西洛酰胺对绵羊卵母细胞核成熟及后期胚胎发育的影响

本实验研究不同浓度西洛酰胺(Cilostamide)对绵羊卵母细胞核成熟的抑制效果,并探讨FSH对Cilostamide抑制效果的影响,以及延迟卵母细胞核成熟对随后胚胎发育能力的影响,旨在探索提高绵羊体外胚胎发育能力的新方法。结果表明:5μmol/L的Cilostamide为较合适的添加浓度,使卵母细胞核成熟延迟约4 h;FSH与Cilostamide对抑制核成熟起到协同作用;5μmol/L Cilostamide处理可使绵羊卵母细胞孤雌激活后囊胚率达到40.4%,显著高于对照组29.0%的囊胚率(P<0.05)。

绵羊卵母细胞不同cAMP水平模型的构建

环腺苷酸(cAMP)是维持哺乳动物卵母细胞减数分裂停滞的关键分子.本试验利用ELISA和地衣红染色技术,检测了西洛酰胺(Cilostamide)与乌药醚内酯(Linderane)对绵羊卵母细胞和卵丘细胞内cAMP水平以及生发泡破裂(GVBD)的影响.结果显示:体外培养3h后,10μmol/L Cilostamide和5μmol/L Linderane分别能显著提升和抑制卵母细胞而非卵丘细胞内的cAMP水平;体外培养6h后,Cilostamide组卵母细胞GVBD率(14.91%)显著低于对照组(34.45%)与联合添加组(33.47%)(P<0.05),而Linderane组与其相反,表明不同cAMP水平卵母细胞模型构建成功.

调节环磷酸腺苷对绵羊卵母细胞减数分裂恢复的影响

旨在探讨西洛酰胺(cilostamide)和雌二醇(E2)对绵羊卵母细胞和卵丘细胞中的环磷酸腺苷(cAMP)水平及卵母细胞减数分裂恢复的影响。首先在常规体外成熟体系中添加磷酸二酯酶3抑制剂西洛酰胺,探讨了其对绵羊卵母与卵丘细胞中cAMP水平调控的时间效应;随后在双相体外成熟系统中添加西洛酰胺或不同浓度的E2,利用竞争ELISA检测与DAPI染色技术,探讨了西洛酰胺和E2单独添加或联合添加对卵母和卵丘细胞内cAMP水平及卵母细胞核成熟的影响。结果显示:在常规体外成熟培养体系中,与对照组相比,培养30 min与2 h时,西洛酰胺组可显著提高卵母细胞内cAMP水平(P<0.05);在双相体外成熟系统中,与对照组相比,西洛酰胺组、0.5 ng/mL E2组和联合添加组(西洛酰胺+0.5 ng/mL E2)均可显著提升卵母细胞内cAMP水平,并且显著阻滞卵母细胞减数分裂恢复(P<0.05),同时联合添加组显示出最优的作用效果。综上,研究表明西洛酰胺与较低水平E2(0.5 ng/mL E2),具有改善绵羊卵母细胞体外成熟效率的作用,且联合添加具有明显叠加效应。