芪地固肾方对膜性肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin表达的影响

目的:探讨芪地固肾方治疗膜性肾病(MN)大鼠的效果及其可能的机制。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为模型组(等剂量生理盐水尾静脉注射)、雷公藤多甙片组(10 mg/kg雷公藤多甙片)、芪地固肾方低剂量组(15.425 g/kg芪地固肾方)、芪地固肾方高剂量组(61.7 g/kg芪地固肾方)四组,另取10只未造模大鼠作为空白组(等剂量生理盐水尾静脉注射),连续干预28天后,检测24小时尿蛋白定量(U-TP)、血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的变化;HE染色、透射电镜观察大鼠肾组织病理学改变;RT-PCR检测肾组织中nephrin蛋白、podocin m RNA的表达。结果:与空白组比较,模型组24 hU-TP、足细胞nephrin和podocin m RNA显著升高,血清TP和ALB显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组24 hU-TP降低,血清TP和ALB显著升高(P<0.05);肾组织免疫复合物沉积减少,肾小球基底膜增厚减轻;足细胞nephrin和podocin m RNA表达升高(P<0.05)。结论:芪地固肾方能够降低MN模型大鼠的尿蛋白水平,减轻肾脏病理损伤,上调肾组织中足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin m RNA的表达,延缓膜性肾病的进展。

黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠足细胞裂孔隔膜的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞裂孔膈膜的保护作用及其可能机制。方法:利用腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病大鼠模型。将40只雄性SD大鼠随机分为4组各10只:正常对照组(NC组)、黄芪甲苷组(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ组)、糖尿病肾病组(DN组)和糖尿病肾病+黄芪甲苷干预组(DN+AS-Ⅳ组)。造模成功后每6、12周检测大鼠体质量及24小时尿蛋白量。造模后12周末留取大鼠血样本和肾组织标本并处死大鼠。检测大鼠肌酐(serum creatinine,SCr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和尿蛋白;PAS及Masson染色观察肾脏病理改变;电镜观察足细胞超微结构变化;免疫组化法及Western Blot法检测肾组织Nephrin、Podocin、Desmin表达。结果:与DN组相比黄芪甲苷可明显降低大鼠蛋白尿,改善大鼠肾脏病理损伤。DN组Nephrin、Podocin蛋白表达量均低于NC组(P<0.05),Desmin蛋白表达量高于NC组(均P<0.05),AS-Ⅳ组肾脏病理改变及各指标明显改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可能通过稳定足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin来抑制STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤。

中药有效成分对糖尿病肾病足细胞裂空隔膜蛋白干预作用的研究进展

肾小球足细胞裂孔隔膜(SD)蛋白是SD的重要组成成分,其在维持SD结构和功能的完整性方面发挥着关键性作用,并且与蛋白尿的发生密切相关。从中药中提取有效成分对SD蛋白的结构、功能及其作用机制进行干预,已成为防治糖尿病肾病研究的一个热点。本文就近年来足细胞SD蛋白的研究现状、中药有效成分对SD蛋白的干预作用及其作用机制作一综述,主要阐述了雷公藤、黄芪、积雪草、川芎、绞股蓝、三七、冬虫夏草、红参、五味子等多种中药的有效成分对SD蛋白,尤其是nephrin、podocin蛋白等的干预作用及其防治蛋白尿的作用机制,为更好地设计早期蛋白尿防治方案以及为预防肾病综合征提供新的研究策略。

ROS介导棕榈酸诱导的肾小球足细胞骨架及裂孔隔膜损伤

目的:探讨棕榈酸(palmitic acid,PA)对足细胞肌动蛋白纤维骨架及裂孔隔膜蛋白损伤的影响。方法:应用PA刺激体外培养的条件永生性小鼠肾小球足细胞株,分为对照组(1%BSA)和PA(150μmol/L)组。采用Alexa 549-phalloidin染色观察足细胞肌动蛋白纤维骨架的变化;免疫荧光染色法观察检测足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin的表达;油红“O”、透射电镜以及BODIPY染色检测PA刺激下足细胞内脂质积聚情况。应用不同浓度PA刺激足细胞,分为对照组(1%BSA)、50μmol/L PA组、150μmol/L PA组、300μmol/L PA组。采用Western blot检测足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin的表达。进一步应用氧自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)预处理足细胞,分为对照组(1%BSA)、PA(150μmol/L)组、NAC组、PA(150μmol/L)+NAC组。采用DCFH-DA染色检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生;Alexa 549-phalloidin染色观察足细胞肌动蛋白纤维骨架的变化;Western blot检测足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin的表达。结果:Western blot结果示300μmol/L PA组足细胞内Nephrin和Podocin的表达(0.360±0.030,0.900±0.040)分别与对照(Ctr)组(1.000±0.030,1.000±0.030)和50μmol/L PA组(0.912±0.020,0.900±0.040)相比都明显减少(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.003)。免疫荧光显示与Ctr组相比,PA组足细胞Nephrin(t=6.014,P=0.010)和Podocin(t=6.171,P=0.010)蛋白的表达减少。使用NAC预处理足细胞清除ROS,与PA组(1.21±0.04,1.30±0.03)相比,PA+NAC组Nephrin(2.87±0.05)和Podocin(2.69±0.06)的表达减少(P=0.000,P=0.000)。结论:ROS介导了棕榈酸诱导的足细胞骨架及裂孔隔膜损伤。

miR-155表达变化对TGF-β1损伤足细胞蛋白podocin、CD2AP、synaptopodin的影响

目的:研究miR-155 mimics/inihibitor转染足细胞后微小RNA-155(miR-155)的表达变化及其对TGF-β1损伤足细胞的影响。方法:体外培养小鼠足细胞,细胞免疫荧光染色鉴定足细胞分化成熟;用TGF-β1处理足细胞构建足细胞损伤模型,RT-PCR和Western blot分别检测miR-155和CD2AP的表达;免疫荧光显微镜观察转染成功指示剂Cy3,RT-PCR检测miR-155 mimics/miR-155 inihibitor转染(0 h、24 h、48 h、72 h)后miR-155的表达;选取转染时间48~72 h,RT-PCR检测Normal、TGF-β1、TGF-β1+mimics、TGF-β1+mimics NC、TGF-β1+inhibitor、TGF-β1+inhibitor NC组细胞miR-155及podocin、CD2AP、synaptopodin的mRNA表达,Western blot检测3种蛋白的表达,免疫荧光观察各组CD2AP的荧光分布和表达。结果:CD2AP呈足细胞分化成熟的特征分布;TGF-β1干预后miR-155表达上升,CD2AP蛋白表达下降(P<0.05);miR-155 mimics或miR-155 inihibitor转染48 h、72 h后,miR-155表达明显增加或减少(P<0.05);miR-155 mimics可上调TGF-β1诱导的miR-155表达(P<0.05),且可促进TGF-β1诱导的足细胞podocin、CD2AP、synaptopodin的mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),而转染miR-155 inihibitor对足细胞蛋白的作用与miR-155 mimics相反。免疫荧光结果显示CD2AP蛋白的表达与Western blot、RT-PCR结果一致。结论:miR-155可靶向足细胞蛋白podocin、CD2AP和synaptopodin的表达,miR-155过表达可促进足细胞损伤,miR-155表达下调则可改善足细胞的损伤,因此,miR-155可作为足细胞损伤新的药物靶标。

BMSCs对糖尿病肾病大鼠的治疗作用及机制探讨

目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对糖尿病肾病(DN)大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法将20只DN造模型成功大鼠随机分为观察组和对照组各10只,分别于造模4周尾静脉输注BMSCs、生理盐水;另选10只正常大鼠作为空白组,不做任何处理。造模12周,检测各组24 h尿蛋白定量、血肌酐(Scr)、血糖、裂孔隔膜蛋白(nephrin)和肌间线蛋白(desmin)水平。结果与空白组比较,对照组及观察组血糖、24 h尿蛋白量、Scr和desmin表达升高,nephrin表达减少(P均<0.05);与对照组比较,观察组24 h尿蛋白量、Scr和desmin表达降低,nephrin表达增加(P均<0.05)。结论 BMSCs对DN大鼠肾脏具有治疗作用,可能与其改善足细胞EMT有关。

沙利度胺对膜性肾病大鼠炎症的抑制作用及其机制分析

目的:研究沙利度胺对膜性肾病大鼠炎症的抑制作用及其机制。方法:选取清洁级雄性SD大鼠,应用自备阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)尾静脉注射制备膜性肾病大鼠模型。造模成功后,分别给予沙利度胺溶液100 mg·kg^-1·d^-1和来氟米特5 mg·kg^-1·d^-1灌胃,连续给药4周后,检测24 h尿蛋白定量,处死大鼠后,取肾组织光、电镜下观察肾小球病理改变,并检测外周血中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量以及M型磷脂酶A2受体(PLA2R)、足细胞裂孔隔膜蛋白分子(podocin)表达水平。结果:沙利度胺和来氟米特干预后能够降低模型大鼠的24 h蛋白尿量、血浆肌酐水平,提高血浆白蛋白水平,差异有统计学意义(P<0.05);光、电镜染色结果显示,沙利度胺和来氟米特干预后能够改善模型大鼠肾组织损伤程度;沙利度胺和来氟米特干预后能够降低模型大鼠血清中VEGF、TNF-α水平以及肾组织中PLA2R的相对表达水平,同时还能够提高podocin蛋白相对表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:沙利度胺可能通过降低膜性肾病大鼠VEGF、TNF-α水平降低炎症反应,同时抑制PLA2R表达,促进podocin表达来缓解肾损伤。

丹参多酚酸盐对阳离子化牛血清白蛋白致膜性肾病大鼠的影响

目的观察丹参多酚酸盐对阳离子化牛血清白蛋白致膜性肾病大鼠血液生化指标、肾组织病理形态及足细胞裂孔隔膜蛋白CD2相关蛋白(CD2AP)、结蛋白(Desmin)表达的影响,探讨丹参多酚酸盐对膜性肾病大鼠的肾保护作用及其可能机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为对照组和造模组,采用尾iv阳离子化牛血清白蛋白的方法复制膜性肾病大鼠模型。造模成功的大鼠随机分为模型组、盐酸贝那普利组和丹参多酚酸盐低、中、高剂量(16.7、33.3、66.7 mg/kg)组。每组按相应剂量给药,给药结束后检测大鼠24 h尿蛋白定量(UTP)和血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平;免疫荧光、光镜、电镜下观察大鼠肾脏病理形态;免疫组化及实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测各组大鼠肾组织CD2AP、Desmin m RNA的表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠UTP显著增加(P<0.01),血清TC、TG水平显著升高(P<0.01),血清TP、ALB水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各治疗组大鼠UTP、TC、TG水平均显著降低(P<0.05、0.01),TP、ALB水平均显著升高(P<0.01);丹参多酚酸盐各剂量组与盐酸贝那普利组大鼠UTP、TC、TG、TP、ALB比较无显著差异;丹参多酚酸盐各剂量组组内比较亦无明显差异。各组大鼠BUN、Scr相比无明显差异。与对照组比较,模型组大鼠肾组织CD2AP蛋白及m RNA表达量均显著减少,Desmin蛋白及m RNA表达量显著增多(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠CD2AP蛋白及m RNA表达量显著增多,Desmin蛋白及m RNA表达量显著减少(P<0.01);各治疗组之间相比无显著差异。结论丹参多酚酸盐对膜性肾病大鼠的肾保护作用可能与上调CD2AP表达、下调Desmin表达,抑制足细胞损伤,保护肾小球滤过屏障的完整性有关。

复肾功方对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏nephrin mRNA表达的影响

目的研究复肾功方对慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白(nephrin)mRNA表达的影响,探讨其降低尿蛋白、减轻肾损害的作用机制。方法将55只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,复肾功方低、中、高剂量组,每组11只。正常组常规饲养,其余4组大鼠食用含腺嘌呤饲料建立慢性肾功能衰竭模型,连续喂养21d。造模成功后,所有大鼠改用常规饲料。正常组和模型组按20mL/(kg·d)灌胃给予生理盐水;复肾功方低、中、高剂量组按大鼠体质量分别以生药4、8、16g/kg灌胃复肾功方,1次/d,连续灌胃30d。实验结束后,收集大鼠尿液测定24h尿蛋白定量,检测各组大鼠血清血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平,HE染色检测肾小球组织形态学改变,免疫荧光检测nephrin蛋白表达,Real-Time PCR法观察肾脏nephrin mRNA表达情况。结果与正常组比较,模型组24h尿蛋白定量、SCr和BUN水平升高(P<0.05),nephrin蛋白及mRNA表达下降(P<0.05);与模型组比较,经复肾功方治疗后,24h尿蛋白定量、SCr和BUN水平降低(P<0.05),肾组织nephrin蛋白及mRNA的表达升高(P<0.05)。结论复肾功方降低CRF大鼠尿蛋白,减轻肾损害程度,其机制可能与升高肾组织nephrin蛋白及mRNA的表达、减轻足细胞损伤有关。