化瘀通络中药对糖尿病肾病代谢指标及裂孔膜蛋白nephrin的影响

目的:观察化瘀通络中药对糖尿病肾病(DN)大鼠代谢指标和裂孔膜蛋白nephrin表达的影响,探讨化瘀通络中药防治DN的可能作用机制。方法:将40只大鼠随机分为空白对照组10只、造模组30只,造模组高糖高脂饲料喂养1个月,采用一次性腹腔注射链尿佐菌素的方法复制糖尿病模型,成模大鼠随机分为中药组、西药对照组(厄贝沙坦组)、模型组,中药组和厄贝沙坦组分别给予相应药物,各组于第3天、4周、8周、16周测24 h尿蛋白,16周末处死大鼠,全自动生化分析仪检测血肌酐、尿素氮、尿酸。光镜观察肾脏病理改变情况,采用免疫组织化学法检测nephrin的表达并进行半定量分析,RT-PCR法检测nephrin mRNA表达情况。结果:与模型组相比,第16周末中药组24 h尿蛋白、肌酐等各项指标均有明显改善,差异具有统计学意义(P<0.05);与厄贝沙坦组同时间点比较,第8周末中药组24 h尿蛋白明显升高(P<0.05),第16周末中药组24 h尿蛋白降低(P<0.05);第16周末nephrin半定量分析结果显示中药组较模型组表达明显增加(P<0.05);中药组nephrin mRNA的表达较模型组明显增强(P<0.05),两治疗组之间该项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:化瘀通络中药可以减少蛋白尿,保护肾功能的作用可能与上调足细胞裂孔膜蛋白nephrin的表达有关。

裂孔膜蛋白Nephrin和Podocin与后天获得性肾脏疾病关系研究进展

自1998年发现了第一个定位于裂孔膜上的重要信号分子Nephrin;2000年发现了Podocin,裂孔膜相关蛋白与肾脏疾病的相关研究开始迅速发展。既往多认为裂孔膜蛋白Nephrin、Podocin与先天性肾脏疾病相关,但最近几年有研究发现以蛋白尿为主要临床表现的后天获得性肾脏疾病与裂孔膜蛋白Nephrin、Podocin也有关联,这方面的研究最近5年有较多进展。深入开展这方面的研究,将可能会为人类后天获得性肾脏疾病的诊断、治疗及预后提供新思路。

肾络通对糖尿病肾病大鼠裂孔膜蛋白的影响

目的:探讨肾络通(益气养阴消癥通络为法)对糖尿病肾病大鼠24 h尿白蛋白定量(UAlb)及裂孔膜蛋白(nephrin)的影响。方法:将SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、厄贝沙坦组、中药组4组,按各组相应药物剂量灌胃。于第24周末检测各组大鼠24 h UAlb定量,western-blot法测肾组织nephrin蛋白表达。结果:各治疗组与模型组比较24 h UAlb明显减少(P<0.01),nephrin蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论:益气养阴消癥通络中药对链脲佐菌素(STZ)诱导的DN大鼠肾脏具有一定的保护作用。

肾衰饮对糖尿病肾病大鼠足细胞标志蛋白、足细胞裂孔膜蛋白影响

目的研究肾衰饮对糖尿病肾病(DKD)大鼠足细胞标志蛋白(PCX)、足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)的影响。方法选取SPF级雄性SD大鼠72只随机分为空白组、DKD组、厄贝沙坦组、肾衰饮低剂量组、肾衰饮中剂量组、肾衰饮高剂量组。采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素腹腔注射建立DKD大鼠模型。厄贝沙坦组采用厄贝沙坦2.7 mg/mL灌胃;肾衰饮低、中、高剂量组分别采用肾衰饮2.79、5.58、11.16 g/mL灌胃;空白组、DKD组采用等体积生理盐水灌胃。连续给药8周后检测各组大鼠尿蛋白(PRO)、总胆固醇(TC)、血肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)、血尿素氮(BUN)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、葡萄糖(GLU)、谷丙转氨酶(ALT)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷草转氨酶(AST)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理形态学变化;酶联免疫吸附试验检测血清碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平;蛋白免疫印迹法检测肾脏组织PCX、Nephrin蛋白表达水平。结果与空白组比较,DKD组大鼠GLU、ALT、AST、PRO、Scr、BUN、TC、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著下降(P<0.01);肾小球发生硬化性改变、上皮细胞颗粒样变性、囊腔明显变窄,肾小管周围大量炎性细胞浸润;血清bFGF、IGF、MCP-1表达水平显著升高(P<0.01);PCX、Nephrin水平显著降低(P<0.01)。与DKD组比较,厄贝沙坦组和肾衰饮各剂量组大鼠GLU、ALT、AST、PRO、Scr、BUN、TC、TG、LDL-C水平显著降低,HDL-C水平显著上升(P<0.05,P<0.01);肾脏病理损害不同程度减轻;厄贝沙坦组、肾衰饮高剂量组大鼠血清bFGF、IGF、MCP-1表达水平均有不同程度下降(P<0.01);厄贝沙坦组、肾衰饮高剂量组大鼠PCX、Nephrin水平均有不同程度上升(P<0.05,P<0.01)。结论肾衰饮能够有效降低DKD大鼠血糖、血脂、肝功能、肾功能、蛋白尿水平,抑制血清bFGF、IGF、MCP-1表达,改善肾组织病理改变,其机制可能与上调PCX、Nephrin蛋白表达以修复足细胞损伤有关。

化瘀通络中药对高糖刺激下足细胞裂孔膜蛋白的干预作用

通过化瘀通络中药对H-2Kb-ts A58条件性永生化小鼠足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP表达的干预作用,探讨化瘀通络中药降低糖尿病肾病蛋白尿、保护肾功能的可能作用机制。实验以体外培养小鼠足细胞为研究对象,将其分为正常糖组(CG)、高糖组(HG)、高糖加药组(HG+Z),通过免疫细胞化学(ICC)、蛋白质印迹法(Western-Blot)、实时荧光定量(Real-time PCR)方法检测不同时间点不同干预后各组podocin、CD2AP蛋白及基因的表达情况。结果显示干预足细胞48 h后,与CG组比较,其余两组podocin、CD2AP两种蛋白表达量均明显降低(P<0.05,P<0.01);与HG组比较,(HG+Z)组两种蛋白表达量均明显升高(P<0.05)。与同时间点CG组比较,其余两组podocin、CD2AP mRNA表达均显著降低(P<0.01);与同时间点HG组比较,(HG+Z)组48 h两种蛋白的基因表达量均明显升高(P<0.01),24、72 h与同时间点HG组无明显差异(P>0.05)。以上结果说明化瘀通络中药可以上调高糖刺激下足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的表达,其可能为化瘀通络中药减少糖尿病肾病蛋白尿、保护肾功能的作用机制之一。

益气活血化湿方对被动型Heymann肾炎模型大鼠足细胞裂孔膜蛋白α-actinin-4和CD2AP的调节作用

目的探讨益气活血化湿方及其拆方对被动型Heymann肾炎(PHN)模型大鼠足细胞裂孔膜蛋白α-actinin-4和CD2AP的调节作用。方法取雄性Wistar大鼠,制备经典的PHN模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、环孢素组、益气活血化湿方全方组、益气方组、活血方组和化湿方组,另取正常大鼠为对照组。各药物组分别灌胃给予相应药液,对照组和模型组大鼠灌胃给予等量0.9%NaCl溶液,连续6周。分别于第0、2、4、6周对各只大鼠眼眶静脉丛采血,代谢笼收集24 h尿液。全自动生化分析仪检测血清样本白蛋白(Alb)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平以及尿液样本24 h尿蛋白定量(UPRO)。干预结束后,取双侧肾脏。HE染色后光镜下观察肾组织形态学变化,透射电镜下观察肾小球基底膜、足细胞及足突的形态学变化。PCR和Western blot检测肾组织中α-actinin-4和CD2AP的mRNA及蛋白表达水平。结果①与对照组相比,模型组大鼠在各时间点UPRO和SCr水平均明显升高(P<0.05),Alb水平明显下降(P<0.05)。与模型组相比,环孢素组第4、6周UPRO水平明显下降(P<0.05),第2、4、6周Alb水平明显下降(P<0.05),但第2、4、6周SCr和BUN水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,全方组仅第6周UPRO水平明显下降(P<0.05)。与环孢素组相比,全方组第2、4、6周SCr和BUN水平明显降低(P<0.05)。②与对照组相比,模型组光镜下观察可见肾小球明显肿大,肾小球基底膜弥漫性增厚,毛细血管襻受压,部分肾小管上皮细胞肿胀;电镜下显示上皮细胞下大量电子致密物沉积,足突广泛融合或消失。与模型组相比,各药物干预组的肾小球病变程度均有减轻。③与对照组相比,模型组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),CD2AP mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,环孢素组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.05),CD2AP mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。与模型组相比,全方组α-actinin-4蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。④与模型组比较,各拆方组在各时间点的UPRO、Alb、SCr和BUN水平均无明显变化(P>0.05)。病理学观察显示各拆方组肾小球损伤程度较模型组明显减轻。与模型组相比,益气方组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.05),活血方组CD2AP mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论益气活血化湿方可明显降低PHN模型大鼠尿蛋白水平,减轻肾小球损伤,其机制可能与下调裂孔膜蛋白α-actinin-4表达、上调CD2AP表达有关。其拆方益气方具有抑制α-actinin-4表达的作用,活血方具有促进CD2AP表达的作用。

足细胞裂孔隔膜相关蛋白分子研究进展

肾小球滤过屏障可以阻止血浆蛋白进入尿液,由血管内皮细胞、肾小球基底膜和足细胞（足突）构成。而足细胞足突间的裂孔隔膜（slit diaphragm,SD）是构成肾小球滤过屏障结构及功能完整性的最重要组成部分,亦是限制蛋白滤过的关键部位。近年随着对肾小球滤过屏障机制的深入研究,已发现多种重要的足细胞相关蛋白。本文就足细胞具有代表性的几类相关蛋白结构特征、功能做一综述。

尿nephrin及α1微球蛋白与大鼠子痫前期发病相关性研究

目的:评估检测尿足细胞裂孔膜蛋白(nephrin)及α1微球蛋白水平对子痫前期(PE)早期诊断的临床意义。方法:将30只SPF级SD雌性妊娠大鼠随机分为PE组、生理盐水组、正常妊娠组,每组10只。于妊娠第11天起,PE组通过鼠尾静脉注射血管紧张素Ⅱ-1型受体拮抗剂(AT1-AA)建立PE模型;生理盐水组注射等量生理盐水;正常妊娠组无药物干预,共注射7 d。自妊娠第10天起,用动物无创血压测试仪测量孕鼠尾动脉收缩压;分别于妊娠第12、16、20天收集3法检测尿nephrin水平。结果:与妊娠第10天比较,从妊娠第13天开始,PE组血压显著升高,且随妊娠天数增加逐渐升高(P<0.05)。在妊娠第12、16、20天,PE组尿α1微球蛋白、nephrin水平均高于生理盐水组和正常妊娠组(P<0.05),生理盐水组和正常妊娠组尿α1微球蛋白、水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。PE组孕鼠尿nephrin可成功建立PEα1微球蛋白共同检测对于诊断及预测PE肾损害具有重要临床意义。

黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠足细胞裂孔隔膜的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞裂孔膈膜的保护作用及其可能机制。方法:利用腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病大鼠模型。将40只雄性SD大鼠随机分为4组各10只:正常对照组(NC组)、黄芪甲苷组(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ组)、糖尿病肾病组(DN组)和糖尿病肾病+黄芪甲苷干预组(DN+AS-Ⅳ组)。造模成功后每6、12周检测大鼠体质量及24小时尿蛋白量。造模后12周末留取大鼠血样本和肾组织标本并处死大鼠。检测大鼠肌酐(serum creatinine,SCr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和尿蛋白;PAS及Masson染色观察肾脏病理改变;电镜观察足细胞超微结构变化;免疫组化法及Western Blot法检测肾组织Nephrin、Podocin、Desmin表达。结果:与DN组相比黄芪甲苷可明显降低大鼠蛋白尿,改善大鼠肾脏病理损伤。DN组Nephrin、Podocin蛋白表达量均低于NC组(P<0.05),Desmin蛋白表达量高于NC组(均P<0.05),AS-Ⅳ组肾脏病理改变及各指标明显改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可能通过稳定足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin来抑制STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤。

Nephrin基因表达的改变与糖尿病肾病

Nephrin是肾小球裂孔膜上发现的第一个跨膜蛋白,是细胞粘附分子中的免疫球蛋白超家族成员,参与肾脏滤过屏障的正常发育并维持其正常功能。糖尿病肾病患者中存在该基因的异常或是mRNA表达的变化,使肾滤过膜结构与屏障功能完整性破坏,最终导致大量蛋白尿产生。血管紧张素转换酶抑制剂及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂可缓解糖尿病肾病患者中,nephrin表达的减少,其机制未明。

小鼠肾脏足细胞GPSD核心蛋白在高糖环境下表达的变化

目的通过观察高糖环境培养的肾小球足细胞裂孔隔膜（GPSD）核心蛋白nephrin、podocin和CD2AP的表达，探讨糖尿病肾病蛋白尿的发生机制。方法以RT—PCR方法检测不同浓度（5、10、20和40mmol／L）葡萄糖培养液培养小鼠足细胞24h后nephrin、podocin和CD2AP mRNA的表达水平。结果足细胞nephrin mRNA的表达在5mmol／L葡萄糖培养液培养24h后即显著减弱（P〈0.05），在其它浓度葡萄糖培养液培养24h后几乎无表达（均P〈0.01）；podocin和CD2AP mRNA的表达在10mmol／L葡萄糖培养液培养24h后显著下降（P〈0．01）。但随着培养液的葡萄糖浓度增加，podocin和CD2AP mRNA的表达却逐渐上调。结论口糖环境抑制足细胞nephrin、podocin和CD2AP的表达，可能是糖尿病肾病蛋白尿发生、发展机制之一。

姜黄素对大鼠运动性肾脏裂孔隔膜损伤的保护作用

本文就姜黄素对运动性肾脏裂孔隔膜损伤的保护作用及机制进行了研究。44只7周龄SPF级SD大鼠随机分为3组:对照组(C),过度训练组(OT)和姜黄素+过度训练组(COT)。实验中OT组、COT组大鼠进行6周递增负荷跑台训练。训练期间COT组以200 mg/kg/d、5 m L/kg姜黄素进行干预,其他组给予等体积1%的羧甲基纤维素纳灌胃。末次训练后24 h,光镜观察肾脏组织病理学改变;检测尿液、血液及肾脏组织相关生化指标。结果显示,6周跑台运动后,C组大鼠肾脏组织结构正常,OT、COT组大鼠肾脏均发生病理学改变,COT组较OT组有所缓解。肾小管Paller评分,OT组显著高于C组(P<0.01),COT组显著低于OT组(P<0.05)。尿蛋白(TP),OT组显著高于C组(P<0.01),COT组低于OT组,但无显著性差异(P>0.05)。微量白蛋白(m Alb),OT组显著高于C组(P<0.01),COT低于OT组,但无显著性差异(P>0.05)。血清睾酮(T),OT组低于C组(P<0.01),COT组显著高于OT组(P<0.01)。血清皮质酮(C),OT组显著高于C组(P<0.01),COT组显著低于OT组(P<0.01)。组间T/C比值变化趋势与T变化相一致。血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),OT组显著高于C组(P<0.01),COT组显著低于OT组(P<0.01)。肾脏Nephrin蛋白表达,OT组显著低于C组(P<0.01),COT组较OT组明显升高(P<0.05)。肾脏NF-κB p65蛋白表达,OT组显著高于C组(P<0.01),COT组较OT组显著降低(P<0.05)。肾脏TNF-α,OT组显著高于C组(P<0.01),COT组较OT组明显降低(P<0.05)。肾脏AngⅡ,OT组显著高于C组(P<0.01),COT组显著低于OT组(P<0.05)。从而说明6周的大强度跑台训练导致大鼠出现过度训练及运动性肾脏裂孔隔膜损伤。姜黄素通过抑制NF-κB的表达,减少TNF-α产生,降低RAS活性,缓解Nephrin的表达下调,有效地预防过度训练的发生与发展,进而保护大鼠肾脏裂孔隔膜结构与功能的正常。

硫辛酸对老年2型糖尿病肾病患者PCX、NGAL、Nephrin表达的影响

目的:探究硫辛酸治疗老年2型糖尿病肾病(T2DN)患者的效果及其对细胞标志蛋白(PCX)、明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)及足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)表达的实际影响。方法:选择2017年8月-2018年12月医院收治的68例老年T2DN患者为研究对象,随机分为两组,观察组(34例)予以硫辛酸与常规治疗,对照组(34例)予以常规治疗,对比两组的各项指标变化。结果:观察组的肾功能、氧化应激指标明显优于对照组(P<0.05);观察组的足细胞相关指标明显优于对照组(P<0.05)。结论:对老年T2DN患者予以硫辛酸治疗,可有效改善其肾功能,减轻氧化应激,减少足细胞损伤,值得临床推广。

Nephrin与肾脏疾病的研究进展

Nephrin是在裂孔隔膜上发现的第一个跨膜蛋白质，它主要由足细胞合成。它不仅是裂孔隔膜的关键结构分子，而且通过其磷酸化介导足细胞相关信号传导，参与足细胞的重要生物学功能。许多研究证实，nephrin的表达和分布改变是多种肾脏疾病的发病机制之一，缺乏nephrin可导致裂孔膜结构丧失、大量蛋白尿及肾衰竭。本文就近年来对nephrin与肾脏疾病的相关研究做一综述。

子痫前期患者尿液中足细胞裂孔膜蛋白和标记蛋白的检测及意义

目的:检测子痫前期患者尿液中足细胞裂孔膜蛋白和足细胞标记蛋白的浓度并探讨其临床意义。方法:本实验以62例妊娠期妇女为研究对象,分为三组,其中正常妊娠期妇女25例为正常对照组,慢性高血压的妊娠期妇女17例为高血压组,子痫前期患者20例为子痫前期组。ELISA检测各组妊娠期妇女的尿液中足细胞裂孔膜蛋白和足细胞标记蛋白的表达;Bradford法检测各组妊娠期妇女的尿蛋白。结果:足细胞裂孔膜蛋白和足细胞标记蛋白在正常对照组尿液中含量极少,在高血压组中分泌增加,而子痫前期组患者中明显升高(P<0.01),且在子痫前期组尿液中足细胞裂孔膜蛋白和标记蛋白的分泌含量均成正相关(r2=0.79,P<0.05)。子痫前期组患者中足细胞裂孔膜蛋白和足细胞标记蛋白与尿蛋白浓度成正相关(r2=0.58,P<0.05;r2=0.79,P<0.05)。结论:足细胞蛋白脱落主要发生于子痫前期患者,且足细胞蛋白脱落量与尿蛋白成正相关,能直接反映妊娠期患者的肾损伤程度,可作为预测罹患妊娠期高血压的指标。

儿童原发性肾病综合征尿足细胞标志蛋白、足细胞裂孔膜蛋白与尿蛋白关系的研究

目的探索儿童原发性肾病综合征(NS)蛋白尿与足突损伤间的关系。方法选择2013年9月至2014年3月于哈尔滨市儿童医院泌尿内科住院的20例原发性NS患儿为研究对象,并纳入肾病组(n=20)。选择同期于该院门诊体检的10例健康儿童为正常对照组(n=10)。研究组患儿均接受肾上腺糖皮质激素治疗。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测肾病组患儿不同观察时刻及正常对照组儿童随机尿足细胞标志蛋白(PCX)、足细胞裂孔膜蛋白(nephrin)水平,采用免疫比浊法及比色法测定患儿尿蛋白及尿肌酐水平,并计算尿蛋白、尿肌酐比值。结果 1肾病组患儿尿PCX、nephrin水平和尿蛋白、尿肌酐比值均显著高于正常对照组,且差异有统计学意义(t=2.612,2.843,2.972;P<0.01)。2肾病组患儿激素治疗期间尿PCX、nephrin水平和尿蛋白/尿肌酐比值总体均呈下降趋势。相邻观察时刻的尿PCX与nephrin水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗第8天尿PCX和nephrin水平较治疗前显著下降,且差异有统计学意义(t=1.934,2.093;P<0.05)。治疗第6天尿蛋白、尿肌酐比值较第4天和治疗前显著下降,且差异也有统计学意义(t=2.042,2.120;P<0.05)。3尿PCX、nephrin水平分别与尿蛋白、尿肌酐比值呈正相关关系(r=0.91,0.92;P<0.01)。结论尿PCX、nephrin水平随NS的恢复而逐渐下降,与尿蛋白指标有良好的相关性,对其进行监测可动态观察足细胞变化,对判断肾小球的损伤及恢复情况有一定的临床意义。