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sPD-1过表达增强衰老肿瘤细胞疫苗抗小鼠乳腺癌作用 被引量:2
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作者 陈泽宏 林惠文 +4 位作者 胡康 苏如雄 赖楠 杨子科 康世均 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期20-26,共7页
目的探讨可溶性PD-1(sPD-1)过表达后对衰老肿瘤细胞疫苗(STCV)抗小鼠乳腺癌的增强作用。方法干扰素γ(IFN-γ)刺激小鼠乳腺癌细胞4T1,流式细胞术检测PD-L1表达;sPD-1过表达慢病毒感染4T1,显微镜观察增强绿色荧光蛋白表达情况;CCK8实验比... 目的探讨可溶性PD-1(sPD-1)过表达后对衰老肿瘤细胞疫苗(STCV)抗小鼠乳腺癌的增强作用。方法干扰素γ(IFN-γ)刺激小鼠乳腺癌细胞4T1,流式细胞术检测PD-L1表达;sPD-1过表达慢病毒感染4T1,显微镜观察增强绿色荧光蛋白表达情况;CCK8实验比较4T1、4T1/sPD-1增殖活力;q RT-PCR、Western blot从m RNA、蛋白质水平验证sPD-1表达;干扰素γ预处理4T1细胞,添加4T1/sPD-1培养上清,孵育后流式细胞术检测PD-1阳性细胞比例;X射线照射联合Veliparib处理4T1、4T1/sPD-1细胞,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色,观察蓝染细胞比例;Balb/c小鼠右后腿皮下种植4T1,左后腿注射PBS、4T1 STCV、4T1/sPD-1 STCV,观察各组小鼠成瘤率。结果 IFN-γ能导致4T1细胞PD-L1上调(P<0.001),且浓度越高,PD-L1表达上调越明显,最高达(84.80±1.03)%;病毒感染4T1细胞后,显微镜下可见绿色荧光;CCK8实验中4T1、4T1/sPD-1细胞增殖曲线无明显差异(P>0.05);4T1/sPD-1细胞在m RNA和蛋白质上均可检测到sPD-1表达产物,4T1细胞则均未能检测到;干扰素γ预处理的4T1细胞,PD-1阳性比例(6.893±0.271)%,添加4T1/sPD-1细胞培养液处理后,PD-1阳性细胞比例升高达(55.450±0.555)%(P<0.001);4T1、4T1/sPD-1在联合处理后,镜下见大量蓝染变形的衰老细胞;小鼠荷瘤实验中,预防肿瘤发生实验,PBS组所有小鼠出现肿瘤生长,4T1 STCV组有28.787%小鼠未发生肿瘤,4T1/sPD-1 STCV组近55.556%小鼠未发现肿瘤发生;治疗肿瘤实验中,观察期内PBS组小鼠均发生肿瘤,4T1 STCV、4T1/sPD-1 STCV组无瘤小鼠比例分别为11.111%和38.89%。结论衰老肿瘤细胞疫苗对小鼠乳腺癌具有防治作用,且sPD-1过表达后能够增强衰老肿瘤细胞疫苗的抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 可溶性PD-1 X射线 Veliparib 衰老肿瘤细胞疫苗 乳腺癌
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X射线照射联合Veliparib诱导小鼠乳腺癌细胞衰老的相关研究 被引量:3
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作者 张佳和 胡康 +2 位作者 杨子科 罗荣城 康世均 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2016年第17期1141-1148,共8页
目的电离辐射联合多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)抑制剂能够加速肿瘤细胞衰老,衰老的肿瘤细胞分泌水平会发生变化。本研究探讨X射线照射联合Veliparib诱导小鼠乳腺癌细胞衰老及其衰老相关分泌表型(senescenceassociated secretory phen... 目的电离辐射联合多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)抑制剂能够加速肿瘤细胞衰老,衰老的肿瘤细胞分泌水平会发生变化。本研究探讨X射线照射联合Veliparib诱导小鼠乳腺癌细胞衰老及其衰老相关分泌表型(senescenceassociated secretory phenotype,SASP)的变化。方法采用X射线照射联合Veliparib处理小鼠乳腺癌细胞株4T1,诱导衰老肿瘤细胞模型;采用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色试剂盒检测细胞SA-β-gal作为评估衰老的指征,根据细胞大小及颗粒流式分选大衰老肿瘤细胞;荧光定量PCR检测衰老相关分泌表型,比较对照组、Vel组、X射线组、X射线+Vel组的相对表达量,观察X射线+Vel组细胞因子表达的动态变化;采用多重液相蛋白定量技术(cytometric beads array,CBA)检测细胞上清液中TNF-α、IFN-β和IFN-γ的浓度;荧光定量PCR检测流式分选出的大衰老细胞和非衰老细胞的分泌表型。结果 X射线+Vel组细胞在照射后第4天出现明显的衰老指征;对照组、Vel组、X射线组、X射线+Vel组中大衰老肿瘤细胞的比例分别为(2.633±0.961)%、(2.867±1.069)%、(20.133±3.570)%和(58.200±6.583)%,析因设计方差分析显示X射线照射(F=273.720,P<0.001)及药物Veliparib(F=75.691,P<0.001)的主效应差异均有统计学意义,X射线照射与药物Veliparib的交互效应显著(F=73.858,P<0.001);X射线+Vel组大衰老细胞比例明显高于对照组(t=14.468,P<0.001)、Vel组(t=14.371,P<0.001)及X射线组(t=8.805,P=0.001)。在SASP mRNA相对表达量方面,X射线及Veliparib的主效应与两者的交互效应均有统计学意义,X射线+Vel组p21、IFN-β、TNF-α、CCL5、CXCL9和CXCL10mRNA的相对表达量最高,与对照组、Vel组、X射线组相比,差异均具有统计学意义,均P<0.001;各细胞因子在联合处理后第4天出现表达高峰,随后下降;X射线+Vel组细胞上清液中TNF-α、IFN-β、IFN-γ的浓度最高,X射线+Vel组均明显高于对照组(P<0.001)与X射线组,P<0.001;流式分选出的衰老细胞较非衰老细胞p21、SASP表达水平更高,差异具有统计学意义,均P<0.05。结论 X射线照射联合veliparib诱导4T1细胞衰老并导致其分泌表型发生明显变化,主要表现为免疫刺激的正向作用。 展开更多
关键词 X射线 Veliparib 衰老肿瘤细胞 衰老相关分泌表型
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Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway 被引量:153
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作者 Tyler ZARUBIN 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2005年第1期11-18,共8页
The family members of the mitogen-activated protein (MAP) kinases mediate a wide variety of cellular behaviors in response to extracellular stimuli. One of the four main sub-groups, the p38 group of MAP kinases, serve... The family members of the mitogen-activated protein (MAP) kinases mediate a wide variety of cellular behaviors in response to extracellular stimuli. One of the four main sub-groups, the p38 group of MAP kinases, serve as a nexus for signal transduction and play a vital role in numerous biological processes. In this review, we highlight the known characteristics and components of the p38 pathway along with the mechanism and consequences of p38 activation. We focus on the role of p38 as a signal transduction mediator and examine the evidence linking p38 to inflammation, cell cycle, cell death, development, cell differentiation, senescence and tumorigenesis in specific cell types. Upstream and downstream components of p38 are described and questions remaining to be answered are posed. Finally, we propose several directions for future research on p38. 展开更多
关键词 p38 MAP kinase signaling pathway NEXUS inflammation DIFFERENTIATION SENESCENCE tumorigenesis.
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