不同西方许旺酵母接种量对复烤后烟叶增香提质的影响研究

为了使复烤烟叶增香提质,试验选用从烟叶表面筛选出的产香菌:西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)对兴义C3F复烤后烟叶进行固态发酵,并对烟叶的常规化学成分、香味物质和石油醚提取物含量进行检测,最后将发酵后的烟叶切丝后进行卷制成卷烟并进行评吸实验.研究结果表明:①经菌种发酵后,接种量为6.9%和接种量为13.8%的烟叶糖碱比均升高,但钾氯比无显著性变化;②接种量为6.9%的处理中共检测出香味物质58种,与另外两组相比其中有50种香味物质含量较高,包括苯甲醇、苯乙醇、芳樟醇、香叶基香叶醇、螺岩兰草酮、苯乙醛、α-大马酮、巨豆三烯酮、橙花基丙酮、3-羟基-β-二氢大马酮、茄酮、苯甲醛、二氢猕猴桃内酯、亚麻酸甲酯、亚油酸甲酯、硬脂酸甲酯、2-乙酰基吡咯等,与对照相比新植二烯含量增加了54.6μg/g;③经菌种发酵后,烟叶石油醚提取物含量没有显著性变化.④感官实验表明,接种量为6.9%的评吸结果最好,这和香味成分的结果一致.综上所述,西方许旺酵母对烟叶有一定的增香提质作用,接种量为6.9%时处理效果较好.

西方许旺酵母降解β-胡萝卜素生成香味产物的研究

实验对西方许旺酵母发酵β-胡萝卜素,致使碳键发生双键氧化断裂,生成香味产物进行了研究。通过GC-MS分析,分别生成2,2,6-三甲基环己酮、β-环柠檬醛、二氢猕猴桃内酯和β-紫罗兰酮等香气物质。西方许旺酵母在最适条件下转化β-胡萝卜素生成香气物质(以β-紫罗兰酮为目标产物),在发酵第8天时达到最高峰,转化产物得率达到1.65 mg/L。

西方许旺酵母菌及其双加氧酶在烟草增香中的应用

采用响应面试验研究了西方许旺酵母菌(Schwanniomyces occidentalis)及其双加氧酶在烟草增香中的应用情况。结果表明,西方许旺酵母发酵烟叶生成香气物质的最优条件为温度27.8℃,水分含量52%,发酵时间7 d,此时烟叶中β-紫罗兰酮含量为2.03μg/g。生物转化类胡萝卜素生成香气物质的双加氧酶添加量为2.0%,35℃条件下,酶解15 h,烟叶中β-紫罗兰酮含量增加31.5%。处理后的烟叶香气质和香气量均有所增加,感官质量明显改善。

西方许旺酵母α-淀粉酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的分泌表达

目的:将带有完整自身信号肽的西方许旺酵母α-淀粉酶基因克隆到大肠杆菌中,验证西方许旺酵母α-淀粉酶基因能否在大肠杆菌中有效表达。方法:利用PCR扩增带有完整自身信号肽的西方许旺酵母α-淀粉酶基因,并将其接入Zeocin启动子片段,构建了重组表达载体GapZA,转化大肠杆菌,验证得到的阳性克隆菌株是否表达α-淀粉酶活性。结果:阳性克隆菌株均有α-淀粉酶活性。结论:证明了许旺酵母α-淀粉酶能在自身信号肽引导下分泌到大肠杆菌细胞外,并且表现出明显酶活。

西方许旺酵母及其工业应用概述

含淀粉的原材料价格低廉、来源广泛,而淀粉的分解是啤酒酿造和饮用酒生产等重要工业过程的基础。西方许旺酵母最初由于其出色的淀粉降解能力而受到广泛关注。文章综述了目前国内外学者对西方许旺酵母的研究现状,重点介绍了西方许旺酵母的生理生化特性及其在生物技术和工业生产中的应用。

西方许旺酵母α-淀粉酶的基因克隆及其在啤酒酵母中的高效表达与分泌

以E .coli/yeast穿梭质粒YCEp1为载体构建许旺酵母部分基因组文库 ,在大肠杆菌中扩增后提取混合质粒DNA ,经电转化非缺陷标志啤酒酵母AS .2 1 36 4 ,在YPDS平板 ( 1 %葡萄糖和 1 %可溶性淀粉 )上用淀粉水解活力筛选含水解淀粉能力的阳性转化子 .从阳性转化子中分离融合质粒证实含 5 0kb的插入片段 .用α 淀粉酶基因两端序列设计的引物PCR扩增及扩增片段序列分析证实该片段中含有α 淀粉酶全部编码序列 .该片段能在啤酒酵母中表达α 淀粉酶 ,说明该片段带有α 淀粉酶基因 5′ 上游序列和 3′ 下游序列 .该转化子在YPDS平板 30℃培养 48h形成清晰可见的水解淀粉圈 .发酵液 (YPDS) 48℃可获得 740～ 780mU/mL产酶活力和高的生物量 .PAGE证实发酵液有α 淀粉酶蛋白带 ,占胞外总蛋白含量的 1 2 %以上 .说明在载体YCEp1上许旺酵母α 淀粉酶基因自身启动子 ( promoter)和终止子(terminator)在啤酒酵母AS .2 .1 36 4中同样被识别且高效表达 .有工业应用前景的水解淀粉酵母菌株构建成功 .

降解β-胡萝卜素双加氧酶的分离纯化及其部分酶学性质

研究了西方许旺酵母菌发酵产生双加氧酶的分离纯化及其酶学特性,并利用该酶降解β-胡萝卜素生成香味物质。通过摇瓶发酵,并对粗酶液进行硫酸铵梯度沉淀、半透膜透析、DEAE-Sepharose离子交换和Sephadax G-100凝胶过滤等处理,得到转化β-胡萝卜素生成香气物质的双加氧酶。实验结果表明,西方许旺酵母菌发酵产生的双加氧酶被纯化了36.43倍,酶活力回收率为21.0%,分子量为55.0 ku。酶的最适温度为40℃,最适p H为8.5;金属离子对降解β-胡萝卜素双加氧酶活力的影响为:Fe^(2+)>Mg^(2+)>K^+>Na^+>Mn^(2+)>Cu^(2+)>Ca^(2+)>Zn^(2+)>Ag^+。Fe^(2+)和Mg^(2+)能明显增强酶活力,而Zn^(2+)和Ag^+能抑制酶活力;SDS和胃酶抑素对酶活力有显著抑制作用。降解β-胡萝卜素双加氧酶的K_m=8.24×10^(-4)mol/L,V_(max)=2.16×10^(-4)mol/(min·mg)。