裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性研究

目的:建立裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系并研究其生物学特性。方法:采用逐步递增长春新碱(VCR)剂量的方法培养高成瘤性人白血病细胞系K56g-n,采用细胞培养技术、透射电镜观察、流式细胞术、RT-PCR、免疫组化、染色体核型分析及体内接种等方法研究其生物学特性。结果:建立1株裸鼠高成瘤性人白血病多药耐药细胞系K562-n／VCR。与K562-n细胞比较,K562-n／VCR细胞对VCR耐药为其297.38倍,对蒽环类、鬼臼类等多种化疗药物具有交叉耐药性,bcr-abl融合基因仍为阳性,裸鼠体内成瘤性不变,但成瘤潜伏期缩短,成瘤体积明显增大。结论:裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系K562-n／VCR具有其独特的生物学特性。

裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系基因表达谱变化分析

目的 通过对差异表达的基因进行聚类分析,研究裸鼠高成瘤性的多药耐药白血病细胞系K5 6 2 n/VCR的耐药机制。方法 采用含1 2 80 0余条基因的基因芯片技术,对K5 6 2 n/VCR和K5 6 2 n细胞进行表达谱差异的研究,分析基因表达特征,从基因表达水平探讨耐药机制的发生。结果 在1 2 80 0条基因中,K5 6 2 n和K5 6 2 n/VCR细胞在3次实验中均有差异表达的基因有5 8条,其中K5 6 2 n细胞表达上调的有5 7条,表达下调的有1条。在这5 8条基因中,有4 6条已在GeneBank中登录,1 2条为未知功能基因。已知功能的37条基因可分成1 0类,即耐药相关基因、细胞周期蛋白、信号传导基因、转录因子基因、代谢相关基因、细胞骨架基因、凋亡相关基因、转录后加工基因、热休克蛋白基因及癌基因。结论 K5 6 2 n/VCR的耐药机制是复杂的,涉及多个基因的表达变化。除已知的耐药相关基因外,部分基因表达改变符合多药耐药细胞的生物学行为,部分基因高度怀疑在耐药的发生中具有重要作用,但确切的机理尚待进一步深入研究。

人脐带间充质干细胞的安全性评价

干细胞治疗作为某些难治性疾病的新型治疗手段,在组织修复、自身免疫疾病和退行性疾病治疗中具有重要的临床价值。本研究以裸鼠为动物模型,通过裸鼠皮下成瘤、克隆形成和端粒酶活性等试验,评估人脐带间充质干细胞的安全性,为干细胞用于临床治疗的安全性提供参考。裸鼠成瘤性试验结果显示,阴性对照组和试验组成瘤数均为0,阳性对照组成瘤数为12。克隆形成试验结果显示,阴性对照组和试验组无克隆形成,阳性对照组有克隆形成。端粒酶活性测定结果显示,阴性对照组端粒酶相对活性为0.01,阳性对照组端粒酶相对活性为4.33,试验组P6代细胞端粒酶相对活性为1.70。因此,本研究的评估结果显示,人脐带间充质干细胞在裸鼠中不致瘤,克隆形成试验结果为阴性,端粒酶活性测定结果正常,具有良好的遗传稳定性。人脐带间充质干细胞在本试验中展现了良好的安全性,具有较好的临床应用价值。

紫龙金抑制人乳腺癌细胞系MCF-7生长的体内外实验研究

目的探讨复方中药紫龙金在体内和体外对MCF-7人乳腺癌细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法 (1)台盼蓝拒染法和双层软琼脂克隆形成法检测紫龙金对MCF-7细胞增殖活性和克隆形成的影响;(2)Westernblot法检测紫龙金对p-ERK1/2蛋白表达的影响;(3)17-β-雌二醇缓释药片包埋法构建MCF-7细胞的BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,并检测紫龙金(实验组灌胃生药20g紫龙金/kg体重)对肿瘤生长的抑制效应。结果 (1)紫龙金降低MCF-7细胞的存活率,并呈剂量和时间依赖性;(2)紫龙金组MCF-7细胞克隆形成率显著低于对照组,且随着浓度的增加,克隆形成能力明显降低[0.75、1.5、3.0、6.0mg/mL紫龙金组细胞克隆形成抑制率分别为(12.66±1.54)%、(88.83±2.13)%、100%、100%],克隆直径也明显减小或无克隆形成;(3)紫龙金下调p-ERK1/2蛋白的表达;(4)实验组裸鼠与对照组裸鼠4周后移植瘤的平均体积分别为(0.73±0.58)cm3、(1.36±0.64)cm3,平均瘤重分别为(1.02±0.25)g、(1.66±0.09)g,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),实验组抑瘤率为38.55%。结论紫龙金可显著抑制MCF-7细胞的体内和体外增殖、转化和致瘤性,这可能与p-ERK1/2蛋白的表达下调有关。