新疆出血热病毒反向被动血凝和血凝抑制试验的改进研究

本文报道采用戊二醛、丙酮醛和戊二醛-甲醛双醛化绵羊红细胞;不同株新疆出血热病毒和不同方法免疫家兔;不同方法纯化IgG和用不同方法以抗体致敏血球进行反向血凝和血凝抑制试验。结果表明采用本文报道的方法,以戊二醛处理的绵羊红细胞经鞣酸化后优于丙酮醛或戊二醛-甲醛双醛化的血球。用病毒悬液(感染鼠脑悬液)加福氏完全佐剂,经淋巴结注射免疫的方法所获免疫血清的抗体效价最高(补体结合抗体滴度达1∶1024)。用50%饱和硫酸铵沉淀一次和33%沉淀3次后,再经DEAE纤维素提取的IgG效果优于低温酒精法和SephadexG100及SephadexG200分筛提取法。鞣酸化后用这种IgG致敏的血球效果最好,冻干后在4℃下可保持原效价至少一年以上。作者讨论了本试验方法应用中需注意的各种细节问题,并推荐用反向被动血凝试验检测病毒抗原,用反向被动血凝抑制试验检测抗体具有稳定可靠,操作方便和可以直接检测各种动物标本的优点。可广泛用于临床诊断和流行病学调查研究。

新疆出血热病毒单克隆抗体的应用研究:反向被动血凝和血凝抑制试验

使用6株抗新疆出血热病毒单克隆抗体(单抗)致敏醛化绵羊红血球,以反向被动血凝试验(RPHA)检测病毒抗原;以反向血凝抑制试验(RPHI)检测人和各种动物血清抗体。结果6株单抗致敏血球在检测病毒抗原中以IgM型的14B7单抗的灵敏度最高。比其他5个单抗高16~32倍,而且与正常对照抗原完全没有非特异性凝集,远超过多克隆抗体致敏的血球。用RPHI检测血清抗体中,以13C6和43E5两个单抗的灵敏度高。测定抗体滴度的终点远高于多克隆抗体致敏的血球。RPHA可用于急性期病人血液中病毒抗原的检测,有很好的早期诊断价值,还可用于新分离病毒的血清学鉴定。RPHI可用于人和动物血清抗体的检测。已制出冻干的制剂,可保存1年以上,对于基层和现场防治调查工作非常方便。

脂多糖-被动血凝试验早期诊断伤寒的价值

为评估脂多糖－被动血凝试验（ＬＰＳ－ＰＨＡ）早期诊断伤寒的应用价值，对病程不同的１０２例伤寒患者用ＬＰＳ－ＰＨＡ、肥达反应和细菌培养进行检测，２００例非伤寒发热患者作为对照。结果显示：伤寒患者病程第一周ＬＰＳ－ＰＨＡ阳性率为８０％（２４／３０），第二周达９７７３％（４３／４４）；细菌培养阳性率２４５１％；肥达反应的伤寒与副伤寒鞭毛抗体交叉阳性率达３７２５％；对照组ＬＰＳ－ＰＨＡ有２％的假阳性。结果表明：ＬＰＳ－ＰＨＡ可早期、简便及快速诊断伤寒，有较高的敏感性和特异性。

被动血凝试验测定伤寒Vi抗体

作者从拘橼酸杆菌中提取纯化获得其Ｖｉ多糖抗原，该抗原具有伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原的免疫学特性，而不含伤寒沙门氏菌０，Ｈ抗原，用其致敏新鲜羊血球作被动血凝试验，特异性敏感性均很好。所需Ｖｉ抗原致敏浓度极低，仅为０．０５ｕｇ／ｍｌ。使用新鲜羊血球凝模式较好，便于观察结果，采用被动血凝试验检测１０６名健康中学生肌肉注射３０ｕｇ伤寒Ｖｉ多糖菌苗前后Ｖｉ抗体的变化情况，发现免疫后血清抗体的四倍增长率达８９％，表明伤寒Ｖｉ多糖苗具有良好的免疫原性。

用反向被动血凝抑制试验进行乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的位阻分析

本文报告获得28株分泌抗HBsAg单克隆抗体的杂交瘤细胞系,均为抗HBsAg“a”决定簇抗体。产生鼠IgM抗体的有一个细胞系;IgG1 18个系;IgG 2a 1个系;IgG 2b 6个系;IgG 3两个系。采用反向被动血凝抑制法测定了其中24种McAb的交互抑制现象。24种McAb可分为10个不同的抑制群。并对这种简单易行的位阻分析方法在实用中的价值做了讨论。

ELISA抑制法及被动血凝试验对鼠疫血清标本检测结果的比较分析

为探讨Ｉｎｈｉｂ－ＥＬＩＳＡ法推广应用的可能性，本文采用该法与ＰＨＡ法连续３年对我省各鼠疫疫区送检复判的２２２份血清标本进行了平行检测。结果显示，Ｉｎｈｉｂ－ＥＬＩＳＡ检出阳性血清１５２份，阳性检出率为６８．５％，几何平均滴度为１：４３４．５１；而ＰＨＡ法共检出阳性血清１２８份，阳性检出率为５７．７％，几何平均滴度为１：６８．６０，两者相差均具有非常显著性意义。且ＰＨＡ初判时出现４．５％的假阳性反应，而Ｉｎｈｉｂ－ＥＬＩＳＡ无一例假阳性反应。结果表明，Ｉｎｈｉｂ－ＥＬＩＳＡ比ＰＨＡ法具有结果稳定、检出率高、敏感性好和特异性强等特点。连续三年的应用实践说明，该法若能在我国鼠疫防治工作中推广应用，必将会提高我国鼠疫监测工作的质量。

被动血凝(PHA)快速检测日本乙型脑炎抗体方法的建立

本文报道了快速检测日本乙型脑炎（乙脑）抗体的被动血凝方法。用PEG提纯乙脑BHK抗原致敏醛化绵羊红细胞可用于人、猪血清中乙脑抗体的检测．该方法具有较高的敏感性和特异性，实验结果表明：该方法与血凝抑制试验具有同等的敏感性，两者符合率为85．12％，与ELISA符合率为91．70％。

鼠疫反向被动血凝试验阳性判断标准的探讨

目的 验证反向被动血凝试验 (RPHA)原判断标准 (≥ 1:10 0 )的制定准确与否。方法 分别在陕、宁、蒙、青等省 (区 )采集人和鼠疫宿主动物 (沙鼠、黄鼠、喜马拉雅旱獭 )健康脏器标本 ,对标本进行RPHA检测 ,并对检测结果进行统计学分析处理。结果 978份健康脏器标本的RPHA结果中 ,出现 32份非特异性反应 ,其反应值均在 1:10及 1:10以下。 33份阳性标本滴度在1:2 0～ 1:5 12 0之间。经统计学百分位数法求得RPHA的阈值为≈ 1:10 (P99) ,从而把≥ 1:2 0稀释度定为RPHA的阳性判断标准。结论 ≥ 1:10 0RPHA阳性判断标准定得过高 ,而以≥ 1:2

用氯化铬联结病毒与绵羊红细胞的被动血凝试验

建立的用低浓度氯化铬溶液作联结剂将蛋白质抗原联结于绵羊红细胞表面，用于被动血凝试验（ＰＨＡ）的方法显示，绵羊红细胞在联结前用０．２５％胰酶处理，可显著提高抗原与红细胞的联结效力；用联结蛋白相对应的抗血清检测，滴度可达１：２６２１４４０；被联结蛋白浓度由前人试验所获得的最低３ｍｇ／ｍｌ降低到０．２ｍｇ／ｍｌ，从而可用于低蛋白浓度的病毒的联结。

ELISA抑制法及被动血凝试验对鼠疫血清标本检测结果的比较分析

为探讨Inhib—ELISA推广应用的可能性,作者采用Inhib—ELISA和PHA两种方法连续3年(1990～1992)对外送复判鼠疫血清标本进行了平行检测,结果报道如下:1 材料和方法1.1 材料1.1.1 40孔酶标微板,上海塑料三厂生产,酶标测定仪,南京华东电子管厂,DG—3002型;抗F_1—兔IgG,本室生产,F_1—Ag免疫家兔经DEAE—纤维素纯化冻干制品,(辛辛)根过氧化物酶(HRP),系Sigma厂出品,本室采用wilson过碘钠法标记,最适工作浓度为1∶2000;F_1抗原,本室提取,批号8901、9205;鼠疫F_1抗原致敏戊二醛绵羊红血球。

麻疹被动血凝法和血凝抑制试验法的比较

麻疹抗体测定以往多用血凝抑制试验(HI),但由于该方法需猴血球,使其使用受到一定的限制。近年来推出的麻疹被动血凝试验(PHA)具有特异,敏感、快速和不需猴血球的优点,是替代HI法的方法之一,我们对307份血清用麻疹被动血凝法和常规HI法作了比较,现将结果报导如下:

中和法与反向被动血凝法用于脊灰病毒定型的比较

脊灰病毒的定型通常采用中和法,但此方法操作繁琐,影响因素多,实验时间长。为了寻找一种特异、简便、快速的定型方法,我们用近年来由中国医科院基础所推出的反向被动血凝法(简称RP-HA),对本省1986年～1993年5月脊灰疑似病人粪便标本中分离的阳性标本与用中和法作了比较,用RPHA法对阳性标本不同的细胞传代数做了定型。现将结果报导如下:

被动血凝试验检测麻疹抗体

被动血凝试验检测麻疹抗体郭永文，郑焕英，吴承民，林协勤长期以来，麻疹抗体的检测方法，多采用血凝抑制试验，由於该法需依赖猴血球，不便於基层应用。八十年代，我国学者相继用特异而敏感的ＥＬＩＳＡ方法，近年来又用改进了的、更加简便的ＰＨＡ试验［１，２，３，４...

流行性出血热反向被动血凝抑制试验诊断试剂盒应用技术

(一)概况流行性出血热(EHF)是由汉坦病毒引起的病毒性疾病,主要临床表现为发热、出血和肾功能损害。本病呈全球性流行,我国除青海和新疆外各省市都有流行。它严重地危害着广大人民群众的身体健康。目前,EHF的诊断主要依靠实验室的血清学诊断和临床诊断。血清学诊断方法有间接免疫荧光试验(IFA)、免疫酶联试验(ELISA),反向被动血凝抑制试验(RPHIA)及聚合酶链法(PCR)等。

胶乳凝集联合低滴度脂多糖-被动血凝试验对甲型副伤寒的诊断价值

目的 :寻求快速、简便、特异性强、敏感性高的甲型副伤寒血清学诊断方法 ;方法 :采用胶乳凝集试验 (LPS -Latex)及脂多糖 -被动血凝试验 (LPS -PHA)检测甲型副伤寒、伤寒患者血清 ,并同期检测非伤寒患者血清进行统计分析 ;结果 :单项低滴度脂多糖 -被动血凝试验及联合试验诊断甲型副伤寒符合率分别为 86.95%和 84.78% ,且分别与伤寒及非伤寒组比较有显著意义 (P <0 .0 5,P <0 .0 0 1 )。两项试验假阳性率分别为 1 2 .50 %及 0 (P <0 .0 0 1 ) ;结论 :胶乳凝集联合低滴度脂多糖 -被动血凝试验诊断甲型副伤寒简便、快速 ,有较高敏感性和特异性。

免疫荧光试验与反向被动血凝抑制试验测定乙型脑炎抗体对比分析

目的:比较两种乙型脑炎实验室诊断方法。方法:用间接免疫荧光法和反向被动血凝抑制试验检测疑似乙型脑炎患者的血清标本,用SPSS统计软件分析两者的特异性和敏感性。结果:50份临床疑似乙型脑炎患者的血清两种方法检测结果,IgG抗体检出率均为86%,无统计学意义。IgG抗体几何平均滴度RPHI法略高于IFA,但无统计学意义。IgM抗体阳性率IFA为78%;RPHI为76%。RPHI法的几何平均滴度为31.6,IFA的几何平均滴度为30.3,几何平均滴度无统计学意义。两种方法的相关性检测,相关系数分别为0.835和0.696。结论:IFA和RPHI法用于检测乙型脑炎抗体阳性检出率和几何平均滴度差异均无统计学意义。由于RPHI法无需特殊仪器设备,操作简便易行。IFA法除需要一台较好的荧光显微镜外,其操作简便,适于病人的早期诊断。

应用反向被动血凝方法鉴别支原体的研究

用三种兔抗支原体的抗体包被双醛化羊红细胞(SRBC),对分离的支原体标准株的培养物用反向被动血凝方法(RPHA)作种的鉴别。证明 RPHA 特异性好,阴性阳性结果分明,易于判断,是一种简便、快速、经济的鉴别方法。