RNAi沉默Rac1基因对结肠癌细胞增殖及裸鼠成瘤的影响

目的：探讨RNAi沉默Rac1基因对结肠癌细胞增殖及裸鼠成瘤的影响。方法①细胞实验：体外培养结肠癌细胞SW480，随机分为空白对照组、阴性对照组、shRNA-Rac1组，阴性对照组、shRNA-Rac1组分别转染空载质粒慢病毒、shRNA-Rac1慢病毒。采用RT-PCR技术、Western blotting法检测各组Rac1 mRNA及其蛋白表达；采用MTT法检测各组转染24、48、72、96 h的细胞增殖情况。②动物实验：取shRNA-Rac1组、阴性对照组转染后细胞分别接种于裸鼠皮下，建立结肠癌裸鼠移植瘤模型（分别记为观察组、对照组），观察裸鼠成瘤及移植瘤生长情况，喂养35天脱臼处死，完整剥离肿瘤组织，称取瘤体质量并测量肿瘤体积。同时检测瘤体 Rac1蛋白表达情况。结果①细胞实验：与阴性对照组比较，shRNA-Rac1组Rac1 mRNA及其蛋白表达明显降低（P均＜0．05）；与阴性对照组比较，shRNA-Rac1组各时间点细胞增殖速度明显降低（P均＜0．05）。②动物实验：对照组癌细胞接种4～8天均可见瘤体形成，观察组接种35天仅2只成瘤，且瘤体形成时间较对照组晚10天。接种35天，观察组、对照组瘤体体积分别为（32．54±43．13）、（948．13±523．50）mm3，瘤体质量分别为（0．023±0．031）、（0．873±0．372）g，两组比较P均＜0．01。与对照组比较，观察组瘤体组织Rac1蛋白阳性表达率明显降低（ P＜0．05）。结论抑制Rac1表达能降低结肠癌细胞增殖速度，抑制裸鼠移植瘤生长。

Xklp2靶蛋白对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法慢病毒感染肺癌细胞A549,以感染TPX2小干扰RNA(siRNA TPX2)和siRNA阴性对照慢病毒的细胞作为siRNA TPX2组和siRNA-NC组,同时以不做处理的细胞为Control组,RT-PCR和Western blot检测感染后细胞中TPX2水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,将各组细胞接种到裸鼠皮下,检测各组裸鼠肿瘤体积和重量,Western blot检测肿瘤组织中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、TPX2、p53水平。结果 siRNA-NC组细胞中TPX2 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率及Cleaved Caspase-3、TPX2、p53水平与Control组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA TPX2组细胞中TPX2mRNA和蛋白均明显低于Control组(P<0.05)。siRNA TPX2组细胞增殖活性明显降低,凋亡率明显升高,与Control组比较差异有统计学意义(P<0.05)。接种siRNA TPX2组细胞的裸鼠肿瘤体积和重量均低于Control组,而肿瘤组织中Cleaved Caspase-3、p53水平均高于Control组,TPX2水平低于Control组(P<0.05)。结论下调TPX2抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞裸鼠成瘤能力,这可能与促进p53表达和促进Caspase-3活化有关。

蛇床子素抑制PI3K/AKT/mTOR的活化诱导视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡和抑制裸鼠成瘤的研究

目的研究蛇床子素通过抑制PI3K/AKT/mTOR的活化,诱导视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡和抑制裸鼠成瘤的作用。方法将Y79细胞分为对照组和蛇床子素8、16、32μmol/L组,对照组给予生理盐水,不同浓度蛇床子素组细胞分别给予蛇床子素8、16、32μmol/L干预。检测不同浓度蛇床子素对Y79细胞凋亡和胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA及蛋白的影响。构建视网膜母细胞瘤裸鼠腋下异位移植瘤模型,并观察蛇床子素20、50、100 mg/kg处理的裸鼠成瘤情况。结果与对照组比较,8、16、32μmol/L的蛇床子素组细胞凋亡率均显著增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。与对照组比较,8、16、32μmol/L的蛇床子素凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9的mRNA及蛋白表达水平增高,PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平减低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。与对照组比较,20、50、100 mg/kg的蛇床子素组裸鼠视网膜母细胞瘤体积和重量降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论蛇床子素可通过抑制PI3K/AKT/mTOR的活化来诱导视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡和抑制裸鼠成瘤。

过表达转录因子21对肺癌细胞裸鼠成瘤的影响

目的探讨转录因子(TCF)21对肺癌细胞裸鼠成瘤的影响。方法选取人肺癌细胞SPC-A1,细胞转染TCF21过表达载体(过表达组)和空载体(空载体组),设置对照组,对照组中只加入转染试剂,培养48 h,Western印迹检测细胞中TCF21的表达水平。将过表达TCF21的肺癌细胞接种到裸鼠皮下,分别在5、10、15、20 d测量肿瘤的长径和短径,计算肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线。在20 d时,取出肿瘤,称量肿瘤重量,并计算瘤重抑瘤率,同时Western印迹检测肿瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、TCF21表达水平。结果过表达组肺癌细胞中TCF21水平明显高于对照组(P<0.01)。过表达组肿瘤生长与对照组相比明显受到抑制(P<0.01)。空载体组和过表达组的抑瘤率分别为(7.52±0.07)%和(72.24±0.61)%,且过表达组肿瘤重量明显低于对照组(P<0.01)。过表达组肿瘤组织中Cleaved Caspase-3、TCF21表达水平明显高于对照组,而Bcl-2水平明显低于对照组(均P<0.01)。结论 TCF21能够抑制肺癌细胞的裸鼠成瘤能力。

TCF21基因对人肺癌A549细胞裸鼠成瘤的影响

目的:通过观察转录因子21(TCF21)基因对人肺癌A549细胞裸鼠成瘤的影响,探讨TCF21在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用。方法:利用慢病毒感染在人肺癌A549细胞中过表达TCF21,并进行Western blotting验证。实验组、阴性对照组以及空白组细胞接种于BALB/c裸鼠左侧腋窝皮下,观察裸鼠成瘤情况,并绘制生长曲线。计算体积抑瘤率。结果:TCF21成功过表达,实验组较阴性对照组及空白组瘤体生长速度慢,肿瘤终体积分别为(620.08±263.07)vs.(1 406.77±351.14)vs.(620.08±263.07)mm3(P<0.05)。结论:TCF21基因过表达能有效抑制NSCLC裸鼠成瘤和移植瘤生长,表明TCF21在NSCLC发生、发展中起到重要作用,并有可能成为NSCLC靶向治疗的潜在新靶点。

过表达miR-302诱导结肠癌细胞促炎水平升高、线粒体氧化应激并抑制裸鼠成瘤的研究

目的探讨过表达miR-302对结肠癌(CC)细胞促炎水平、线粒体氧化应激水平及对裸鼠成瘤的影响。方法将CC细胞SW480随机分成空白对照组(Control组)、阴性对照组(miR-NC组)、过表达组(miR-302 mimic组);实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-302表达量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测促炎因子水平[白细胞介素(IL)-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)];qRT-PCR检测促炎因子mRNA表达[IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α];流式检测线粒体膜电位变化;试剂盒检测氧化应激标记物水平[丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)];Western blot法检测线粒体损伤相关蛋白表达B细胞淋巴瘤-2(Bcl2)相关X与Bcl2的比值(Bax/Bcl2)、裂解型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3与Caspase3的比值(Cleaved cas3/cas3)以及c-Myc;建立裸鼠移植瘤模型检测肿瘤组织质量;免疫组化检测caspase 3阳性表达量。结果与miR-NC组相比,miR-302 mimic组miR-302表达量、促炎因子水平(IL-6、iNOS、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA)、氧化应激标记物水平(MDA、LDH)、线粒体损伤相关蛋白表达(Bax/Bcl2、Cleaved cas3/cas3)及肿瘤组织caspase 3阳性表达量均明显升高(P<0.05);与miR-NC组相比,miR-302 mimic组线粒体膜电位、c-Myc表达量、肿瘤组织质量均降低(P<0.05)。结论过表达miR-302诱导CC细胞炎症因子水平升高、线粒体氧化应激并抑制裸鼠成瘤。

miR-24-3p靶向MMP-16对鼻咽癌5-8F细胞侵袭、迁移和裸鼠成瘤的影响

目的:探究miR-24-3p靶向MMP-16对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞侵袭、迁移和裸鼠成瘤的影响。方法:体外培养鼻咽癌5-8F细胞,并分为空白组(Control)、阴性对照组(mimic-nc)和目的基因组(miR-24-3p mimic);RT-PCR检测NPC患者肿瘤样本和miR-24 mimic转染5-8F细胞后miR-24-3p表达情况;Transwell检测细胞侵袭情况,划痕检测细胞迁移情况。生物信息学预测miR-24与MMP-16的靶向关系并荧光素实验验证;Western blot检测miR-24 mimic转染5-8F后,MMP-16的表达情况。裸鼠右前肢皮下注射转染miR-24 mimic的5-8F细胞,RT-PCR检测miR-24表达;30 d后取出肿瘤组织检测重量;免疫组化检测MMP-16含量。结果:与NPC患者肿瘤样本相比,癌旁组织miR-24-3p表达较高(P<0.05);miR-24-3p mimic组5-8F细胞侵袭能力显著降低(P<0.05);miR-24-3p mimic组5-8F细胞迁移能力显著降低(P<0.05);荧光素酶报告实验表明miR-24-3p序列上存在MMP-16结合位点;miR-24-3p mimic组MMP-16表达显著降低(P<0.05);miR-24-3p过表达可显著降低裸鼠体内肿瘤质量、MMP-16表达及MMP-16阳性率(P<0.05)。结论:miR-24-3p可靶向作用于MMP-16抑制NPC 5-8F细胞增殖、侵袭和迁移。

RNA干扰沉默SOX9对肾细胞癌786-O细胞体外增殖、凋亡及裸鼠成瘤能力的影响

目的探讨RNA干扰沉默SOX9(sex determining region Y-box 9)对肾细胞癌786-O细胞体外增殖、凋亡及裸鼠成瘤能力的影响。方法以SOX9特异性的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列为实验沉默组,非特异性的siRNA序列为对照组分别转染786-O细胞。采用CCK-8实验与平板克隆形成实验检测786-O细胞的增殖,采用Hoechst 33342细胞染色法检测786-O细胞凋亡。通过裸鼠成瘤实验检测RNA干扰沉默SOX9对动物体内成瘤能力的影响。采用免疫组织化学技术检测增殖抗原Ki-67蛋白的表达情况。结果 siRNA转染细胞后,与对照组比,SOX9沉默组OD值明显降低,细胞集落数较对照组明显减少,差异具统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,SOX9沉默组细胞凋亡明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。动物成瘤实验结果表明,SOX9沉默组瘤体体积及重量较对照组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色表明,siRNA沉默组Ki-67阳性细胞比例较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默SOX9能显著抑制肾细胞癌786-O细胞的增殖,促进其凋亡,并且能够抑制肾癌细胞在裸鼠体内的增殖。

APE-1对肝癌细胞裸鼠成瘤能力及PKM2表达的影响及机制探索

目的探索脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶-1(APE-1)对肝癌细胞裸鼠成瘤能力及丙酮酸激酶M2(PKM2)表达的影响及机制。方法基于沉默APE-1表达的肝癌Hep3B稳定细胞株,进行BALB/c-Nude裸鼠皮下成瘤。APE-1沉默组接种APE-1沉默表达的细胞,对照组接种转染空白质粒的细胞,每组10只裸鼠。8周后处死裸鼠,计算成瘤率,完整剥离肿瘤组织,称瘤体重量并计算肿瘤体积。免疫组化及Westernblot法检测肿瘤组织中APE-1及细胞增殖标志性蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、核KI-67抗原(Ki-67)表达。同样方法检测PKM2蛋白表达后,基于TCGA数据库中374例肝癌患者数据,分析APE-1与PKM2表达相关性,并比较PKM2不同表达肝癌患者中生存曲线差异。结果2组裸鼠成瘤率均为100%,APE-1沉默组的肿瘤重量及体积均小于对照组(P<0.05)。APE-1沉默组肿瘤组织中APE-1、PC-NA、Ki-67和PKM2蛋白表达均低于对照组(P<0.05)。APE-1和PKM2表达线性正相关(P<0.001),且PKM2在肝癌患者中高表达组和低表达组整体生存曲线分布比较差异有统计学意义(P<0.001),低表达组生存期更长。结论APE-1可能通过影响PKM2抑制肝癌细胞裸鼠成瘤能力,具有较强的抗肿瘤潜能。

裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性研究

目的:建立裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系并研究其生物学特性。方法:采用逐步递增长春新碱(VCR)剂量的方法培养高成瘤性人白血病细胞系K56g-n,采用细胞培养技术、透射电镜观察、流式细胞术、RT-PCR、免疫组化、染色体核型分析及体内接种等方法研究其生物学特性。结果:建立1株裸鼠高成瘤性人白血病多药耐药细胞系K562-n／VCR。与K562-n细胞比较,K562-n／VCR细胞对VCR耐药为其297.38倍,对蒽环类、鬼臼类等多种化疗药物具有交叉耐药性,bcr-abl融合基因仍为阳性,裸鼠体内成瘤性不变,但成瘤潜伏期缩短,成瘤体积明显增大。结论:裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系K562-n／VCR具有其独特的生物学特性。

胶原蛋白Ⅴ型2链对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及肿瘤生长的调控作用

目的 探究胶原蛋白Ⅴ型2链(COL5A2)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及肿瘤生长的调控作用。方法 于2022年1―3月开展研究,基于TCGA数据库分析COL5A2在胃癌组织、正常组织中的表达差异,COL5A2对胃癌分期的作用及对病人预后的价值。荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(WB)检测正常人胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞MGC-803、MKN-45、SGC7901中COL5A2的表达。慢病毒介导稳定转染shRNA-COL5A2、shRNA、NC的MKN-45细胞。克隆形成实验、细胞计数试剂盒(CCK8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞的增殖;碘化丙啶(PI)染色检测细胞周期分布;Transwell实验、伤口愈合实验检测细胞的迁移、侵袭能力;裸鼠成瘤实验检测肿瘤的生长;免疫组织化学实验检测肿瘤组织PCNA蛋白。结果 胃癌组织COL5A2相对表达量为4.74±0.45,显著高于正常组织的2.53±0.26(P<0.05),与正常组织相比,胃癌组织中COL5A2升高,与病人临床分期、预后差有关。GES-1组COL5A2相对表达量为0.25±0.04,显著低于胃癌细胞中MGC-803组0.47±0.05、MKN-45组0.72±0.08、SGC7901组0.54±0.04(P<0.05),其中MKN-45升高幅度最大。与shRNA组细胞相比,shRNACOL5A2组细胞COL5A2表达降低,细胞的克隆形成数、在48、72 h的活性、EdU阳性率、迁移和侵袭数量、划痕愈合率均降低,细胞周期阻滞G1/S期,CyclinD1和CDK4表达降低(P<0.05)。异种移植裸鼠成瘤的体积、质量均降低,肿瘤PCNA表达也降低。结论 COL5A2在胃癌中高表达,下调COL5A2抑制癌细胞增殖、迁移侵袭及肿瘤的生长。

敲低Fascin抑制宫颈癌细胞增殖及裸鼠的成瘤能力

目的研究敲低Fascin对宫颈癌细胞增殖及裸鼠成瘤能力的影响。方法 Fascin siRNA慢病毒(干扰组)和阴性对照慢病毒(阴性组)感染宫颈癌CaSki细胞,用qRT-PCR和Western blot方法检测Fascin mRNA以及蛋白表达水平评价干扰效果。MTT方法测定Fascin敲低对CaSki细胞增殖能力的影响。取对照组、阴性组、干扰组CaSki细胞接种至裸鼠皮下,建立裸鼠移植瘤模型,测定移植瘤生长体积和质量,Western blot方法检测移植瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、survivin、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、p21蛋白水平。结果 Fascin siRNA慢病毒感染后的CaSki细胞中Fascin mRNA和蛋白水平低于没有感染的CaSki细胞(P<0.05)。阴性对照慢病毒感染对CaSki细胞中Fascin mRNA和蛋白水平没有影响。敲低Fascin后的CaSki细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。干扰组CaSki接种的裸鼠移植瘤体积和质量也降低,移植瘤组织中PCNA、survivin、CDK4蛋白水平降低,p21蛋白水平升高。阴性组CaSki细胞接种对细胞增殖、裸鼠成瘤能力及移植瘤中PCNA、survivin、CDK4、p21蛋白水平没有影响。结论敲低Fascin能够抑制宫颈癌细胞生长和裸鼠成瘤能力。

TET对舌鳞癌细胞SCC9生长、运动和裸鼠体内成瘤的影响及机制研究

目的探究汉防己甲素(TET)对舌鳞癌细胞SCC9生长、运动和裸鼠体内成瘤的影响及机制。方法体外培养人舌鳞癌细胞SCC9,分为空白对照组、低剂量TET组(TET 2.5μmol/L)、中剂量TET组(TET 5μmol/L)、高剂量TET组(TET 10μmol/L),分别使用对应剂量的TET预处理。使用克隆形成实验检测细胞生长;使用流式细胞术检测细胞凋亡情况;使用Transwell检测细胞侵袭情况;使用Western blot检测Ki67、CaspasE-3、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平。选取裸鼠60只,采用0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物自然饮水喂养36周诱发建立舌鳞癌动物模型,分别使用低剂量TET 12.5 mg/(kg·d)、中剂量TET 25 mg/(kg·d)和高剂量TET 50 mg/(kg·d)灌胃处理,29 d后检测瘤子重量,免疫组化染色检测舌鳞癌组织Ki67、Caspase-3和VEGF的表达。结果与空白对照组比较,使用TET处理后舌鳞癌细胞克隆形成率、单位面积内侵袭细胞数目,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达降低,且高剂量TET组低于中剂量TET组,中剂量TET组低于低剂量TET组;与空白对照组比较,其他各组PI3K、AKT及mTOR蛋白表达水平差异无统计学意义;与空白对照组比较,使用TET处理后Caspase-3蛋白表达水平升高,且高剂量TET组高于中剂量TET组,中剂量TET组高于低剂量TET组。小鼠体内实验可以看出,与空白对照组相比,使用TET灌胃处理的裸鼠肿瘤质量、Ki67蛋白表达水平及阳性率、VEGF蛋白表达水平及阳性率降低(P<0.05),且灌胃浓度越高上述指标越低;与空白对照组比较,使用TET灌胃处理的裸鼠Caspase-3蛋白表达水平及阳性率升高(P<0.05),且灌胃浓度越高上述指标越高。结论 TET可以通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制舌鳞癌细胞的生长、运动,促进舌鳞癌细胞的凋亡,在一定浓度范围内呈浓度依赖性。

高低不同分化特性人成骨肉瘤MG-63克隆细胞株的建立

目的:建立分化程度高低不同的骨肉瘤细胞株.方法:用有限稀释法将人成骨肉瘤MG-63细胞系单克隆化,并作如下鉴定:(1)细胞增殖;(2)细胞形态学;(3)软琼脂克隆形成率;(4)染色体分析;(5)细胞周期时相分析;(6)碱性磷酸酶的活性;(7)细胞运动能力;(8)裸鼠成瘤实验.结果:共得到23个克隆,命名为MG-63-1～MG-63-23.其中的5、18号细胞株具有明显差异,18号为大核长梭形细胞,无接触抑制,克隆形成率高,体内成瘤时间短,代表低分化的骨肉瘤细胞株.5号以短梭形为主,核质比例变小,有一定的接触抑制,致瘤能力较低,为高分化的骨肉瘤细胞株.结论:通过对骨肉瘤细胞系MG-63的单克隆化,建立了具有高、低不同分化程度的两个人骨肉瘤细胞株.

B超弹性成像监测下应用吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1构建裸鼠乳腺癌肝转移模型

目的构建吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株并建立裸鼠乳腺癌肝转移模型。方法采用低浓度加量持续诱导法,诱导吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株,命名为4T1/Gem;CCK-8法测定4T1与4T1/Gem细胞的增殖抑制率,计算耐药指数;Western blot法检测细胞P-gp蛋白表达;B超引导下注射4T1/Gem细胞悬液诱导裸鼠肝脏成瘤;HE染色观察肿瘤组织病理情况,免疫组化法检测瘤组织ER、PR、HER2、Ki-67和P-gp蛋白的表达。结果经过14个月的诱导成功建立4T1/Gem细胞株,可在含40μg/m L的Gem培养液中稳定生长。4T1/Gem细胞耐药指数为4T1细胞的788.547倍。与亲代相比,4T1/Gem处于G1期和G2期的细胞增加,S期细胞减少;上调P-gp蛋白的表达。4T1/Gem细胞成功建立裸鼠乳腺癌肝转移模型,瘤组织中ER、PR、HER2蛋白阴性表达,Ki-67阳性10%和P-gp蛋白阳性表达。结论成功构建吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株并建立裸鼠乳腺癌肝转移模型,为开发治疗乳腺癌肝转移化疗耐药的药物提供实验基础。

PDTC合并泰素帝对裸鼠移植瘤抑制效应的研究

目的研究PDTC合并泰素帝对SGC-7901人胃癌细胞裸鼠移植瘤的抑制效应及对核因子-κB表达的影响,探讨其对泰素帝的化疗增敏作用。方法将接种SGC-7901人胃癌细胞成瘤的裸鼠分为PDTC组、泰素帝组、联合用药组及对照组,动态观察裸鼠移植瘤体积变化,采用实时荧光定量PCR法测定裸鼠移植瘤组织内c-IAP2及XIAP mRNA表达的改变,采用Western Blot方法检测NF-κB P65、I-κB蛋白表达的改变。结果治疗结束后所有药物治疗组瘤体体积均较对照组降低(P<0.01),联合用药组与PDTC组及泰素帝组相比,降低最为明显(P<0.01)。泰素帝组XIAP及c-IAP2 mRNA表达较对照组升高(P<0.05),而联合用药组XIAP及c-IAP2 mRNA表达较对照组、泰素帝组明显下降(P<0.01)。泰素帝处理后胞浆及胞核NF-κB P65含量增加,而PDTC联合作用后胞浆及胞核NF-κB P65含量较泰素帝组明显降低。结论泰素帝与PDTC均能抑制裸鼠移植瘤生长,并且两者具有协同作用,其机制可能与PDTC拮抗泰素帝的NF-κB激活、抑制其下游凋亡抑制蛋白基因表达有关。

甘草查尔酮A通过Akt/ERK信号通路抑制骨肉瘤增殖

目的 探究甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及相关分子机制。方法 体外培养骨肉瘤HOS和U2OS细胞,通过MTT实验检测不同浓度LCA处理不同时间对HOS和U2OS细胞增殖的影响;加入终浓度分别为对照组(含0.1%DMSO的培养液)、5、10及20μmol·L^(-1)的LCA处理细胞48 h,流式细胞术检测LCA对HOS和U2OS细胞凋亡的影响,通过Western blot检测LCA对细胞凋亡相关蛋白cleaved PARP1、Bcl-2、Bax以及Akt和ERK蛋白表达水平的影响;通过裸鼠荷瘤实验从体内水平探究LCA的抗肿瘤作用。结果 MTT实验结果表明,LCA可抑制骨肉瘤HOS和U2OS细胞的增殖,并且呈时间和剂量依赖性;流式细胞术的结果表明,LCA可引起细胞凋亡。Western blot结果显示,ERK和Akt的磷酸化被抑制,cleaved PARP1和Bax的表达量升高,Bcl-2的表达量降低。裸鼠荷瘤实验表明,注射LCA后肿瘤体积明显减小(P<0.05),肿瘤的质量明显减小(P<0.01)。结论 LCA可以抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与抑制Akt/ERK信号通路有关。

沉默MMP-10基因对人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤的影响

目的:探讨沉默基质金属蛋白酶-10(MMP-10)对人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤的影响。方法:采用携带干扰序列的si RNA慢病毒沉默A549细胞MMP-10的表达,构建沉默MMP-10表达的稳转细胞株及裸鼠移植瘤模型,比较实验组(A549-si MMP-10组)和对照组(A549-NC组)裸鼠成瘤瘤体生长速度、瘤体体积及瘤重的差异。结果:A549-si MMP-10组裸鼠成瘤瘤体生长速度明显慢于A549-NC组,瘤体体积及瘤重明显小于A549-NC组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:MMP-10基因可能与人肺腺癌的发生、发展密切相关,MMP-10基因有望成为判断人肺腺癌预后的一个新的重要指标。

ZMYND11在多形型胶质母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨ZMYND11在多形性胶质母细胞瘤(GBM)中的表达及意义。方法收集河北医科大学第二医院GBM患者术中肿瘤标本20例(肿瘤组),重度脑外伤患者正常脑组织标本20例(对照组),对上述标本进行Western blot及qRT-PCR实验,检测并比较两组ZMYND11的表达;利用ZMYND11过表达的慢病毒转染GBM的细胞系U87细胞使其ZMYND11过表达,通过CCK、Transwell及流式细胞分析检测ZMYND11对U87细胞在增殖、侵袭及凋亡方面的作用;将ZMYND11过表达的U87细胞接种至裸鼠内进行体内试验。结果肿瘤组中ZMYND11的表达量明显低于对照组(P<0.001);ZMYND11过表达可明显抑制U87细胞的增殖及侵袭并促进其凋亡,体内实验显示ZMYND11可明显抑制肿瘤的生长。结论 ZMYND11可抑制GBM的发生与发展。