裂果薯皂苷I体外对人胰腺癌PANC-1细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨裂果薯皂苷I(SSPHI)体外对人胰腺癌PANC-1细胞增殖与凋亡的影响。方法:CCK8法检测SSPHI干预人胰腺癌PANC-1细胞后对细胞增殖抑制的影响,流式细胞术检测细胞周期的阻滞、细胞凋亡和线粒体膜电位,western blotting检测细胞相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-9和Cytochrome C的表达。结果:SSPHI呈时间和浓度依赖性地抑制PANC-1细胞的增殖(P<0.01)。流式细胞术结果显示,SSPHI阻滞PANC-1细胞株的细胞周期于G2期(P<0.01)。SSPHI处理细胞后,SSPHI呈浓度依赖性显著诱导PANC-1细胞凋亡(P<0.01),使线粒体膜电位去极化(P<0.01),Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-9和Cytochrome C蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量下降(P<0.01)。结论:SSPHI降低人胰腺癌PANC-1细胞中Bcl-2/Bax的比值,引起Cytochrome C从线粒体释放,激活Caspase级联反应,参与线粒体介导的细胞凋亡。

裂果薯皂苷Ⅰ抗人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤的作用机制研究

目的:探讨裂果薯皂苷Ⅰ(SSPHI)对胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及其作用机制。方法:建立人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤模型,成瘤裸鼠随机分为模型组、吉西他滨(GEM)组、SSPHI低剂量组(SSPHI-L)组、SSPHI中剂量(SSPHI-M)组和SSPHI高剂量(SSPHI-H)组,连续给药15 d后取瘤组织,测量肿瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;苏木精-伊红(HE)染色法观察人胰腺癌移植瘤组织病理形态变化,TUNEL染色观察肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学染色法测定裸鼠移植瘤Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达。结果:与模型组相比,SSPHI低、中、高剂量组和GEM组移植瘤体积和瘤重均降低,细胞凋亡率升高(P<0.01),移植瘤组织Caspase-9、Caspase-3和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.01)。结论:SSPHI可抑制胰腺癌裸鼠移植瘤生长,其作用机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3表达,诱导移植瘤细胞凋亡有关。

裂果薯皂苷Ⅰ抑制人肺癌细胞生长、迁移和侵袭的机制初探

目的:研究裂果薯皂苷Ⅰ(SSPHⅠ)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的生长、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:利用Autodock软件将SSPHⅠ和关键靶标间质—上皮转化因子(Met)蛋白进行分子对接。采用集落形成法和细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞克隆形成能力和细胞的生长曲线,伤口愈合实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。用FITC鬼笔环肽荧光染色法检测细胞的肌动蛋白细胞骨架重组,免疫蛋白印迹(western blotting)法检测Met蛋白磷酸化水平。结果:SSPHⅠ明显抑制A549和PC9细胞的克隆能力、细胞活性、迁移和侵袭能力(P<0.05);同时,SSPHⅠ显著抑制F-肌动蛋白细胞骨架形成。分子对接模拟显示SSPHⅠ和Met具有良好的结合活性。western blotting结果显示,SSPHⅠ明显降低了A549细胞的Met蛋白的磷酸化水平。结论:SSPHⅠ可明显抑制NSCLC细胞生长、迁移和侵袭,其机制可能与抑制HGF/Met信号通路有关。

裂果薯皂苷的特征图谱及总皂苷中有效组分的抗肿瘤活性研究

采用高效液相色谱紫外及蒸发光散射检测器建立裂果薯总皂苷(SFSP60%)的特征图谱,乙腈-水为流动相梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温30℃,流速1 m L/min,进样量10μL。以ELSD色谱图中SFSP60%色谱峰为参照,采用面积归一法计算出裂果薯皂苷Ⅰ(SPHSⅠ)相对百分比为84.28%,裂果薯皂苷Ⅱ(SPHSⅡ)为3.02%,化合物1为2.21%,化合物2为6.31%,化合物3为2.73%,化合物1~3可能是母核类似的皂苷类化合物。取对数生长期的人肝癌SMMC-7721细胞,给药组分别加入0、0.25、0.5、2、4μg/m L的SFSP60%、SPHSⅠ、SPHSⅡ和SPHSⅠ+Ⅱ(SPHSⅠ和SPHSⅡ各占比96.54%、3.46%)培养24 h、48 h、72 h,采用MTT法观察并计算细胞增殖抑制率和IC50。结果显示给药组对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用呈现时间与剂量依赖性(P均<0.05),且活性大小:SFSP60%<SPHSⅠ、SPHSⅡ<SPHSⅠ+Ⅱ。证明在总皂苷中是SPHSⅠ和SPHSⅡ发挥主要抗肿瘤作用,且抗肿瘤作用是各组分共同作用的结果。为裂果薯中有效组分的抗肿瘤活性研究提供了参考以及有效组分的合理配比提供了新思路。

裂果薯皂苷对人肝癌BEL-7402细胞自噬的影响

目的:探讨裂果薯皂苷中化合物Ⅰ(SPHSⅠ)和化合物Ⅱ(SPHSⅡ)对人肝癌BEL-7402细胞自噬的影响,并对其分子机制进行初步探究。方法:采用MTT、Western blotting、Lyso-Tracker Red染色、Magic Red Cathepsin B染色、流式细胞仪分析分别检测SPHSⅠ和SPHSⅡ对人肝癌BEL-7402细胞增殖、自噬和凋亡的影响。结果:SPHSⅠ和SPHSⅡ可抑制BEL-7402细胞增殖并诱导细胞凋亡,同时可抑制细胞自噬,引起自噬标志性蛋白LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ,p62蛋白表达无明显变化;加入溶酶体抑制剂氯喹后,SPHSⅠ和SPHSⅡ未能进一步提高用氯喹处理的细胞中的LC3-Ⅱ水平。Lyso-Tracker Red染色、Magic Red Cathepsin B染色及Western blotting检测结果表明,SPHSⅠ和SPHSⅡ可阻断自噬体-溶酶体融合,并通过改变溶酶体酸化和下调溶酶体组织蛋白酶的表达来抑制溶酶体蛋白水解活性。利用Earle′s平衡盐溶液(EBSS)饥饿处理细胞后,SPHSⅠ和SPHSⅡ诱导的细胞凋亡进一步增加。结论:SPHSⅠ和SPHSⅡ可抑制自噬并诱导细胞凋亡,饥饿显著增加人肝癌BEL-7402细胞对SPHSⅠ和SPHSⅡ诱导的细胞凋亡的敏感性。

裂果薯皂苷单体Ⅰ通过TGF-β1调控上皮间质转化对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭和转移的影响

目的探究裂果薯皂苷单体Ⅰ通过转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭和转移的影响。方法MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖活性;用TGF-β1刺激细胞24 h,以TGF-β1/Smad信号通路抑制剂SIS3作阴性对照。细胞划痕实验和Tran-swell小室侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测Smad7、Smad2/3、p-Smad2/3、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果SSPHⅠ能抑制SMMC-7721细胞的增殖,其24 h的IC50为1.72μmol·L^-1;与TGF-β1组相比,TGF-β1+SSPHⅠ组细胞迁移率和侵袭细胞数显著降低;Western blot实验结果显示,TGF-β1+SSPHⅠ组的Smad2/3,p-Smad2/3,N-cadherin和Vimentin蛋白的表达降低,Smad7和E-cadherin表达升高,结果与TGF-β1+SIS3组相同(P均<0.05)。结论SSPHⅠ能抑制SMMC-7721细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路,阻断EMT发生有关。

裂果薯皂苷Ⅰ对人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞增殖与凋亡的影响

目的:探导裂果薯皂苷Ⅰ对人非小细胞肺癌增殖与凋亡的影响。方法:MTT法检测裂果薯皂苷Ⅰ对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞增殖的影响,Hoechst 33342染色法观察细胞核的形态学变化,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Westen blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达。结果:裂果薯皂苷Ⅰ呈时间和浓度依赖性抑制非小细胞肺癌NCI-H1299细胞的增殖,裂果薯皂苷Ⅰ处理细胞后,细胞核呈致密浓染,凋亡小体形成,出现典型的凋亡变化。流式细胞术结果显示裂果薯皂苷Ⅰ能显著诱导NCI-H1299细胞的凋亡,且凋亡率随药物浓度的升高而升高。Westen blot检测显示,与空白对照组比较,裂果薯皂苷Ⅰ5、10μmol/L浓度组Caspase-3、Caspase-9蛋白表达及Bcl-2/Bax水平显著降低。结论:裂果薯皂苷Ⅰ能以浓度及时间依赖性抑制NCI-H1299细胞的增殖,诱导其发生凋亡。其机制可能与上调Bax表达,下调Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9表达有关。

裂果薯皂苷Ⅰ通过干预谷氨酰胺代谢影响人肝癌BEL-7404细胞增殖的研究

目的探究裂果薯皂苷Ⅰ(SSPHⅠ)对BEL-7404细胞的增殖及谷氨酰胺代谢的影响,并分析其可能的作用机制。方法体外培养BEL-7404细胞,分别给予不同浓度的SSPHⅠ(0、1、2、3、4、5、6、7和8μmol·L^(-1))处理24、48和72 h,用噻唑蓝法检测SSPHⅠ对BEL-7404细胞的存活率的影响。将BEL-7404细胞分为空白组(不做任何处理)和低、中、高剂量实验组(分别给予2、4和8μmol·L^(-1)SSPHⅠ处理)。用酶联免疫吸附实验法检测细胞内谷氨酰胺(Gln)、谷氨酸(Glu)和谷胱甘肽(GSH)的含量,用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平,用蛋白质印迹法检测谷氨酰胺酶(GLS1)及谷氨酸脱氢酶(GLUD1)蛋白的表达水平。结果SSPHⅠ对肝癌BEL-7404细胞的增殖有抑制作用。SSPHⅠ作用于BEL-7404细胞24、48、72 h后的半抑制浓度分别为3.37、2.60和2.70μmol·L^(-1)。低、中、高剂量实验组和空白组的细胞克隆形成率分别为(76.53±0.93)%、(18.60±0.49)%、(8.00±1.23)%和(80.20±0.82)%,Gln含量分别为(1728.89±37.47)、(1526.11±20.79)、(1434.44±38.69)和(1812.22±37.47)μmol·L^(-1),Glu含量分别为(51.97±0.06)、(47.95±0.61)、(45.91±0.59)和(55.24±0.54)mg·L^(-1),GSH含量分别为(110.13±1.84)、(102.91±1.58)、(69.40±1.01)和(150.05±1.33)μmol·L^(-1),ROS含量分别为(31.53±2.32)%、(34.90±2.06)%、(52.12±3.99)%和(22.67±2.15)%,GLS1蛋白相对表达水平分别为0.90±0.13、0.61±0.08、0.43±0.10和1.28±0.16,GLUD1蛋白相对表达水平分别为1.28±0.09、0.92±0.22、0.65±0.03和1.34±0.24。高剂量实验组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论SSPHⅠ可以抑制BEL-7404细胞的增殖,其机制可能与抑制谷氨酰胺代谢有关。