衰老对大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平的影响

目的 观察衰老对大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平的影响 ,从而探讨衰老过程中出现脂质代谢异常的可能机制。方法 雄性SD年轻大鼠 (4～ 6周龄 ) 16只和老年大鼠 (2 4月龄 ) 16只 ,分别随机分为对照组和非诺贝特组 (非诺贝特喂养 2周 ,每只给药总量为体重的 0 .5 % ) ,测定血清中甘油三酯和总胆固醇水平 ,采用半定量逆转录聚合酶链反应检测大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平。结果 与年轻对照组比较 ,老年对照组甘油三酯和总胆固醇水平升高 ,大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平表达随年龄增长而减少。非诺贝特组与对照组比较 ,给药后老年非诺贝特组甘油三酯水平下降。非诺贝特影响不同年龄组大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平。

富硒灵芝对非酒精性脂肪性肝病大鼠酰基辅酶A氧化酶水平的影响

目的观察富硒灵芝对高脂诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏病理学、胆碱酯酶(CHE)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)、总蛋白以及酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)表达的影响。方法 60只SD大鼠分为空白对照组、模型对照及富硒灵芝3组,NAFLD动物模型建立后,富硒灵芝组给予富硒灵芝水灌胃治疗,模型对照组给予生理盐水灌胃,空白对照组不加以干涉,分别在治疗6、12周后处死大鼠各半,观察其肝脏病理及相关指标变化。结果肝脏病理学检查:模型对照组6周和12周大鼠均存在明显的肝脏脂肪沉积;富硒灵芝组6周肝脏沉积明显减少,12周几乎恢复到正常的水平。CHE、TBIL、直接胆红素、间接胆红素富硒灵芝组较模型对照组在6周时即发生了显著的变化,12周时变化呈现出稳定状态(P<0.05);富硒灵芝组也可明显降低大鼠血清中TBA、总蛋白;富硒灵芝治疗后,大鼠ACOX1的mRNA和蛋白表达在第6周只呈现出微小的变化,12周时差异有统计学意义(P<0.05)。结论富硒灵芝可明显改善高脂饮食诱导的大鼠肝脏脂肪含量,调节CHE、TBIL及TBA等,同时增加ACOX1的表达,可能对NAFLD具有一定的防治作用。

‘湖景蜜露’桃果实酰基辅酶A氧化酶编码基因的克隆及表达分析

【目的】根据国际桃基因组序列信息,进行克隆和表达分析与桃果实内酯类合成相关的果肉组织酰基辅酶A氧化酶(Acyl-CoA oxidase,ACX)的5个候选基因,为进一步开展桃香气物质代谢分子机理的研究提供新的研究方向。【方法】根据Phytozome(www.phytozome.org/peach)发布的桃ACX全基因组序列设计特异引物对5个基因全长进行克隆测序,与参考编码序列进行比对和编码蛋白性质进行分析,并对这些成员进行组织特异性表达分析。【结果】获得了桃果肉组织中表达的5个ACX编码基因全长序列,PpACX1、PpACX3的CDS区没有突变,PpACX2核苷酸序列871位处A突变为G,导致氨基酸序列中谷氨酰胺变异为精氨酸;PpACX4的核苷酸序列在80位和368位存在两处同义突变;PpACX5在475位处A突变为C,导致蛋氨酸突变为亮氨酸。同源性分析结果显示,这些基因的氨基酸序列与番茄、南瓜、大麦、葡萄等高等植物的氨基酸序列同源性很高。系统进化树分析表明,5个基因家族成员中,除PpACX4外其余4个成员处在同一个进化分支上,且与南瓜、葡萄、番茄、大豆等的亲缘关系较近。在根、茎、叶、果实表达证明,PpACX1是果实中主要大量表达成员。【结论】'湖景蜜露'桃果实中表达的5个桃ACX编码基因全长与基因组数据数据库有一定差异,PpACX1为5个成员中较为关键的基因成员。

热带假丝酵母酰基辅酶A氧化酶的纯化及性质研究

利用热带假丝酵母由烷烃生产二元酸时 ,二元酸面临被 β氧化降解的代谢途径。酰基辅酶A氧化酶是二元酸 β氧化的限速酶。以热带假丝酵母 1 2 3 0菌株为材料 ,经硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱层析、Blue Sepharose亲和柱层析 ,得到电泳均一的酰基辅酶A氧化酶。该酶有两种亚基 ,分子量分别为 74kD和 78kD。酶作用最适pH和最适温度分别为 8 0和5 0℃。金属离子Ag+ 、Pb2 + 完全抑制酶活性 ,Ba2 + 、Mg2 + 、Ca2 + 对酶活性有明显抑制作用。丙烯酸是酶的反竞争性抑制剂 ,Ki 为 0 6 3 3mmol L ,维生素C是竞争性抑制剂 ,Ki 为 2 0 1× 1 0 - 3mmol L。

circ_0005379通过调控miR-17-5p/酰基辅酶A氧化酶1轴抑制口腔鳞状细胞癌的发展进程

目的探讨circ_0005379对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法分别以癌旁正常组织及正常口腔黏膜细胞HOK-16A为对照,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OSCC组织和SCC15细胞中circ_0005379和miR-17-5p表达水平,蛋白印迹(Westernblot)检测酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)蛋白表达水平。转染circ_0005379过表达载体至SCC15细胞,四甲基噻唑蓝(MTT)染色法、流式细胞术、Transwell和Westernblot分别检测过表达circ_0005379对SCC15细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、β连环素(β-catenin)和Snail蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验检验SCC15细胞中circ_0005379与miR-17-5p及miR-17-5p与ACOX1调控关系。建立稳定过表达circ_0005379的SCC15细胞裸鼠移植瘤模型,观察过表达circ_0005379对裸鼠移植瘤生长的影响。结果与癌旁组织比较,OSCC组织中circ_0005379和ACOX1蛋白表达降低(P<0.05),miR-17-5p表达升高(P<0.05)。与HOK-16A细胞比较,SCC15细胞中circ_0005379和ACOX1蛋白表达降低(P<0.05),miR-17-5p表达升高(P<0.05)。过表达circ_0005379后,SCC15细胞活性、迁移和侵袭细胞数及β-catenin和Snail蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。circ_0005379靶向负调控miR-17-5p表达,ACOX1是miR-17-5p的靶基因。过表达miR-17-5p可逆转过表达circ_0005379对OSCC细胞系增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。过表达circ_0005379的裸鼠肿瘤体积和重量降低(P<0.05),肿瘤组织中circ_0005379和ACOX1蛋白表达水平升高(P<0.05),miR-17-5p表达水平降低(P<0.05)。结论circ_0005379可能通过靶向miR-17-5p/ACOX1来抑制体外OSCC细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,同时抑制体内肿瘤生长,其可能是OSCC治疗的潜在靶点。

热带假丝酵母酰基辅酶A氧化酶的活性测定方法

酰基辅酶A氧化酶 (ACO)是热带假丝酵母内二元酸β氧化的限速酶。工业上利用烷烃生产二元酸时 ,使用ACO低活性的菌株 ,将有利于提高二元酸的产量和纯度。本文以热带假丝酵母为材料 ,在Allain方法基础上加以改进 ,可简便、准确地测定ACO酶活性 ,为二元酸生产菌株的筛选方法提供了量化标准 ,并为进一步研究此酶的酶学性质奠定了基础。对本实验室所保存的一系列具有不同产酸能力的热带假丝酵母菌种进行酶活性测定 ,发现酶活性与产酸能力有明显的相关性。

桃果实酰基辅酶A氧化酶活性检测方法的建立

采用可见分光光度法,以棕榈酰辅酶A为底物,研究了桃果实中酰基辅酶A氧化酶(ACOX)的活性检测方法。结果表明,桃果实中ACOX活性检测体系的参数为:150 mmol·L-1 Tris-HCl缓冲液,pH值7.5,温度30℃,吸收波长500 nm。

心肌梗死后大鼠心肌脂肪酸氧化酶基因表达下调

观察结扎左冠状动脉前降支复制的心肌梗死大鼠模型术后 2、4和 8周的血流动力学、心室重塑指标及梗死周围 4mm的心肌组织肌型肉碱棕榈酰转移酶、中链酰基辅酶A脱氢酶和过氧化物酶体增殖剂活化受体α基因表达的变化 ,以探讨无或伴有心力衰竭的大鼠心肌梗死后左心室重塑与局部脂肪酸氧化酶基因表达的关系。术后 2周右室即出现肥厚 ,与假手术组比较 ,梗死周围的心肌组织肌型肉碱棕榈酰转移酶、中链酰基辅酶A脱氢酶和过氧化物酶体增殖剂活化受体αmRNA表达下调 (分别为 2 7%、35 %和 2 0 % ,P <0 .0 5 ) ;8周时大鼠出现明显心力衰竭 ,左心室略有肥厚 ,上述基因表达比 2周时显著下调 (分别为 5 2 %、6 0 %和 4 4 % ,P <0 .0 5 )。以上表明心肌梗死后大鼠从代偿性重塑到心力衰竭的发展过程中均存在脂肪酸氧化酶基因表达下调 ;过氧化物酶体增殖剂活化受体α在心肌梗死后心肌脂肪酸氧化酶基因的表达中可能起重要的调控作用。

决明子蒽醌苷对非酒精性脂肪肝病大鼠脂酸β氧化相关酶蛋白表达的影响

目的:探讨决明子蒽醌苷对非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠脂酸β氧化途径关键酶过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1(peroxidase acyl coenzyme A oxidase 1,ACOX1)和肉毒碱棕榈酰转移酶I(carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT1A)表达的影响。方法:将60只SD大鼠适应性喂养10天后,随机分为正常组、模型组、阳性药物(多烯磷脂酰胆碱)组及决明子蒽醌苷低、中、高剂量组,每组10只,高脂高糖饮食8周成功构建NAFLD模型,给予相应治疗8周后处死大鼠,收集大鼠血清和肝脏,检测大鼠血脂、肝功能、肝脏病理学以及肝脏组织中ACOX1和CPT1A的mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组相比,模型组大鼠肝功能指标谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、血脂指标甘油三酯(triglyceride,TG)和胆固醇(total cholesterol,TC)均升高(P<0.05);与模型组比较,决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组肝功能及血脂指标均降低(P<0.05),高剂量组低于阳性药物组(P<0.05)。HE染色正常组大鼠肝脏细胞大小均一,分布均匀,模型组出现明显的脂肪空泡和炎症反应,决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组均可以减少肝脏脂肪浸润。与正常组比较,ACOX1和CPT1A、模型组及决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组均降低(P<0.05);与模型组比较,决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组ACOX1和CPT1A均升高(P<0.05),高剂量组高于阳性药物组(P<0.05)。结论:决明子蒽醌苷可以通过增加脂酸β氧化途径关键酶ACOX1和CPT1A mRNA以及蛋白表达水平,促进肝脏脂肪颗粒排出,最终改善肝功能。

草莓果实成熟衰老影响因子及其调控机制研究进展

草莓味道可口，营养丰富，是世界上栽培最广泛的水果之一，但其生育周期短，采后极易衰老腐烂，不耐贮藏。因此，研究草莓果实成熟衰老相关影响因子及其调控机制意义重大。文章就近年来草莓果实成熟衰老过程中植物激素（乙烯、脱落酸）、相关酶类（脂肪氧合酶、抗氧化酶类、软化酶类）、外源物质（Ca2＋、

耐力训练和注射丙酸睾酮对雄性大鼠肝脏、心脏和腓肠肌PPARα表达的影响

探讨持续性运动和耐力训练或注射丙酸睾酮对雄性大鼠体重增长、血脂水平以及肝脏、心脏及腓肠肌细胞内过氧化物体增殖活化受体α(PPARα)及其靶酶-酰基辅酶A氧化酶(AOX)的mRNA和PPARα蛋白量的影响。将40只SD大鼠随机分为4组:A为对照组,B为丙酸睾酮组,C为运动训练组,D为运动训练+丙酸睾酮组。丙酸睾酮给药方式:每天皮下注射5 mg/kg,每周6 d,共6周。运动方式:采用跑台,速度为25 m/min,每天1 h,每周6 d,共7周。结果发现:(1)B组和D组,实验后体重增长明显少于A组和C组(P<0.05);(2)D组的血清甘油三酯浓度,与A组相比,有降低的趋势(P>0.05),而明显低于C组(P<0.05)。总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇浓度,各组之间无明显差异;(3)各组间的PPARα和AOX的mRNA表达均无明显差异;(4)在肝脏和心脏,C组与D组的PPARα水平明显高于A组(均为P<0.001)。在腓肠肌,各组间PPARα水平无明显差异。结果表明:(1)注射丙酸睾酮和运动训练加注射丙酸睾酮可以明显控制体重的增长。这种作用可能与血清甘油三酯水平降低有关;(2)持续性运动在翻译及翻译后水平上调了心脏和肝脏PPARα基因的表达,对腓肠肌PPARα基因的表达无明显作用;(3)丙酸睾酮对心脏、肝脏和腓肠肌PPARα水平无明显调节作用,可能通过其他机制发挥作用。

人参皂苷Rg1对非酒精性脂肪肝病大鼠脂肪酸β-氧化的改善作用研究

目的研究人参皂苷Rg1对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠β-氧化的作用。方法将120只SD大鼠分为对照组(CON组)、模型组(HFD组)及人参皂苷Rg1低、中、高剂量组(GLD、GMD、GHD组)和熊去氧胆酸钠治疗组(PDT组),每组20只,分别于治疗4、8周后处死大鼠各半,肝脏切片HE染色,检测肝功能、血脂、肝脏脂酰CoA合成酶1(CoASH1)、脂酰肉毒碱转移酶I(CATI)及酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)mRNA和蛋白表达。结果治疗4周后,肝脏HE染色GHD组有改善,PDT、GLD、GHD组未见改善;8周后,PDT组与GLD组仍有少量脂肪颗粒聚集,GMD组和GHD组看不到任何脂滴浸润;治疗4周后,PDT、GLD、GMD、GHD组与HFD组相比,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显降低(P<0.05),8周后进一步降低;治疗4周后,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)4个组均升高,8周后几乎恢复到对照组的水平;治疗4周后肝脏组织CoASH1、CACTI及ACOX1表达4个组均显著升高(P<0.05),治疗8周后改善更为明显。结论人参皂苷Rg1可通过调节大鼠β-氧化来改善脂代谢及肝功能。

脂肪酸结合蛋白3对足细胞脂肪代谢的影响

目的:观察脂肪酸结合蛋白3(FABP3)过度增加对足细胞脂肪代谢的影响。方法:慢病毒载体转染小鼠永生化足细胞系(HSMPs)以构建稳定过表达FABP3的细胞系。将FABP3-siRNA转染至HSMPs中沉默FABP3,筛选干扰效率最大的FABP3-siRNA片段进行后续干扰实验。实验分组:(1)正常足细胞组;(2)NC-siRNA足细胞组;(3)FABP3-siRNA足细胞组;(4)NC足细胞组;(5)FABP3过表达足细胞组;(6)正常足细胞+棕榈酸(PA)组;(7)NC-siRNA足细胞+PA组;(8)FABP3-siRNA足细胞+PA组;(9)NC足细胞+PA组;(10)FABP3过表达足细胞+PA组。比色法测定细胞内TG和游离脂肪酸的含量。定量PCR法检测各组细胞中过氧化物酶增殖激活受体α(PPARα)、酰基辅酶A氧化酶3(ACOX3)mRNA的表达。Western Blot法检测PPARα、ACOX3蛋白表达水平。结果:与正常足细胞组相比,FABP3过表达足细胞组细胞内三酰甘油(TG)和游离脂肪酸水平增加(P<0.05),而FABP3-siRNA足细胞组TG和游离脂肪酸水平下降(P<0.05)。不论在正常环境还是PA环境下,与正常足细胞组相比,FABP3过表达足细胞组PPARαmRNA和蛋白表达均下调(P<0.05),而ACOX3 mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05);FABP3-siRNA足细胞组PPARαmRNA和蛋白表达均上调(P<0.05),而ACOX3 mRNA和蛋白表达均下调(P<0.05)。与FABP3过表达足细胞组相比,FABP3-siRNA足细胞组PPARαmRNA和蛋白表达上调(P<0.05),ACOX3 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);加入PA后,FABP3过表达足细胞+PA组和FABP3-siRNA足细胞+PA组之间PPARαmRNA和蛋白表达、ACOX3 mRNA和蛋白表达统计学差异显著(P<0.01)。结论:FABP3过度增加可导致足细胞脂肪代谢紊乱,抑制FABP3过度增加可纠正足细胞脂肪代谢紊乱状态。该研究结果提示抑制FABP3表达可能对代谢因素如糖尿病、肥胖、高脂血症所致的足细胞损伤有一定防御和治疗作用。

L-谷氨酰胺调节脂质代谢与大鼠非酒精性脂肪肝病的相关性

目的观察L-谷氨酰胺(L-Gln)对高脂诱导的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠血脂、肝功能的影响和对基辅酶A氧化酶(ACOX)1、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)1 mRNA和蛋白表达的影响。方法将SD大鼠随机分为空白组(CON组)、NAFLD模型组(NAF组)及L-Gln治疗组(L-Gln),给予NAF组以及L-Gln组大鼠高脂饮食建立NAFLD模型,造模成功后,L-Gln组给予L-Gln灌胃治疗,NAF组给予其生理盐水灌胃辅助参考,CON组不加以干涉,治疗6 w和12 w后处死大鼠,观察其ACOX1、SCD1及血脂、肝功能指标变化。结果 L-Gln组治疗12 w谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(UBIL)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较NAF组有明显降低(P<0.05);总胆汁酸(TBA)较NAF组有显著降低(P<0.01);总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)较NAF组有明显升高(P<0.05);NAFLD大鼠ACOX1及SCD1 mRNA和蛋白表达经L-Gln治疗12 w明显升高(P<0.05)。结论 L-Gln可以明显提高高脂饮食诱导NAFLD大鼠肝脏ACOX1及SCD1 mRNA和蛋白表达,通过上述酶的表达,调节血脂代谢,进而降低了大鼠肝脏脂肪含量,改善肝功能,可能对NAFLD具有一定的防治作用。

鹅去氧胆酸对高果糖喂养大鼠肾脏脂质合成和分解代谢的影响

目的通过观察高果糖喂养大鼠肾组织中固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1c、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)-1、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α及酰基辅酶A氧化酶(ACO)的变化,探讨其对脂质合成代谢和分解代谢的影响并观察鹅去氧胆酸(CDCA)的保护作用。方法将48只大鼠分为对照组,高果糖组及CDCA组,每组16只,8、16 w时分批处死,检测各组大鼠的肾功能、空腹血糖(FPG)、血脂及24 h尿微量白蛋白(UMA);检测大鼠肾皮质甘油三酯(TG)含量;SREBP-1c、SCD-1、PPAR-α及ACO基因和蛋白的表达分别采用实时荧光定量PCR分析技术及Western印迹法。结果与对照组比较,高果糖组大鼠左肾重/体重,血中TG和极低密度脂蛋白(VLDL)水平明显升高,24 hUMA增加,肾组织中TG水平明显增高,且随时间延长而加重(P<0.05);SREBP-1c和SCD-1基因及蛋白表达明显增加,且随时间延长其表达更多(P<0.01);PPAR-α和ACO基因及蛋白表达明显减少,且随时间延长其表达更少(P<0.01)。CDCA组上述指标明显改善(P<0.05)。结论高果糖饮食喂养可导致大鼠高TG血症、高VLDL血症、高尿酸血症和UMA水平增加,可引起大鼠肾皮质TG蓄积。高果糖促使肾组织脂质合成代谢增强,分解代谢减弱,进而导致肾脏损伤。CDCA可下调SREBP-1c和SCD-1基因及蛋白表达,上调PPAR-α和ACO基因及蛋白表达,减少脂质合成,促进脂质分解,减轻肾损伤。

基于铁死亡探讨乌司他丁对肝缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨乌司他丁对肝缺血-再灌注损伤的保护作用及机制。方法24只雄性SD大鼠分成3组,分别为假手术组(Sham组)、肝缺血-再灌注损伤组(HIRI组)、肝缺血-再灌注损伤+乌司他丁预处理组(HIRI+UTI组),每组8只。采用阻断肝门静脉和肝动脉1 h的方法建立大鼠HIRI模型,HIRI+UTI组于造模前30 min腹腔注射乌司他丁,Sham组和HIRI组腹腔注射等量的生理盐水。造模6 h后处死大鼠,收集大鼠血清检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法检测肝组织病理学改变;透射电镜观察肝组织线粒体超微结构改变;免疫荧光检测谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达;检测肝组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、铁、活性氧簇(ROS)及GPX4含量;检测肝组织GPX4、酰基辅酶A合成酶长链家族4(ACSL4)信使RNA(mRNA)和蛋白表达水平。结果与Sham组相比,HIRI组血清ALT、AST水平升高,肝脏出现淤血、肝细胞坏死和肝小叶结构异常等病理改变,病理学评分升高,线粒体缩小,膜密度增加,线粒体嵴断裂甚至消失,ROS、MDA、铁含量升高,GSH含量下降,GPX4荧光强度减弱,ACSL4 mRNA及蛋白相对表达量升高,GPX4 mRNA和蛋白相对表达量降低(均为P<0.05)。与HIRI组比较,HIRI+UTI组血清ALT、AST水平降低,肝组织损伤减轻,病理学评分降低,线粒体缩小、嵴断裂情况改善,ROS、MDA、铁含量降低,GSH含量升高,GPX4荧光强度增强,ACSL4 mRNA和蛋白相对表达量降低,GPX4 mRNA和蛋白相对表达量升高(均为P<0.05)。结论乌司他丁可减轻大鼠肝缺血-再灌注损伤,其机制可能是通过抑制铁死亡。

结直肠癌组织中ACOX1、DUSP14蛋白表达变化及临床意义

目的探讨结直肠癌组织中酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)、双特异性磷酸酶14(DUSP14)蛋白表达变化及临床意义。方法选择手术治疗的98例CRC患者,术中取癌和癌旁组织(距肿瘤边缘>2 cm)。用免疫组化染色法检测组织中ACOX1、DUSP14蛋白,用Spearman秩相关分析CRC癌组织中ACOX1与DUSP14蛋白表达的相关性,以及二者表达与临床病理参数的关系;对患者进行随访,记录其生存状况,Cox回归模型分析CRC预后的影响因素。结果CRC癌组织、癌旁组织中ACOX1蛋白阳性表达率分别为24.49%(24/98)、84.69%(83/98),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。CRC癌组织、癌旁组织中DUSP14蛋白阳性表达率分别为79.59%(78/98)、12.24%(12/98),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。CRC癌组织中ACOX1与DUSP14蛋白表达呈负相关(rs=-0.792,P<0.05)。与TNM分期Ⅰ、Ⅱ期,高中分化及无淋巴结转移的CRC组织比较,TNM分期Ⅲ期、低分化程度及淋巴结转移的CRC组织中ACOX1蛋白阳性表达率低,DUSP14蛋白阳性表达率高(P均<0.05)。CRC患者随访期间死亡42例,3年总生存率为57.14%(56/98)。ACOX1蛋白表达阳性与阴性患者3年生存率分别为87.50%(21/24)、47.30%(35/74),二者比较差异有统计学意义(P<0.05);DUSP14蛋白表达阳性与阴性患者3年生存率分别为48.72%(38/78)、90.00%(18/20),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。ACOX1蛋白表达阴性、DUSP14蛋白表达阳性、TNM分期Ⅲ期及淋巴结转移为CRC患者预后的危险因素(P均<0.05)。结论CRC中ACOX1低表达、DUSP14高表达,二者表达变化与肿瘤发展及预后有关。

基于ACOX1-CPT2基因表达变化探讨肉苁蓉苯乙醇苷对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的改善作用

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola, PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响。方法:70只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A+E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪42%、胆固醇0.15%)饲养,另取14只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组。12周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)的基因表达。结果:与模型组相比,3个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量。RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1和CPT2 mRNA表达。结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1和CPT2基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积。

耐力训练和注射DHEA对雄性大鼠肝脏、心脏和腓肠肌PPARα表达的影响

本文探讨了持续性运动和/或注射脱氢表雄酮(DHEA)对雄性大鼠体重增长、血脂水平、以及肝脏、心脏及腓肠肌细胞内过氧化物体增殖活化受体α(PPARα)及其靶酶-酰基辅酶A氧化酶(AOX)的mRNA和PPARα蛋白量的影响。将40只SD大鼠随机分为4组:A为对照组,B为DHEA组,C为运动训练组,D为运动训练+DHEA组。DHEA给药方式:每天皮下注射20m g/kg的DHEA S,每周6d,共6周。运动方式:采用跑台,速度为25m/m in,每天1h,每周6d,共7周。结果发现:(1)D组实验后体重增长明显少于A组和B组(p<0.05)。(2)各组之间的总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量均无明显差异。(3)各组间的PPARα和AOX的mRNA表达均无明显差异。(4)在肝脏,C组和D组的PPARα蛋白水平明显高于A组(P<0.01和P<0.001)。在心脏,B组、C组和D组的PPARα蛋白水平明显高于A组(P<0.05、P<0.001和P<0.001)。在腓肠肌,D组的PPARα蛋白水平明显高于A组(P<0.05)。结果表明:(1)运动训练加注射DHEA可以明显控制体重的增长。这种作用可能不是通过降低血脂水平而实现的。(2)DHEA和持续性运动在翻译及翻译后水平上调了PPARα基因的表达。DHEA提高心脏内PPARα的水平,而持续性运动能诱导心脏和肝脏内PPARα的表达。DHEA结合运动训练诱导肝脏、心脏和腓肠肌的PPARα的表达,介导各脏器的脂肪分解。

富硒灵芝粗提物对2型糖尿病模型大鼠脂代谢、肝功能及炎症反应的改善作用研究

目的:研究富硒灵芝粗提物对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠脂代谢、肝功能及炎症反应的改善作用。方法:将120只大鼠随机分为正常对照组(n=20,生理盐水)和造模组(n=100)。正常对照组大鼠喂养普通饲料,造模组大鼠喂养高脂饲料。4周后,造模组大鼠腹腔注射链脲佐菌素溶液(30 mg/kg)复制T2DM模型。将造模成功的90只大鼠再次随机分为模型对照组(生理盐水)、阳性对照组(二甲双胍,200 mg/kg)和富硒灵芝粗提物低、中、高剂量组(300、600、1 200 mg/kg,以提取物计),每组18只。灌胃给药,每天1次,每周周一至周六给药。分别于给药4、8周后各组均取一半大鼠,检测其血清中葡萄糖、胰岛素水平,并计算胰岛抵抗指数;采用酶联免疫吸附法检测其血清中肝功能指标[天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)]、血脂指标[游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]和炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β]水平;苏木精-伊红染色后,通过显微镜观察其肝组织病理学变化;并分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blot法检测其肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠在给药4、8周后血清中葡萄糖、胰岛素含量显著增加(P<0.01),胰岛素抵抗指数显著升高(P<0.01);血清中肝功能指标、血脂指标和炎症因子水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);肝细胞肿胀呈圆形,且体积较正常对照组明显增大,肝脏有不同程度的脂肪变性及空泡样变,并伴随有少量炎细胞浸润现象;肝组织中PPARα、ACOX1的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,除富硒灵芝粗提物低剂量组大鼠给药4周后的胰岛素抵抗指数和血清中AST、ALT、IL-6、IL-1β水平以及给药8周后血清中葡萄糖、胰岛素、ALT水平和给药4、8周后4个血脂指标水平降低不显著外(P>0.05),其余各组大鼠在给药4、8周后上述血清指标水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);给药4、8周后大鼠肝组织病理学变化不同程度减轻;各给药组大鼠给药4、8周后肝组织中PPARα、ACOX1的蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:富硒灵芝粗提物可上调肝组织中PPARα和ACOX1蛋白和mRNA的表达,促进蓄积的脂肪酸排出,明显改善T2DM模型大鼠脂肪酸代谢、炎症反应和肝功能。