西米特酸诱导人急性白血病HL-60细胞凋亡作用及其机制初探

背景与目的:西米特酸是从我国南海分布广泛的黄色海绵Rhabdastrella sp.中发现的一种异臭椿三萜类化合物。前期研究表明,西米特酸可抑制多种肿瘤细胞的增殖且较安全。本研究探讨西米特酸对人急性白血病细胞HL-60凋亡的影响,及其可能的促凋亡机制。方法:MTT法检测不同浓度西米特酸作用后HL-60细胞的增殖情况,琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带,荧光显微镜观察细胞形态学变化。Westernblot法检测西米特酸作用后,细胞中Caspase-3、Poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)、Bcl-2、Bax、P73蛋白变化;基因芯片检测凋亡相关基因的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对一些凋亡相关基因进行验证。结果:不同浓度西米特酸作用72h可抑制HL-60细胞的增殖,IC50为(0.64±0.21)μg/ml。1μg/ml西米特酸处理36h后,HL-60细胞出现核染色质浓集和DNA梯形条带,并且Caspase-3和PARP出现明显的断裂片段。凋亡相关基因芯片检测发现,P73、JunD、TNFAIP3、GADD45A、PPP1R15A等基因表达增强,MAP2K5、IGF2R等基因表达降低。RT-PCR法检测发现P73、JunD表达上调,MAP2K5、IGF2R表达下调。Westernblot法进一步检测发现P73蛋白表达增高,而Bcl-2和Bax蛋白无明显改变。结论:西米特酸可诱导HL-60细胞凋亡,其机制可能与P73、JunD等基因表达上调和MAP2K5、IGF2R等基因表达下调有关。