裸露DNA疫苗pCDSj32的构建、鉴定及在小鼠骨骼肌细胞的表达

应用基因工程技术，对本室已经克隆的日本血吸虫成虫３２ｋＤａ蛋白分子的ｃＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增，扩增产物亚克隆入高效真核表达载体ｐＣＤ，构建成功裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２。ｐＣＤＳｊ３２在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌细胞得到表达。表达产物可被小鼠抗３２ｋＤａ蛋白分子单抗识别。免疫荧光定位显示，表达产物不但存在于细胞浆，而且可结合于胞膜并被分泌至胞外。

不同剂量日本血吸虫裸露DNA疫苗pCDSj32诱发小鼠保护性免疫力的初步研究

应用已构建的日本血吸虫裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２经骨骼肌免疫小鼠，获得了较好的保护性免疫效果。１００μｇ和２００μｇｐＣＤＳｊ３２免疫后，减成虫率分别为５２．４３％和３６．４７％；肝组织减卵率分别为５４．１９％和５７．７９％；并对各组小鼠肝脏虫卵肉芽肿的面积进行了测量。结果表明，ｐＣＤＳｊ３２免疫小鼠后可减少虫荷，降低血吸虫的产卵量，抑制肝脏虫卵肉芽肿的形成。

裸露DNA──疫苗发展的一条新途径

裸露ＤＮＡ──疫苗发展的一条新途径严家新（武汉生物制品研究所，武汉４３００６０）关键词裸露ＤＮＡ，疫苗自从Ｗｏｌｆｆ等１９９０年在Ｓｃｉｅｎｃｅ上发表《直接将基因转移至活体小鼠肌肉》一文以来，裸露ＤＮＡ（ｎａｋｅｄＤＮＡ）成了疫苗研究中热门的领域之一...

关节腔内注射裸露DNA治疗关节炎机制的实验研究

关节腔内注射裸露ＤＮＡ，是实现关节内基因转移的一种最简便的方法，但其机制尚不了解。本实验利用差速离心法，提取类风湿性关节炎患者关节滑膜细胞的非核膜蛋白，以大鼠肝细胞非核膜蛋白作为对照，应用32Ｐ标记的 ＤＮＡ，进行 ＤＮＡ膜蛋白结合实验。我们发现在滑膜细胞微粒体膜的抽提物中存在一种非核 ＤＮＡ结合蛋白质，分子量约为８３ＫＤａ，这种蛋白质能特异地与双链线状ＤＮＡ结合，可能在关节滑膜介导的基因转移中起一定作用。

大鼠肝再生中肝细胞基因表达与DNA裸露的相关性研究

为了解大鼠肝再生中肝细胞的基因表达与DNA裸露的相关性,分离大鼠肝细胞,提取裸露DNA,用SOLEXA方法对DNA测序,用BWA软件拼装测序片段,用IPA软件分析拼装的基因种类和作用,用Rat Genome230 2.0芯片检测基因的转录情况.研究表明,大鼠肝再生的12h(PH后12h),肝细胞的裸露DNA涉及16 912个基因,1 701个基因发生了有意义裸露量变化.其中,25个基因的裸露量上调,1 676个基因的裸露量下调.与Rat Genome 230 2.0芯片的检测的基因转录比对表明,肝细胞的AKR7A3,BMYC,CDC25B等26个基因的裸露量和表达量均下调,表明大鼠肝再生12h时,这些基因的表达可能受染色体结构调控.

裸露DNA经胆道分支导入活体肝脏的局部表达

目的经胆道分支逆行导入裸露DNA，观察目的基因在正常及急性损害大鼠局部肝脏的定量和定位表达。方法运用D-氨基半乳糖制作大鼠急性肝损害模型；经胆管分支将Cy3荧光标记CMVD质粒通过胆道分支逆行导入局部肝脏，观察裸露DNA导入肝脏的情况。同时运用包含萤火虫荧光素基因质粒pGL3及包含大肠埃希氏菌D半乳糖苷酶基因质粒pCMVp逆行导入大鼠局部肝脏，定量检测荧光素酶和定位检测B半乳糖苷酶在肝脏的表达。应用非参数Kruskal—Wallis法秩和检验进行统计分析。结果肝组织冰冻切片观察到Cy3荧光标记DNA在汇管区附近聚集。按100ug／ml浓度进行基因导入，荧光素酶基因在正常大鼠肝脏，急性损害大鼠肝脏均有显著表达。大肠埃希氏菌β半乳糖苷酶定位检测结果显示正常大鼠肝脏及急性肝损害大鼠肝脏内有β半乳糖苷酶显著表达，并可见较多肝细胞表达β半乳糖苷酶。结论裸露DNA经胆道逆行导入正常及急性损害肝脏局部能获得较好表达，且无明显加重肝脏损害，该项方法为肝脏基因治疗的实验研究提供了良好的技术平台。

基因转移加速创伤愈合

枪击创伤在美国并不罕见,然而,一种新型的枪——基因枪——则可能加速这类和其它类型慢愈合创伤的修复过程。Brigham and Women’s Hospital(Boston,MA)的科学家使用Agracetus Inc.(University Green,WI)的Accell基因枪将表皮生长因子(EGF)基因拷贝导入猪的部分增厚创伤。观察可见,这些创伤比未处理猪的类似创伤愈合快20％(2.1天)。 将结合于金微粒的EGF质粒拷贝直接射入猪的伤口创面。与未处理的创伤比较,这些创伤的EGF浓度上升了190倍,愈合平均快二天。治疗后的第一天,伤口流出液中含200Pg/ml的EGF,五天以后下降至25Pg/ml。 Agracetus公司认为,该方法比用EGF或其它生长因子局部处理伤口的方法优越,伤口内部产生生长因子可免除频繁的局部施用,同时也可减少对创伤的扰动。此外,若创伤组织生成某种疗效肽,则这种肽以一种非常类似于天然伤口愈合的方式被送至靶细胞。