炎病毒表面抗原S和前S1融合基因转基因细胞系的建立与细胞性质的研究

构建了 pCHBSSIG质粒 ,其特点是CMV立即早期启动子调控乙型肝炎 (乙肝 )表面抗原S +前S1融合基因在前 ,SV40早期启动子调控GS扩增基因在后 ,此质粒转化到CHO dhfr-细胞中 ,经克隆加MSX及MTX筛选、扩增 ,建立了 7个高效表达乙肝表面抗原S及前S1融合蛋白细胞系GdSS1,并检测了其中GdSS1 18细胞系的生物学特性 ,结果表明 :未发现微生物污染 ,无致瘤性 ,遗传稳定 ,电镜下可观察到 2 2nm的颗粒 ,纯化后的蛋白在SDS PAGE及Westernblot中显示出特异性的 2 7kD、30kD乙肝表面抗原S和前S1的融合蛋白带。主蛋白的反向被动血凝(RPHA)滴度为 1∶2 5 6～ 1∶5 12 ,前S1蛋白的ELISA滴度为 1∶12 8。

哺乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面S+PreS1融合抗原的理化和生物学性状

研究了哺乳动物细胞(转基因GdSS1-18细胞系)分泌的乙型肝炎(乙肝)病毒表面S+PreS1融合抗原(SS1)纯品的理化及生物学性状,结果表明:经HPLC柱层析呈现一个对称峰,证明HBsAg颗粒所带电荷的均一性;SDS-PAGE出现P24及P27条带,未出现Gp30的条带,凝胶扫描分析其各条带分别各占22 3%、77 7%、0%;West ernblot试验证实,P27和Gp30能与S及S1抗体结合,而P24条带仅能与S抗体结合,表明S、PreS1是特异性条带;N-末端的氨基酸序列与所用目的基因编码的序列相同;乙肝SS1融合抗原在4℃储存较稳定。动物实验结果表明:与单纯含S基因的参比疫苗相比,含SS1融合基因疫苗免疫Balb/c小鼠既产生S抗体,又产生S1抗体,S抗体的ED50滴度与参比疫苗相似,S1抗体产生早于S抗体。

乙型肝炎病毒表面抗原preS2+S基因在Pichia Pastoris酵母系统的分泌表达

拟获得adw2亚型乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原preS2+S基因在PichiaPastoris酵母分泌型表达系统(pPIC9K)的高效表达。实验首先将adw2亚型乙肝病毒表面抗原preS2+S基因重组到分泌型酵母表达载体(pPIC9K)形成表达质粒,电转化酵母细胞KM71,G418筛选多拷贝整合克隆,经甲醇诱导表达并用SDS-PAGE电泳及酶免疫法检测表达产物。经100个克隆筛选获得了表达量较高的表达菌株WC4。该菌株甲醇诱导后细胞上清10倍浓缩SDS-PAGE电泳检测显示,细胞上清中有特异蛋白条带,且第6天表达量最高,表达产物单体分子量为31kD左右。用美国雅培公司AUZYMEMONOCLONAL试剂盒估算表达量为2μg/100OD600细胞。上述结果表明,乙肝病毒表面抗原preS2+S基因在本系统中获得了分泌表达。同时检测了酵母细胞裂解液中特异蛋白质的表达,结果发现,自甲醇诱导后第一天即可检测到表达产物,而且除了第6天细胞外表达量高于细胞内外,其余各天的表达水平均表现为细胞内高于细胞外。以上结果提示,利用分泌型酵母表达系统表达乙肝病毒表面抗原在技术上可行,但表达产量偏低,一些蛋白滞留在细胞内未能分泌到培养基中。

表达含前S的乙肝病毒表面抗原重组CHO细胞株的建立和特性检测

为建立表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的细胞株,将笔者所在实验室构建的表达含前S基因乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的真核表达质粒共转染CHO/dhfr-细胞,通过筛选,获得可表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的重组CHO细胞,然后进行亚克隆,用氨甲喋呤(MTX)加压选择,以ELISA法检测目的蛋白表达量,筛选获得稳定表达目的蛋白的细胞株,并对其进行特性鉴定。最终获得了C10和A10两株稳定高表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的细胞株。

小鼠免疫接种乙型肝炎病毒表面S疫苗引起的细胞毒T淋巴细胞反应

目的 研究小鼠免疫接种乙型肝炎病毒 (HBV)表面 S抗原疫苗 (S- HBs Ag)后引起的特异性、MHC- 限制性细胞毒 T淋巴细胞 (cytotoxic T lymphocytes,CTL)反应。方法 分别给 BAL B/c(H- 2 d)小鼠腹腔内接种 0～ 6 μg S- HBs Ag,2周后加强 1次 ,4周后分离小鼠脾淋巴 T细胞 ,体外用小鼠 Ld限制的、S- HBs Ag特异性 CTL表位多肽 S2 8- 39- 刺激 ;用特异性多肽 S2 8- 39- 、51 Cr标记的 P815细胞作为靶细胞 ;4 h51 Cr释放实验检测 CTL 反应。结果 0、0 .6 5、1.2 5、2 .5、5 μg组小鼠 ,CTL 特异性释放率分别为 31.2 1%± 9.2 3%、4 2 .36 %± 19.32 %、91.2 1%± 2 2 .97%、6 9.2 5 %± 2 4 .13%、5 1.4 9%± 2 1.6 6 1% ;只接受 1次免疫接种的小鼠 ,其脾淋巴细胞特异性 CTL 特异性释放率分别为 2 7.34%± 14 .2 5 %、32 .2 7%± 15 .35 %、5 6 .2 8%± 2 4 .35 %、4 4 .34%± 18.6 5 %、4 0 .76 %±5 6 %。结论 BAL B/c(H- 2 d )小鼠腹腔内接种 S- HBs Ag引起特异性 CTL 反应 ,加强免疫能够提高 CTL 反应。

小鼠模型疫苗HBV S-ecdCD40L表达载体的构建及其融合蛋白生物活性预测

目的制备小鼠模型疫苗HBV S-ecdCD40L融合基因表达载体并采用软件预测其所表达蛋白的合理性及生物活性。方法首先从质粒中扩增HBV S基因,并从小鼠淋巴细胞中扩增CD40L胞外段(extracellular domain,ECD)基因。然后通过RT-PCR法将其串联并与载体相连接,完成构建后采用软件分析其所表达蛋白是否与预期一致。结果构建小鼠模型表达载体并通过软件分析HBV S、ecdCD40L两个基因连接之后其蛋白的疏水性和亲水性无改变,也没有出现新的表位。连接链(linker)不影响融合蛋白的二级结构。结论该载体的设计符合预期,其表达的融合蛋白保留了HBV S和小鼠CD40L胞外段的生物学活性,为进一步研究奠定了基础。

人抗HBV-前S2抗体轻链基因的克隆及序列分析

目的获得人源性乙型肝炎病毒前Ｓ２抗体轻链基因。方法用人工合成的乙型肝炎病毒前Ｓ２短肽（Ｐｒｅ－Ｓ２，１２０—１４５），从已构建的人源性噬菌体抗体库中，得到了针对Ｐｒｅ－Ｓ２阳性克隆，经竞争抑制实验证明其特异性和活性，合成一对轻链引物，经ＰＣＲ扩增，亚克隆入质粒ＰＵＣ１８进行序列测定及分析、结果筛选到的阳性克隆具有乙型肝炎病毒前Ｓ２特异性亲和力。构建了ｐＵＣ１８－ Ｐｒｅ－Ｓ２ｋ。轻链重组质粒，序列分析其为人ｋ轻链，包括了完整的恒定区和可变区，大小为 ６４５ ｂｐ。结论利用抗原抗体特异性反应原理。

乙肝病毒入侵肝细胞的研究现状

目的:了解乙肝病毒入侵肝细胞的临床研究现状。方法:查阅文献,汇总资料中关于乙肝病毒入侵肝细胞的环节、病毒的结构及生命周期及乙肝病毒入侵的细胞分子等观点,从而了解乙肝病毒入侵肝细胞入侵点、机制等。结果:HBV的宿主特性和嗜肝性与肝细胞受体有关,病毒入侵肝细胞的关键部位是表面抗原前S1区,在S1区与其特异性结合的受体是NTCP。结论:全面深入研究HBV入侵肝细胞的分子机制,阻断病毒入侵,一直是临床研究的重点,也将为慢性HBV感染的防治提供巨大帮助。