西伯利亚鲟致病性嗜水气单胞菌外膜蛋白及其抗原性分析

采用十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)法提取西伯利亚鲟嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)外膜蛋白,电泳显示所提取的主要外膜蛋白分子量为26～120 kDa;为比较该菌株与气单胞菌菌属其他细菌外膜蛋白组分及抗原性异同,以致病性豚鼠气单胞菌(A.caviae)、温和气单胞菌(A.sobria)和无致病力的嗜水气单胞菌为对照,电泳图谱显示4种气单胞菌外膜蛋白的分子量主要集中在26～120 kDa之间;利用抗西伯利亚鲟嗜水气单胞菌血清的免疫印迹试验表明该菌株外膜蛋白中分子量为75 kDa、52 kDa、43 kDa、40 kDa、34 kDa、28 kDa的蛋白条带呈现阳性反应,其他3种气单胞菌外膜蛋白中均有与该抗血清反应的条带,且分子量为28 kDa、34 kDa的反应条带为4株菌共有;43 kDa与75 kDa反应条带为部分菌株共有。为进一步筛选和研究致病性气单胞菌的共同保护抗原提供参考。

西伯利亚鲟源嗜水气单胞菌致病菌的分离及其全菌苗的免疫效果

从患细菌性败血症的西伯利亚鲟(Acipenser baerii)的体内分离到一株致病菌株X1,其对西伯利亚鲟的半数致死浓度(LC50)为5.62×105cfu/ml,具有较强毒力;经ATB细菌鉴定仪生理生化鉴定和16S rDNA序列分析,菌株X1为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila);其系统发育分析表明,菌株X1与嗜水气单胞菌ATCC35654(登录号:X74676.1)的亲缘关系最近,其同源性为99%。用0.30%福尔马林灭活,将菌株X1制成灭活全菌苗,对西伯利亚鲟进行注射免疫。研究结果表明,嗜水气单胞菌X1全菌苗能够明显提高西伯利亚鲟的血清抗体水平及总蛋白、免疫球蛋白、溶菌酶含量,而且在嗜水气单胞菌X1全菌苗中加入弗氏不完全佐剂,有利于进一步增强西伯利亚鲟血清抗体水平及总蛋白、免疫球蛋白、溶菌酶含量。此外,嗜水气单胞菌X1全菌苗对西伯利亚鲟抗嗜水气单胞菌X1人工感染也具有较好的免疫保护作用,其对西伯利亚鲟的免疫保护率为50%,而且在嗜水气单胞菌X1全菌苗中加入弗氏不完全佐剂,嗜水气单胞菌X1全菌苗对西伯利亚鲟抗嗜水气单胞菌X1人工感染的免疫保护作用更好,其对西伯利亚鲟的免疫保护率为70%。因此,将嗜水气单胞菌X1全菌苗用于西伯利亚鲟细菌性败血症的防治具有广阔的发展前景。

西伯利亚鲟致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定

为分离鉴定引起四川省绵阳市水箱养殖的西伯利亚鲟患病及死亡的病原菌,本研究从患病西伯利亚鲟脾脏组织分离纯化得到一株病原菌,命名为XYCY-1。对其进行了形态特征、理化特性等生物学表型检验、感染回归试验、16S rRNA基因进化分析、病理观察及药敏试验。结果显示,该菌属于嗜水气单胞菌;人工感染试验显示该分离菌对西伯利亚鲟鱼具有致病性,实验鱼发病和死亡症状与自然发病鱼基本相同。表明嗜水气单胞菌是此次鲟鱼发病的病原;分离菌株对头孢西丁、卡那霉素、庆大霉素、强力霉素、氧氟沙星、恩诺沙星、新霉素7种药物敏感,对氨苄青霉素、四环素、洛美沙星等13种药物耐药。本研究对四川绵阳地区鲟鱼发病流行的病因作出了准确诊断,为该地区鱼病预防和合理用药提供了依据。

西伯利亚鲟源嗜水气单胞菌研究进展

西伯利亚鲟（Acipenser baerii）隶属于鲟科、（Acipenserda）鲟属，是现存26种鲟类中的一种，主要分布于俄罗斯西部的颚毕河至东部的科雷马河之间的西伯利亚各河流之中。在新兴的鲟鱼养殖业中。

西伯利亚鲟败血症病理学观察与病原学研究

针对西伯利亚鲟发生败血症的情况,进行了流行病学调查、病理学观察和病原学研究。病鱼主要特征为严重出血性败血症,发病率20%、死亡率15%。主要症状为:鱼体消瘦,嘴肿、四周充血,肛门红肿,鱼体两侧体表、腹部、口腔及下颌充血,尤以背鳍、胸鳍、腹鳍及尾鳍基部充血显著,体表溃疡,有的伴有水霉着生。在对病鱼进行流行病学调查和病理学观察的基础上,从患病鱼中分离得到一种优势细菌,经感染性试验证明对健康西伯利亚鲟具有较强的致病性,且症状与自然发病鲟的症状相同。通过形态学、溶血性、蛋白酶检测、生理生化试验和16SrRNA基因序列分析,证实引起西伯利亚鲟发生败血症的病原为嗜水气单胞菌。药物敏感性试验结果显示,分离病原菌对头胞噻肟钠、硫酸卡那霉素、庆大霉素、强力霉素、氟苯尼考、黏杆菌素、乳酸诺氟沙星、盐酸环丙沙星和恩诺沙星等药物高度敏感,对阿莫西林等药物具有抗性。本研究结果对西伯利亚鲟病害防治和健康养殖具有指导意义。

西伯利亚鲟细菌性败血症病原菌的分离鉴定和药敏试验

从患典型细菌性败血症的西伯利亚鲟的肝、肾中分离到病原菌,经人工感染试验证明对健康鲟具有较强致病性,死亡率可达100%,而且症状与自然发病鲟相同。通过形态学、生理生化试验,证实引起西比利亚鲟败血症的病原菌为嗜水气单胞菌。药物敏感性试验结果显示:分离到的病原菌对头孢噻吩、头孢唑啉、头孢克洛、庆大霉素、硫酸链霉素、氧氟沙星、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星、磺胺嘧啶和哌拉西林都敏感,而对氨苄西林和四环素不敏感。

黄芪多糖对杂交鲟用嗜水气单胞菌灭活疫苗的影响

【目的】探究黄芪多糖对嗜水气单胞菌灭活疫苗在杂交鲟鱼上的应用效果,以期发掘黄芪多糖用作疫苗佐剂的应用潜力。【方法】选取健康杂交鲟鱼140尾,随机分为4组(对照组、疫苗组、黄芪多糖组和联用组)并做相应免疫处理,分别于第0、7、14、21和28天采集血液,进行抗氧化指标(超氧化物歧化酶(SOD))和免疫相关指标(溶菌酶(LYZ)、酸性磷酸酶(ACP)、免疫球蛋白M(IgM)及补体C3(C3))检测;免疫结束时进行攻毒试验,观察鲟鱼死亡情况及其免疫组织病理变化。【结果】第7、14、21和28天时,与对照组相比,联用组和疫苗组杂交鲟鱼血清SOD、LYZ、ACP活性及IgM、C3含量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),黄芪多糖组SOD、ACP活性及IgM、C3含量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),LYZ活性无显著差异(P>0.05);与疫苗组相比,黄芪多糖组血清LYZ、ACP活性均显著降低(P<0.05),SOD活性及IgM、C3含量均无显著差异(P>0.05);与黄芪多糖组或疫苗组相比,联用组血清SOD、LYZ活性及ACP含量均显著增加(P<0.05),IgM含量显著降低(P<0.05),C3含量无显著差异(P>0.05)。黄芪多糖与灭活疫苗联用能有效增强鲟鱼的抗病力,相对免疫保护率达100%,对鲟鱼肝脏、脾脏和肠道组织无明显病理损伤。【结论】黄芪多糖与杂交鲟用嗜水气单胞菌灭活疫苗联用时能有效提升疫苗的抗体效价,增强该灭活疫苗接种后的保护力,从而诱导杂交鲟鱼产生免疫应答,提高自身抗病力,为嗜水气单胞菌引起的鱼类疾病防控提供了理论参考。

鲟源致病性嗜水气单胞菌X1的分离鉴定与药敏特性研究

从患细菌性败血症的西伯利亚鲟(Acipenser baerii)的体内分离到一株致病菌株X1,其对西伯利亚鲟的半数致死浓度(LC50)为5.62×105CFU/mL,具有较强毒力;菌株X1为革兰氏阴性杆菌,菌体大小为1.0μm～1.2μm×2.1μm～2.4μm,周生侧鞭毛,在兔血琼脂平板上能形成明显的β-溶血圈,经ATB细菌鉴定仪鉴定和16SrDNA序列分析,菌株X1为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)(登录号:EU669667);其系统发育分析表明,菌株X1与嗜水气单胞菌ATCC35654(登录号:X74676.1)的亲缘关系最近,其同源性为99%。此外,菌株X1对先锋必、左氟沙星等2种药物高度敏感,对妥布霉素、氟哌酸、舒普深、卡那霉素、庆大霉素、复达欣、万古霉素、新霉素、多粘菌素B、洛美沙星等10种药物中度敏感。

杂交鲟嗜水气单胞菌病的组织病理学研究

对自然感染和人工感染嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila的杂交鲟(达氏鳇Huso dauricus Georgi♀×史氏鲟Acipenser schrencki Brandt♂)的组织病理和超微病理变化进行了研究。结果表明:患嗜水气单胞菌病的杂交鲟体表黏液稍增多,鳍基部和腹部轻微发红,鳃丝腐烂、色浅或呈紫黑色,腹腔壁及内脏器官可见出血斑;肝、肾、脾等内脏器官组织病理变化主要表现为循环障碍,微血管扩张,广泛出现充血、出血或溶血;实质细胞经变性发展到坏死,严重时出现弥散性坏死灶。电镜观察显示,病鲟肝、脾、肾组织和细胞内感染大量短杆状细菌,细胞内线粒体普遍发生肿胀、膨大,严重时其嵴状结构消失或溶解。

鲟源嗜水气单胞菌感染源分析

鲟是世界最古老的鱼类之一,其个体大,全身利用率极高.作为大型淡水经济鱼类,鲟鱼养殖在全世界得到迅速发展,中国自从1992年开始鲟鱼养殖,到目前为止鲟养殖量早已经居世界首位,鲟鱼养殖发展的速度令人叹为观止.但是随着鲟鱼养殖业的快速发展,鲟鱼细菌性疾病的频发,并因此引起巨大经济损失,成为了鲟鱼养殖发展的瓶颈.鲟鱼细菌性疾病主要包括革兰氏阴性菌嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）、豚鼠气单胞菌（Aeromonas carvia）和类志贺邻单胞菌（Plesimonas shigelloides）等以及革兰氏阳性菌链球菌感染鲟鱼引起的细菌性疾病.

鲟鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定及防治的初步研究

嗜水气单胞菌在自然界中分布广泛,尤其是在水生环境中,一般可以和其他生物共存,但其致病性却一直未引起重视。随着近些年来,很多由嗜水气单胞菌引起的疾病频繁发生,包括食物中毒、介水传染病、感染性腹泻、败血症等,其致病性已经受到了公众的广泛关注。该文就以分离的嗜水气单胞菌为例,通过药敏试验的研究,初步探究其防治方案。

鲟源嗜水气单胞菌感染源分析

鲟是世界最古老的鱼类之一,其个体大,全身利用率高,作为大型淡水经济鱼类,鲟鱼养殖在全世界得到迅速发展,中国自从1992年开始鲟鱼养殖,到目前为止鲟养殖量早已经已经居世界首位,鲟鱼养殖规模急剧发展。但是随着鲟鱼养殖业的快速发展,鲟鱼细菌性疾病也开始频发,并因此引起巨大经济损失,成为了养殖业发展的一大瓶颈。

鲟鱼嗜水气单胞菌败血症的研究

鲟是一种古老的大型珍稀鱼类,不仅有很高的科研价值,而且食用价值好,全身除了骨板不能食用外,其余部分的营养价值都极高,尤其是它的卵可制成有＂黑色黄金＂之称的鲟鱼子酱,具有非常高的经济价值。目前国内已有多个省市对鲟进行人工养殖。

人工感染西伯利亚鲟体内嗜水气单胞菌分布的免疫组织化学检测

将西伯利亚鲟分别经腹腔注射接种嗜水气单胞菌和浸泡在菌浓度为1×107CFU/mL的水体中,腹腔注射组分别于接种后第12、24和36h剖杀,浸泡组分别于浸泡第24、48和72h剖杀,采用免疫组织化学方法检测嗜水气单胞菌在西伯利亚鲟体内的分布。结果显示,注射组在第12h阳性信号首先出现在脾、肾、肝、心肌中;第24h在肠道、肌肉、胃及性腺中出现阳性细胞。浸泡组第24h阳性信号首先出现在脾、肾、肝、心肌中;第48h在肠道、肌肉、胃及性腺中存在阳性细胞。阳性信号主要位于感染细胞的胞质中,偶尔出现在组织间质中。试验证实,嗜水气单胞菌首先侵袭的是脾、肾、肝、心肌、肠道等组织,然后是肌肉和性腺,而脑组织中一直未检测到阳性细胞。

41种中草药对3种鲟源病原菌的体外抑菌效果

采用平板打孔法在观察了弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)等3种鲟源病原菌对41种中草药敏感性的基础上,进一步采用二倍稀释法测定了具有良好抑菌活性的中草药对3种病原菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。实验结果表明,3种病原菌对乌梅、石榴皮、地榆、杞子等均高度敏感,对杜仲、柴胡、丹参、熟地黄等均中度敏感,对麦冬、当归、胖大海、玉竹均不敏感。此外,乌梅、石榴皮、地榆、杞子对3种病原菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为7.81 mg/mL和15.625 mg/mL、15.625 mg/mL和31.25 mg/mL、15.625 mg/mL和31.25 mg/mL以及15.625 mg/mL和31.25 mg/mL,而杜仲、柴胡、丹参、熟地黄等中度敏感中草药对3种病原菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均分别高于31.25 mg/mL和62.5 mg/mL。

鲟源病原菌HD0824的分离鉴定及药敏特性研究

【目的】对患病西伯利亚鲟进行病原分离、鉴定及药敏实验,为鲟嗜水气单胞菌病的防控提供参考。【方法】从患病的西伯利亚鲟(Acipenser baerii)的体内分离到一株致病菌株HD0824,该菌株具有高致病性,能使小白鼠24 h内死亡。经过人工感染,感染用鱼出现与自然发病相同的症状,表明菌株HD0824为鲟鱼此病病原。【结果】菌株HD0824为革兰氏阴性杆,无芽孢和荚膜,在兔血平板上能形成明显的β-溶血,蛋白酶活性很强。经过生理生化鉴定及16S r DNA序列分析,菌株HD0824为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),同源性达99%。此外,分离菌株HD0824对庆大霉素、强力霉素、氯霉素、丁胺卡那霉素、氟苯尼考、头孢噻肟、阿奇霉素及左氧氟沙星8种药物高度敏感,对新霉素中度敏感。【结论】分离菌株HD0824是西伯利亚鲟病原菌,养殖时可选用庆大霉素及氟苯尼考等药物进行防控。

杂交鲟体表溃疡病的病原及药敏研究

经常规细菌分离,从自然发生体表溃疡病的杂交鲟（西伯利亚鲟Acipenser baerii♂×施氏鲟A.schrenckii♀）中分离到1株病原菌K070401。该菌株可在TSA平板上生长,菌落半透明,1.5~2.0mm大小,边缘光滑,中央凸起。该菌革兰氏染色阴性,显微镜下可见其呈短杆状,两头钝圆,大多数细菌单独存在,少数细菌成对甚至成链存在。该菌葡萄糖氧化发酵阳性,氧化酶检测阳性,0%NaCl生长,脂酶阳性。能利用甘露醇,具运动性,能发酵麦芽糖,不产生H2S,葡萄糖产酸阳性,葡萄糖产气阳性,精氨酸双水解酶阳性,DNA酶阳性,鸟氨酸脱羧阴性,还原硝酸盐。该菌对罗美沙星、磺胺异噁唑、氯霉素、阿奇霉素敏感,对克拉霉素、强力霉素、链霉素、美满霉素较敏感,对氨苄青霉素、古霉素、阿莫西林不敏感。应用细菌通用PCR引物,扩增出K070401菌株的16S rDNA的互补DNA片段,该片段大小为1591bp。将获得的序列在RDP数据库进行在线Classifer。结果表明,该菌属于气单胞菌属的细菌,再将获得的序列与GenBank中已报道的的嗜水气单胞菌16S rDNA序列采用DNAstar软件进行多序列比对分析和构建系统发育树。结果证实,K070401分离株与其他嗜水气单胞菌形成1个簇群,同源性高达为99.2%以上,故确定该菌为嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophilia）。

俄罗斯鲟β-防御素基因的克隆及表达分析

β-防御素是一类富含半胱氨酸的阳离子抗菌肽,在脊椎动物免疫系统中发挥重要作用。本研究基于转录组Solexa测序结果,利用PCR和荧光定量PCR技术对俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti)β-防御素基因进行了克隆和表达模式分析。结果显示,俄罗斯鲟β-防御素c DNA片段长度为333 bp,包含开放阅读框(Open reading frame,ORF)213 bp,推测编码71个氨基酸;SMART分析显示,该基因包含23个氨基酸的信号肽、1个防御素-β-2结构域和6个保守的半胱氨酸残基,此结构与其他物种极为相似,在进化中比较保守。同源比对发现,俄罗斯鲟β-防御素与鱼类的相似度最高,为54%~60%。β-防御素基因在健康俄罗斯鲟11种组织(肝、肠、脾、头肾、胃、鳃、血液、脑、皮肤、肌肉和性腺)中均有表达,其中,在性腺和皮肤中表达量最高;病原菌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染后可强烈影响β-防御素基因在6种免疫组织(肝、肠、脾、头肾、血液和鳃)中的时空表达。其中,在头肾中的上调表达最明显,在感染后72 h为表达峰值,达到0 h表达量的700倍。在脾、血液和肠中均有几倍至十几倍的上调,而在肝中整体呈现下调表达趋势。研究表明,β-防御素基因参与了俄罗斯鲟的免疫应答过程,本结果为俄罗斯鲟的免疫调控和病害防治研究奠定了基础。