血清Ⅰ型马立克氏病病毒被膜蛋白UL11在真核细胞内的表达

本研究利用血清Ⅰ型马立克氏病病毒(Marek's disease virus serotype 1,MDV-1)被膜蛋白UL11原核表达产物作为免疫原,免疫小鼠制备多抗血清,通过间接免疫荧光试验,结果发现:UL11真核表达时,存在于COS-1和Sf9细胞浆中。而检测MDV的RB1B毒株感染CEF时,却发现UL11高度聚集于空斑中心,且可分布于空斑周围的所有细胞核中。这为研究UL11细胞核内扩散的分子机制,以明确UL11是否参与MDV-1致瘤的过程提供了参考。

人疱疹病毒6型101K被膜蛋白主要抗原决定簇区原核表达克隆的构建和表达

目的 构建人疱疹病毒6型（HHV-6）101K被膜蛋白的原核高效表达克隆，并进行原核表达。方法 PCR扩增HHV-6B101K被膜蛋白的主要抗原决定簇区（666～834aa）编码基因片段（nt2347～2853），并导入T载体进行测序，与GenBank中HHV6标准毒株序列比较以进一步鉴定。目的基因及表达载体pThioHisA分别经双酶切后连接，转化宿主菌E．coli BL21，应用PCR法及限制性核酸内切酶双重鉴定原核表达质粒，并经测序证实。IPTG诱导蛋白表达，SD＆PAGE电泳鉴定重组蛋白。结果 PCR获得的目的基因序列与GenBank中HHV-6B标准毒株Z29序列一致，重组质粒诱导菌表达产物出现相对分子质量为31900的融合蛋白条带。结论 HHV-6101K蛋白的原核表达克隆构建和表达成功，为进一步完善HHV-6活动性感染的血清学诊断提供了实验基础。

猪伪狂犬病病毒被膜蛋白UL11、UL16和UL21多克隆抗体的制备

本研究将伪狂犬病病毒变异株JS-2012的基因UL11、UL16和UL21分别克隆至原核表达载体中,并且在E.coli中分别表达了重组的His-UL11、His-UL16和His-UL21蛋白。结果表明,这三个重组蛋白均主要以包涵体的形式表达。通过尿素洗涤包涵体的方式分别纯化3个重组蛋白,将纯化后的蛋白分别免疫BALB/c小鼠,4次免疫后成功制备出能特异性识别重组蛋白UL11、U16和UL21的多克隆抗体。蛋白免疫印迹和间接免疫荧光结果表明,本研究制备的3个多克隆抗体均具有良好的免疫原性,能够与伪狂犬病病毒变异株JS-2012的UL11、UL26、UL21蛋白发生特异性反应。这3种抗体为伪狂犬病病毒被膜蛋白的功能和相互作用研究提供了重要的工具。

氯丙嗪对大肠杆菌细胞被膜蛋白的影响

1959年首次报道精神病治疗药吩噻嗪氯丙嗪(CPZ)有抗细菌活性,1961年证实了这个结果。最近研究表明,CPZ 有抗广谱细菌的活性,但对其抗菌机理尚不了解。因此,我们进行了以下研究。把大肠杆菌接种于胰蛋白酶黄豆汁中,过夜培养至 OD_(578nm)=1.500。分别从此培养液中约取100000CFU 接种于含有0～100μg/ml不同浓度 CPZ 的一系列胰蛋白酶黄豆汁试管中。经37℃培养,不同间隔时间测定光密度,同时吸取0.1ml 进行显微镜检查。培养到3h,在含有40～60μg/mlCPZ 的培养液中出现丝状形态的大肠杆菌;到5h,所有菌体都呈丝状,且长达20μm;到8h,培养液中杆状和丝状细胞并存;到24h,所有细胞均成杆状。

由基因DNA中密切关联的重复序列编译36千道尔顿牛种布氏菌被膜蛋白

牛种布氏菌为当今美国本土牲畜损失的第二位死因。最近虽审验通过了菌苗 S19菌株,但其可引起人感染和致病,以及被接种牲畜的持续性低度感染。目前布氏菌研究的热点是改进菌苗或研究能从 S19接种过的牲畜中鉴别出野生株感染及持续的诊断试剂。

人疱疹病毒7型被膜蛋白pp85的原核表达及应用

目的 构建人疱疹病毒7型（HHV7）被膜蛋白pp85编码基因（ORF U14）的原核表达载体，并进行原核表达。方法 应用HHV7标准株Glasgow感染SupT1细胞，PCR技术扩增HHV7 ORF U14基因的主要抗原决定簇编码区（328～533AA），目的基因与原核表达载体pThioHis A连接后，转化宿主菌E．coli BL21，IPTG诱导融合蛋白表达，经镍-螯合物琼脂糖树脂柱亲和层析纯化获得重组抗原。重组蛋白电泳后转至PVDF膜，与HHV7阳性血清进行免疫印迹反应。结果 DNA序列分析表明，目的基因序列与HHV7标准毒株Glasgow相应序列完全一致，SDS-PAGE可观察到相对分子质量（Mr）为35．7×10^3融合蛋白的表达，免疫印迹反应显示重组抗原具有较高的特异性。结论 HHV7重组抗原具有较好的抗原性，进一步完善后可用于HHV7抗体的检测。

伪狂犬病毒被膜蛋白VP22单克隆抗体的制备及免疫电镜方法的建立

为了制备伪狂犬病毒（PRV）被膜蛋白VP22的单克隆抗体并建立免疫电镜方法,试验首先构建真核重组质粒pCAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒是否构建成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫后进行细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆,抗体亚类试剂盒鉴别抗体亚类,收集第5,10,20代次的杂交瘤细胞上清液用ELISA法检测其效价,Western-blot法鉴定其特异性,将该抗体分别稀释50,100,200倍并作为一抗,免疫电镜检测VP22蛋白的表达效果。结果表明：获得1株稳定分泌VP22蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞（3D6）,该单克隆抗体的亚类为IgM,能与VP22蛋白发生特异性反应,100倍稀释的单克隆抗体可达到利用免疫电镜技术检测细胞内该蛋白表达的最佳效果。说明筛选得到的PRV被膜蛋白VP22单克隆抗体和建立的免疫电镜方法可用于该病毒的致病性及装配机制研究。

伪狂犬病病毒被膜蛋白pUL11和pUL16单克隆抗体的制备及初步应用

为了制备能特异性识别伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)被膜蛋白pUL11和pUL16的单克隆抗体并初步评估其应用潜力,试验采用原核表达系统表达并纯化了PRV HLJ-2013毒株的pUL11和pUL16可溶性重组蛋白,对重组蛋白进行纯化,分别以两种纯化蛋白作为免疫原经皮下注射免疫小鼠制备单克隆抗体,并将该单克隆抗体与PRV HLJ-2013和单纯疱疹病毒1型(HSV-1)共孵育以确定其特异性。结果表明:试验采用原核表达系统成功表达并纯化了PRV HLJ-2013毒株的pUL11和pUL16可溶性重组蛋白,成功获得了pUL11的单克隆抗体11-3和pUL16的单克隆抗体16-13,11-3和16-13的腹水抗体效价分别为1∶25600和1∶51200;两株单克隆抗体均可与PRV及HSV-1感染的Vero细胞发生特异性反应。说明试验成功制备了pUL11和pUL16蛋白的单克隆抗体,该单克隆抗体具有较好的特异性。

参与膜泡运输的蛋白家族及其运行机制的研究进展

细胞的生长和分化最终体现在蛋白质的差异上 ,蛋白质在胞浆中的核糖体合成后 ,便被运送到特定的细胞器、细胞膜或者分泌到细胞外。细胞在其生长、发育、衰老、死亡等过程中 ,都伴随着特定蛋白的定位及运输。膜泡运输对于完成细胞器及细胞膜之间的蛋白运输功能至关重要 ,目前已发现了参与这一过程的 4个蛋白家族 ,并对其基本的运行机制有了一定的了解。

酶联免疫吸附试验检测人疱疹病毒7型抗体的研究

目的建立一种简便、快速、可靠的检测人疱疹病毒7型(HHV 7)特异性IgG和IgM酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法应用HHV 7标准株G lasgow感染SupT1细胞,制备并纯化细胞工程抗原和重组pp85抗原;对325份血清HHV 7抗体进行检测,建立HHV 7特异性IgM和IgG间接ELISA,并与Q iagen公司ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果采用细胞工程抗原和重组抗原制备的HHV 7 IgG和IgM ELISA诊断试剂敏感性、特异性、稳定性及重复性[变异系数(CV)<10%]较好;以Q iagen公司ELISA试剂盒为参比,重组抗原IgG ELISA检测上述标本的敏感性、特异性和符合率分别为98.1%、94.1%和97.8%,IgM ELISA分别为84.6%、99.7%和99.1%;与细胞工程抗原相比,重组抗原诊断试剂的特异性高而敏感性略低。结论自制HHV 7 IgG和IgMELISA检测试剂敏感特异,可用于临床HHV 7感染的诊断及流行病学调查。

人疱疹病毒7型U14编码区原核表达载体的构建

目的 构建人疱疹病毒7型（HHV-7）开放读码框（ORF）U14的原核表达载体，并且进行原核表达。方法 PCR技术扩增HHV-7 ORF U14基因的主要抗原决定簇编码区（328～533氨基酸），目的基因与原核表达载体pThioHis A分别双酶切后连接，1×TSS法转化宿主菌E．coli BL21，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达。结果 基因序列分析表明目的基因序列与HHV-7标准毒株相应序列基本-致，SDS-PAGE电泳可观察到相对分子质量为3．57万融合蛋白的表达，Western印迹证实pp85蛋白成功表达。结论 HHV-7被膜蛋白pp85原核表达载体构建和表达成功，为进一步探讨该重组蛋白在HHV-7特异性抗体检测中的应用提供实验基础。

IE抗原检测在HCMV感染中的诊断意义

目的探索即刻早期抗原(immediate early antigen,IE抗原)检测在骨髓移植术后人巨细胞病毒感染中的诊断价值。方法回顾性分析骨髓移植术后160份外周血标本,根据外周血巨细胞病毒被膜抗原pp65的不同分为感染组和对照组,运用免疫组化法检测外周血人巨细胞病毒IE抗原和被膜抗原pp65。结果20名患者中,实验组16名(136份血标本),对照组4名(24份血标本)。160份外周血标本中,人巨细胞病毒pp65抗原阳性标本95份(59.38%),IE抗原阳性94份(56.75%)(P=0.91);IE抗原和pp65抗原术后检出时间分别为2.44±1.38周和3.17±1.16周(P=0.031)。结论IE抗原检测能发现早期特异性反应HCMV感染。

发现HIV感染协同因子

National Institute of Allergy and Infectious Diseases(NIAID)(Bethesda, MD)的研究者说,一种叫作"fusin"的表面蛋白就是长期以来人们寻找的协同因子。该因子为HIV感染CD4T淋巴细胞所必需。只表达CD4(HIV的原始靶子)的细胞并不被HIV感染,这是许多年前就明了的事实,然而,正是Edward Berger及其在NIAID的同事们所做的冗长乏味的工作发现了找寻已久的、使HIV进入细胞的协同因子。

动物遗传工程

960326 含有滤泡间皮肤和毛囊调节区及标记基因的非人类转基因动物[专,英]/Cent.Invest.Energ./Bravo M A M; Jorcano N J L; Ramirez MA; Vidal C M A EP-633-315:29.03.93-93ES-000643(11.01.95)24.03.94 as 94EP-50005595-038512/06(10页)[译自DBA,1995,14(8),95-04742] 非人类转基因动物包含重组遗传构建物,或由可在滤泡间皮肤和毛囊中诱导的调节区及标记基因组成的转基因。转基因动物构成了灵敏。

艾滋病毒的中和性单克隆抗体

自1985年报告HIV感染患者血清中存在阻止艾滋病毒感染的中和抗体以来，对其确切的作用尚不清楚。中和抗体的作用靶点是HIV被膜蛋白gp120，其通过病毒表面或病毒感染细胞表面的gp41的中介作用，在病毒的病原性和感染性上起着重要作用。作者已制备出与gp120反应的HIV中和性单克隆抗体，本文对其性质和今后应用做一介绍。

表达马立克氏病病毒基因的重组鸡痘疫苗

最近美国学者研制一种重组鸡痘疫苗（rFPV）,该疫苗可表达编码为糖蛋白B（gB1）、C（gC）、D（gD）和被膜蛋白UL47、UL48的马立克Ⅰ型病毒基因,也表达糖蛋白B（gB2、gB3）的Ⅱ、Ⅲ型马立克病毒基因。对疫苗的单独或各样组合使用（包括FPV/gBs与HVT组合）评价其保护母源抗体阳性（ab+）和母源抗体阴性鸡（ab-）抗高强毒MDV病毒的能力,并与MDV原型疫苗作比效。表达gC、gD、UL47、UL48的rFPV对ab+鸡无保护力,但rFPV/gB1抗MDV攻击的保护力为23％（比较:细胞结合的HVT（CA—HVT）为26％）。不同血清型MDV的rFPV/gBs的保护力是不同的。gB1

MDV-1CVI988/Rispens疫苗毒体外感染期间VP22的表达及细胞间转导作用

利用CVI988 VP22蛋白C端94～243 aa片段作为抗原制备特异性抗体, 并用于检测MDV-1不同毒株感染鸡胚成纤维细胞（CEF）时, 在不同感染时间内的表达情况. 结果发现, 当感染量PFU=50时, MDV各不同致病力的毒株（GA, RB1B和CVI988株）VP22最早在3 h时开始向病毒感染细胞的邻近细胞核内扩散; 8 h时, VP22几乎扩散到所有细胞的核内. 这说明VP22在感染细胞形成空斑之前就已经开始表达, 并高效转导入其他正常的细胞核内. 实验中发现血清I型马立克氏病病毒（MDV-1）弱毒株CVI988/Rispens的VP22蛋白缺失^201TKSERT^206. 结果证实这一缺失对VP22蛋白转导功能并没有明显影响, 即CVI988 VP22仍具有高效的细胞内转导作用. 这为深入研究和开发MDV CVI988株的VP22蛋白转导功能奠定了基础.