黄颡鱼“裂头病”病原二重PCR检测方法的建立及应用

"裂头病"是黄颡鱼养殖业的主要病害之一,其病原为鮰爱德华氏菌或迟钝爱德华氏菌。以GenBank所收录鮰爱德华氏菌与迟钝爱德华氏菌16S rRNA基因为模板,优化设计两对特异性引物,经多重PCR反应体系优化及特异性与敏感性检测,建立了检测鮰爱德华氏菌和迟钝爱德华氏菌的二重PCR检测方法。结果显示,阳性对照样品的琼脂糖凝胶电泳条带同时检测到鮰爱德华氏菌和迟钝爱德华氏菌,扩增产物大小分别为470 bp及268 bp,灵敏度为1.38 ng/μL。此法用于检测江西南昌地区多个养殖场所患"裂头病"黄颡鱼脑部DNA,11份患病黄颡鱼的脑部组织均检出鮰爱德华氏菌,表明该地区黄颡鱼所患"裂头病"的病原菌为鮰爱德华氏菌,此结果与常规细菌分离鉴定的检测结果一致。所建二重PCR检测法敏感度高,特异性强,检测成本低,对黄颡鱼"裂头病"的快速诊断与流行病学调查有较好的应用价值。

黄颡鱼“裂头病”的组织病理研究

应用组织病理学方法,对患"裂头病"黄颡鱼的肝脏、脾脏、肾脏、胃、肠道、脑进行观察。结果表明,各主要器官均有明显的组织病理学变化:肝中央静脉扩张,并有充血现象,肝细胞界限模糊不清,形状消失、变性,并发生肝实质组织溶解、消失。脾脏内有大量的含铁血黄素沉积。肾脏的实质细胞大量坏死,肾小球出现崩解、碎裂、溶解消失现象,近曲小管、远曲小管界限模糊,肾小管的上皮细胞肿胀,排列紊乱,管腔变窄、闭塞。胃上皮细胞排列紊乱,变性、坏死,胃黏膜大量脱落于胃腔中,胃腺细胞界限模糊、排列紊乱,胃腺管腔缩小,甚至消失。肠道上皮中有大量杯状细胞。脑组织出现弥散性出血,脑血管充血、出现大量的单核细胞。

斑马鱼“裂头病”病原的分离与鉴定及常见疾病诊断

目的斑马鱼是生命科学研究中应用最广的实验动物之一,其健康状况关乎实验数据的质量和结果的可信度。2018年以来,中国斑马鱼鱼房内出现危害性极高的新型鱼病“裂头病”,其病原未知,防治困难。确定“裂头病”的病原,并提出鱼房管理健康建议,可帮助研究者防止鱼病带来的损失。方法对“裂头病”病鱼脑组织进行病原分离,对分离的病原理化特征、16S rDNA同源性进行分析,采用回归感染试验确认病原菌。分析121例鱼病数据,总结中国斑马鱼鱼房各类常见疾病种类及发病因素。结果确定“裂头病”病原为鮰爱德华氏菌。2017至2021年国内斑马鱼鱼房数据显示,50.4%的健康问题由非生物因素直接或者间接导致;致死率最高的问题是气体中毒。在已知病原中细菌性病原最为常见,占比83.46%。结论“裂头病”病原为鮰爱德华氏菌。近一半鱼房健康问题是由非生物因素导致。致病率最高的为细菌性病原。因此,实验室日常工作中,加强设备维护,稳定优良水质,保证卫生管理措施,是防止鱼病发生的主要手段。

患“裂头病”黄颡鱼内脏组织中LDH的变化

使用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,分析了健康黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)与患病个体的肝脏、脾脏、心脏、肾脏、脑组织中的乳酸脱氢酶同工酶的变化。结果显示,患病个体组织中的LDH谱带与健康个体有明显差异,主要表现为谱带染色变浅、谱带缺失;但在心脏中,除了缺失谱带外,还增加了1条LDH0带。

黄颡鱼“裂头病”病因调查

黄颡鱼“裂头”病是近年来发生的黄颡鱼的新型病害，对广东顺德地区（龙眼、勒流、锦丰、杏坛等）黄颡鱼发病池塘进行采样分析，经流行病学调查、组织病理检测、病原分离等，对黄颡鱼“裂头”病的病因进行筛查。在所患病鱼脑部和浓汁中均分离出一种生长缓慢、透明的针尖状菌落。经鉴定为鲶爱德华氏菌。

一例鮰鱼裂头病的治疗

斑点叉尾鮰简称鮰鱼,近年来,随着养殖规模的不断扩大,病害呈逐年严重趋势。由鮰爱德华菌引起的肠道败血症是鮰鱼的主要病害之一,裂头病是肠道败血症的慢性型,鮰爱德华菌从鮰鱼鼻腔侵入脑部感染,再由脑部向外感染颅骨,直至外部皮肤,导致头部皮肤溃烂,眼球外突,严重的脑部颅骨穿孔,脑组织外露,裂头之名由此而来。该病由于发病较缓,初期难以发现,且一般药物难以穿透血脑屏障,增加了治疗的难度。

游走性空洞和轨道征为特征的慢性肺曼氏裂头蚴病1例

本文报道1例以反复咳嗽、咯血达15个月的肺裂头蚴感染病例,CT表现病灶游走性和多变性,从斑片影到结节灶、空洞灶,而且空洞位置和形态变化迅速;整个感染过程患者外周血嗜酸性粒细胞未见升高,抗生素(莫西沙星)能改善症状,初次吡喹酮常规剂量治疗效果不佳,剂量加倍后治愈。CT病灶迁徙性和轨道征有助于寄生虫诊断,病变多变性及变化迅速也有助于疾病鉴别,表现为肉芽肿性空洞少见。

脑裂头蚴病—8例临床病理分析

目的探讨人脑孟氏迭宫裂头蚴病的临床病理特点。方法分析本室１９８２～１９９７年确诊的８例脑裂头蚴病的病理资料，复习其病史和影像学资料。结果本病的病理特点为：１蚴虫虫体为实体，无体腔，具特征性体壁；２蚴虫虫体内散在分布的同心圆性圆形或椭圆形的石灰小体及单个肌纤维；３脑内有新旧不一的多发性小脓肿。ＣＴ及ＭＲＩ所见类似胶质瘤和炎症灶。７例有密切接触池塘、河水史。结论本病临床诊断较困难，但有其特征性的病理表现可据以确诊，主张ＣＴ立体定向术用于诊断和治疗，饮用生水可能是近年的主要感染途径。

10例疑似曼氏裂头蚴病的病原学诊断

目的对10例临床疑似曼氏裂头蚴病病例进行病原学诊断。方法 2009年8月至2011年8月,对4家医院送来的10例患者病理活检标本进行病原学鉴定。10个标本分别来源于腹部皮下包块4例,眼部肿块3例,脑部占位病变、肺部肿块和胸腔积液各1例。3例眼部肿块和1例腹部皮下包块中各取出1条虫体,通过肉眼和显微镜观察虫体解剖组织学特征进行鉴定。余6例标本均采用石蜡包埋、切片及苏木素-伊红(HE)染色后于镜下观察虫体组织,并以曼氏裂头蚴免疫兔血清为一抗通过免疫组化法作进一步鉴定。结果自3例眼部肿块中获取的3条完整虫体具典型曼氏裂头蚴形态特征,自腹部皮下包块取出的1条残断虫体在镜下观察到的网状结构和石灰小体均与曼氏裂头蚴解剖组织学特征一致。6个病理切片经HE染色后于镜下观察发现,3个切片呈现典型裂头蚴组织学特征,即体壁有凹凸不等的皱褶,皮层致密较厚呈嗜伊红深染,部分皮层外密布微毛,体内为网状疏松实质结构,可见空泡状石灰小体,但无器官腔和空腔结构;余3个病理切片的虫体组织结构不典型。6个病理切片经免疫组化检测均呈阳性。结论该10例临床疑似病例均确诊为曼氏裂头蚴病。

曼氏裂头蚴病流行病学调查及动物实验

2008年4～11月在河南省漯河市开展曼氏裂头蚴病流行病学调查。现场采集并检测中间宿主感染情况,包括显微镜检查剑水蚤体内曼氏迭宫绦虫原尾蚴,解剖镜下观察青蛙和蝌蚪皮下、肌肉组织和内脏感染裂头蚴的状况。水洗沉淀法收集终宿主家猫和犬粪便,镜检计数虫卵。收集蝌蚪体内的裂头蚴灌胃感染家猫,观察其排卵情况。结果显示,剑水蚤、蛙类和蝌蚪的感染率分别为3.5%(3/85)、35.9%(120/334)和16.8%(75/446)。调查家猫3只、犬31只,分别有1只和6只(19.4%)感染曼氏迭宫绦虫。感染家猫裂头蚴后12d粪检,曼氏迭宫绦虫卵阳性,25d自小肠取出17条曼氏迭宫绦虫成虫。表明河南省漯河市为曼氏裂头蚴病疫源地,终宿主和中间宿主感染率均较高。当地居民有生食蝌蚪的不良习俗是感染曼氏裂头蚴的主要原因。

皮肤裂头蚴病误诊十年分析

目的 :了解裂头蚴病的感染方式、诊断要点及防治原则 ,以减少误诊的发生。方法 :通过活体组织检查法 ,将手术摘除的皮下肿物剥除外层纤维被膜 ,在两张载玻片间压平、镜检。结果 :裂头蚴呈长带形虫体 ,白色 ,大小为 2 3.0 cm× 0 .4cm,头部膨大 ,末端钝圆。体前端中央呈唇状凹陷 ,体内含大量石灰小体 ,体不分节 ,体表具明显横皱褶。结论 :皮肤裂头蚴病是以皮下肿物为主要特征 ,由曼氏迭宫绦虫的幼虫寄生所致 ,其皮下肿物具有游走性。

黑斑蛙裂头蚴病的病理组织学观察

目的对黑斑蛙裂头蚴病进行了病理组织学观察。方法HE染色和甲苯胺蓝染色供组织学检查。结果特征性的病变包括裂头蚴虫体移行性囊腔性坏死和以嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞、肥大细胞和淋巴细胞等炎性细胞浸润、上皮样细胞和成纤维细胞增生为特征的肉芽肿性反应。少数病例中囊腔内裂头蚴虫体的死亡及完全解体和裂头蚴虫体中石灰小体的逸出是本研究的新发现。首次注意到裂头蚴病形成的虫体移行性肉芽肿囊腔组织中肥大细胞显著增多,沿着囊腔周围分布并弥漫分布在肉芽肿性病变组织浸润的炎性细胞和增生的成纤维细胞中。结论蛙裂头蚴病病变中的肥大细胞反应显然与嗜酸性肉芽肿的形成有关。

曼氏裂头蚴病诊断方法及其在蛇蛙的应用研究进展

曼氏裂头蚴病是一种人兽共患性寄生虫病,对人类的健康构成严重威胁。蛇蛙是曼氏迭宫绦虫重要的第二中间宿主,是人裂头蚴病的重要感染源。论文综述了人体曼氏裂头蚴病诊断方法,并重点阐述了该诊断方法在蛇蛙上的应用,以期为蛇蛙曼氏裂头蚴病诊断技术的发展提供资料。

25例裂头蚴病患者临床特点分析

目的分析裂头蚴病患者的临床特点,以提高对该病的认识。方法回顾性分析中山大学附属第三医院2002年8月-2011年5月确诊的25例裂头蚴病患者的流行病学资料、临床表现、辅助检查和诊治情况。结果25例患者中,23例有明确的流行病学史,其中22例为食源性感染,1例为接触性感染;临床表现为中枢神经型14例、皮肤型7例、内脏型3例、眼裂头蚴病1例。25例患者实验室检查结果显示,3例内脏型患者的嗜酸粒细胞均升高,其他22例患者中仅1例嗜酸粒细胞升高;23例行寄生虫抗体全套检查,其中22例患者裂头蚴抗体阳性;14例中枢型患者,磁共振成像(MRI)检查均可见病灶;11例患者行病灶手术切除或活检术,其中8例可见虫体。该病首诊误诊率80%。经治疗后18例治愈,7例症状缓解。结论食源性感染成为裂头蚴病的重要传播途径,临床表现以中枢型为主;嗜酸粒细胞检测正常不能排除该病,血清学检查有重要诊断意义。

儿童脑裂头蚴病MRI诊断

目的探讨MRI对儿童脑裂头蚴病的诊断价值。方法搜集经临床确诊的儿童脑裂头蚴病17例,回顾性分析其脑部的MRI表现,部分病例与手术及病理结果对照,同时回顾性分析该病就诊时的诊断符合率及统计两位影像学医生在掌握该病特征性影像学表现前后诊断检出率的变化。结果增强扫描12例,病灶均显示强化,8例病灶呈环形、串珠状或匐行管状强化。7例MRI复查发现2例病灶强化的位置及形态有改变。病灶匐行管状、串珠状、扭曲条索状强化及随访病例病灶位置及形态的改变是儿童脑裂头蚴病MRI典型征象;17例脑裂头蚴病患儿临床首诊时、行第一次影像学检查后及随访后多次影像学检查后的诊断符合率分别为0%、11.8%和28.6%。两位影像学医生在掌握该病特征性影像学表现后诊断检出率提高到64.7%、70.6%与85.7%。结论儿童脑裂头蚴病的脑部MRI表现具有一定的特征性,正确把握该病典型的影像学表现对减少临床误诊率有很大帮助。

广东11例裂头蚴病分析

【目的】总结裂头蚴病新的流行特点、诊疗情况。【方法】1993年至2002年6月收治的11例、经 ELISA 血清学诊断方法结合病理确诊裂头蚴的患者,分析其流行病学资料、临床表现、实验室检查结果、误诊情况和治疗疗效。【结果】裂头蚴病有增多的趋势,2000年后9例(82%),且城市多见,患者皆有不良饮食习惯,进食不熟蛇、蛙或海鲜类食物;临床上主要表现为游走性皮下结节,内脏组织器官受累多(54%,6/11),其中以肝脏损害常见;误诊率高;早期使用吡喹酮或阿苯哒唑治疗效果好,肉芽肿明显形成者需手术切除。【结论】裂头蚴的流行有新的特点,临床上内脏受累多见,容易误诊,要重视裂头蚴的早期诊断和治疗。

云南省曼氏裂头蚴病流行概况

目的了解曼氏裂头蚴病在云南省的流行情况。方法通过现有病例与过去文献报告的病例进行归纳。结果至今云南已报告的裂头蚴病共10例,其中皮下裂头蚴病5例,眼裂头蚴病2例,内脏裂头蚴病3例。其中2例为男性,其余8例均为女性;年龄最小的4岁,最大的46岁;地区分布在昆明、玉溪、曲靖、昭通、思茅及西双版纳等6个地州市;感染的方式和途径可能是误食受感染的剑水蚤,或者是原尾蚴直接经皮肤和粘膜侵入。结论云南省局部地区有曼氏裂头蚴病的流行。

金标渗滤法快速检测曼氏裂头蚴病患者血清IgG

目的探索简易、快速的人曼氏裂头蚴病血清学免疫诊断方法。方法将曼氏裂头蚴可溶性抗原点样于硝酸纤维素膜上,以胶体金-SPA为检测标记物,采用垂直流渗滤装置检测病人血清中曼氏裂头蚴特异性IgG抗体。结果曼氏裂头蚴病病人血清阳性检出率为92.0%(23/25),健康人群血清假阳性率为2.0%(2/100);与囊虫病、肺吸虫病、血吸虫病、华支睾吸虫病、旋毛虫病病人血清的交叉反应率分别为40.0%(16/40)、52.0%(13/25)、13.3%(4/30)、8.0%(2/25)、6.7%(2/30),未发现与广州管圆线虫病、结核病病人血清有交叉反应;与ELISA平行检测74人份血清,两种方法检测结果的一致性有极显著性意义(К=0.871,P<0.001)。结论金标渗滤法检测曼氏裂头蚴病病人血清中特异性IgG,不仅简易、快速而且检出率高,但与肺吸虫病、囊虫病病人血清存在较高的交叉反应,需根据病人饮食史等流行病学资料进行鉴别诊断。