猪瘟病毒装甲RNA颗粒质控品的研制及评估

[目的]研制一种安全稳定高效的猪瘟核酸检测质控品,为猪瘟疫病监测提供技术支持。[方法]将猪瘟病毒核酸检测靶基因构入至新型装甲RNA表达载体pTMACC,转化、表达并纯化,制备猪瘟病毒装甲RNA质控品。借助电泳、电镜、动态散射分析鉴定该物质结构特性,并对其均匀性、稳定性进行分析,评估其实用性能。[结果]该装甲RNA颗粒含有猪瘟病毒特异性基因,序列溯源至法国Thiverval株;为RNA-蛋白复合物,颗粒呈直径约26 nm的多边形;该质控品均匀、稳定,-20℃至少稳定保存36个月;经8家权威实验室性能评估,该物质可以作为猪瘟病毒核酸检测质控品。[结论]猪瘟病毒装甲RNA质控品均匀性良好,稳定性强,无生物传染性,核酸RNA不易降解,可稳定保存,进一步保障猪瘟疫病的临床检测的准确性。

双表达系统制备新型冠状病毒N基因装甲RNA颗粒的研究

人工合成新型冠状病毒(SARS-CoV-2)标准参考毒株Wuhan/WIV04/2019完整N基因序列(1260 bp)和包含MS2噬菌体基因组成熟酶蛋白、衣壳蛋白基因序列(1682 bp),分别克隆到原核双表达质粒pACYCDuet-1的2个不同的多克隆位点,从而获得重组表达质粒pACYC-MS2-CoV2N。将pACYC-MS2-CoV2N转化表达菌株BL21(DE3),经表达、纯化,获得含有SARS-CoV-2完整N基因的装甲RNA颗粒。经鉴定装甲RNA颗粒含有SARS-CoV-2完整N基因且没有DNA残留,并可抵抗RNase消化。采用荧光RT-PCR对装甲RNA颗粒进行定值后,制备出了用于SARS-CoV-2 N基因检测的核酸质控品,该核酸质控品均匀、稳定、可重复性好,在2~8℃可保存180 d,可用于SARS-CoV-2核酸检测的质控。