小西葫芦花叶病毒(ZYMV)抗血清制备及检测技术研究

从小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)免疫的母鸡蛋卵黄和兔抗血清中分别提取免疫球蛋白IgY和IgG,用多种血清学方法进行检测。结果表明,免疫鸡和兔25d后,鸡蛋卵黄IgY和兔抗血清的效价分别达到1/64和1/512。在琼脂扩散试验中,当抗体稀释28倍时,与抗原反应无明显沉淀线。在胶乳凝集试验中,抗体稀释210倍时,与抗原反应无明显凝集物。ELISA法以辣根过氧化酶标记抗体IgY和IgG,用双抗夹心法成功地检测出了ZYMV,当抗体稀释106倍时,与抗原反应仍呈阳性。免疫电镜方法检测ZYMV,较一般血清学方法可多捕捉50倍的病毒颗粒。

侵染南瓜的小西葫芦黄化花叶病毒的分离与鉴定

1999年秋在杭州一株表现典型黄化花叶的南瓜(Cucuribita moschata)上分离获得一株线状病毒HZ00s1.该病毒分离物在葫芦科作物(Cucuribitaceae)上引起系统症状.经寄主反应测定、病毒形态学和寄主组织病变观察,初步确定该病毒为小西葫芦黄化花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV).对ZYMV杭州分离物(HZ00s1)的外壳蛋白序列及3’端非编码区进行了克隆及序列测定,并与ZYMV Conneticut分离物、Florida分离物、California分离物以及WMV2 Tonga分离物进行了同源性分析.结果显示:HZ00s1分离物与其它3种ZYMV分离物CP基因核酸序列同源性为93％～94％,而与WMV2 Tonga分离物的同源性仅为67％,来自美国的3种ZYMV分离物之间的同源性高达95％～99％.HZ00s1分离物与其它3个ZYMV分离物CP氨基酸序列同源性在95％～98％之间.因此确定在杭州地区葫芦科作物上有ZYMV的发生.

桃蚜可高效率地传播小西葫芦黄化花叶病毒新疆株

研究了桃蚜传播小西葫芦黄化花叶病毒新疆株的规律 ,结果表明 ,无毒蚜虫能够获毒的最短取食时间为 30s,获毒率随取食时间的延长而提高 ,取食时间为 70s以上时 ,获毒率达10 0 % ;带毒蚜虫传毒的最短取食时间为 0 .2 5h ,当取食时间超过最短传毒时间时 ,传毒率随取食时间的增加而升高 ,取食时间达 2h以上时 ,传毒率达 10 0 % ;带毒蚜虫能够传毒的最少头数为 1头 ,传毒率随单株植物带毒蚜虫数目的增加而升高 ,单株虫量达 15头以上时 ,传毒率达 10 0 % .

新疆小西葫芦黄化花叶病毒的分子鉴定与序列分析

在新疆石河子地区采集具有黄化、花叶和疱斑等症状的多种葫芦科作物,分别提取总RNA,利用小西葫芦黄化花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)特异性引物进行RT-PCR扩增,其中来自黄瓜、甜瓜和丝瓜的模板RNA上可以得到1185bp片段。将扩增得到的片段克隆到pMD18-T上,序列分析结果表明:该片段含有1185个核苷酸,包含完整CP基因。与ZYMV Florida分离物、California、韩国KR-PA分离物、新加坡S及中国北京CH-BJ等GenBank报道的7个不同地域、不同种寄主植物上的分离物序列进行同源性分析的结果显示:ZYMV新疆分离物的CP基因核苷酸与其它11种ZYMV分离物的同源性高达99.42%,氨基酸序列同源性高达98.48%;新疆5个来源于不同寄主植物的ZYMV,不存在明显的遗传变异性,同源性高达97%,而与北京CH-BJ,Reunion和Singapore分离物相比存在较大差异,说明ZYMV地域的相关性要大于寄主上相关性。

罗汉果种子传播小西葫芦黄化花叶病毒的检测

为了解小西葫芦黄化花叶病毒(Zucchini yellow mosaicvirus,ZYMV)是否能通过罗汉果种子传播。本研究通过取ZYMV阳性的罹病罗汉果植株种子700粒,400粒直接播种于防虫网室中,300粒经表面消毒处理后播种于MS培养基上。最终获得213棵罗汉果实生苗。对所获得实生苗进行生物学鉴定及ZYMV特异性RT-PCR检测,均未检测到ZYMV阳性植株。结果表明ZYMV不能经罗汉果种子传播,或其传播率很低。

小西葫芦黄化花叶病毒分离物的3′末端序列多态性研究

研究了来自中国大陆 9个小西葫芦黄化花叶病毒 (ZYMV)分离物的基因组 3′末端核苷酸序列及所推导的外壳蛋白 (CP)氨基酸序列以及 3′末端非编码区 (UTR)序列 ,并与其它地区所报道的 1 6个ZMYV分离物进行了同源性比较。ZYMVCP基因核苷酸序列具有一定的寄主相关性和地域相关性 ,但总体上其关联程度不明显 ;同时 ,CP氨基酸序列的寄主适应性程度明显高于地域相关性。 2 5个ZYMV分离物的CP氨基酸序列根据其变异程度分为 2个区 :N端约 41个氨基酸为高度变异区 ,CP核心区和C端氨基酸序列为保守区。研究结果初步揭示了ZYMV作为单链RNA病毒通过与寄主相互作用而表现寄主适应性变异的趋势。

小西葫芦黄化花叶病毒罗汉果分离株抗血清的制备和应用

将分离自罗汉果(Siraitia grosvenorii)的小西葫芦黄化花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV-LHG)在西葫芦上繁殖,利用差速离心法与PEG沉淀法相结合提纯病毒粒子,用于免疫新西兰大白兔,成功制备出效价为1∶10 240的抗血清。分别用健康西葫芦叶片总蛋白及健康西葫芦叶片汁液吸附处理抗血清,比较2种处理后抗血清背景反应,以健康西葫芦汁液吸附法较佳。用间接ELISA对罗汉果果园及附近共46个科114种植物进行检测,其中9个科25种植物有阳性反应,以葫芦科、苋科、豆科、锦葵科等阳性率较高。田间病毒病发病率调查表明,宿根苗发病率比组培苗高,发病时间更早,是田间罗汉果病毒病的主要初侵染来源之一。

金瓜和白瓜花叶病毒病病原的初步鉴定

崇明是上海出口蔬菜生产基地之一,也是国家级的绿色食品园区之一,具有生产绿色蔬菜商品的生态环境和资源优势.

两种葫芦科病毒的分子检测和致病性研究

小西葫芦黄化花叶病毒 (ZYMV)和黄瓜花叶病毒 (CMV)是浙江及其周边地区侵染葫芦科植物最主要的病毒种类。本文通过RT PCR和基因克隆 ,获得了侵染南瓜的CMV杭州分离物 (HZ0 1S10 )的 3' 端序列 ,通过CP氨基酸序列同源性分析 ,确定其属于CMV亚组I;分别以3 2 P标记的ZYMV和CMV基因组cDNA作为探针 ,用RNA点杂交方法定点检测了浙江地区自然感病的葫芦科作物中以上 2种病毒的发生情况。ZYMV和CMV在葫芦科作物上的发生表现出显著的季节性差异 :夏季CMV发生普遍 ,只有部分南瓜和甜瓜感染ZYMV ;ZYMV则主要发生在秋季 ,同一时期未检测到CMV。此外 ,幼苗期接种试验显示 :以上 2种病毒对西葫芦 (早青一代 )、丝瓜 (中长 )、黄瓜 (津绿 4号 )的致病性存在明显差异 ,供试西葫芦对ZYMV比较敏感 ,供试丝瓜对CMV更敏感 ,而供试黄瓜品种对以上 2种病毒均表现抗病。

小西葫芦绿斑驳花叶病毒生物学特性及传播方式

小西葫芦绿斑驳花叶病毒(Zucchini green mottle mosaic virus,ZGMMV)是我国新报道的侵染葫芦科作物的烟草花叶病毒属病毒。从感染病毒的葫芦叶片中分离出ZGMMV,摩擦接种西瓜(Citrullus lanatus)、葫芦(Lagenaria siceraria)、西葫芦(Cucurbita pepo)、南瓜(Cucurbita moschata)、丝瓜(Luffa cylindrica)、黄瓜(Cucumis sativus)、甜瓜(Cucumis melo)、西方烟(Nicotiana occidentalis)、本生烟(Nicotiana benthamiana)和心叶烟(Nicotiana glutinosa),通过症状观察、血清学和分子生物学检测明确症状特点和寄主范围;研究病毒的种子传播,以及整枝打杈和滴灌对于病毒的传播。结果表明:ZGMMV可侵染所有供试植物;叶片症状主要为花叶、斑驳和褪绿斑,西瓜茎蔓出现坏死斑、果实倒瓤,甜瓜果实表皮出现褪绿斑;ZGMMV可通过整枝打杈等农事操作机械传播,也可通过滴灌的水在土壤中传播。该病毒在西瓜、葫芦和甜瓜上可以种传,种传率均约为1%。研究结果有助于制订该病害的综合防控策略。

新疆吐鲁番地区三种甜瓜病毒病的发生与分子鉴定

【目的】明确吐鲁番地区西瓜花叶病毒(WMV)、小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)、南瓜蚜传黄化病毒(CABYV)的发生情况及三种病毒不同来源分离物间的遗传差异。【方法】采用分子检测方法,确定吐鲁番地区甜瓜CABYV、WMV、ZYMV的侵染比例,应用序列比对及构建系统发育树分析三种病毒,吐鲁番分离物与国内外其他分离物间遗传差异。【结果】吐鲁番地区40份病毒病样中WMV、ZYMV、CABYV分子检测阳性比例分别达87.5%、50%、30%。ZYMV吐鲁番分离物等部分国内外分离物NIB与CP蛋白之间存在蛋白切割位点Q/S,WMV、ZYMV吐鲁番分离物等部分国内外分离物DAG基序的氨基酸序列均为DAG。依据系统发育树分析将三种病毒吐鲁番分离物分别划分至不同的亚组。【结论】WMV、ZYMV为吐鲁番地区甜瓜病毒病的优势毒原,CABYV为吐鲁番地区甜瓜病毒病的主要病毒之一。CABYV、WMV吐鲁番分离物与国内部分省份分离物亲缘关系更近,ZYMV吐鲁番分离物XJturufan2与东欧、中东国家的分离物亲缘关系更近,ZYMV吐鲁番分离物XJturufan与国内部分省份分离物及美国、西班牙、日本等国分离物亲缘关系更近。

合肥地区发生的西瓜花叶病的病原鉴定

从合肥市郊区的西瓜病叶上分离出一病毒分离物 ,该分离物的热钝化温度为 60～ 65℃ ,稀释终点为 1 0 - 4～ 1 0 - 5,寄主体外存活期为 2 0～ 2 3 d,电镜观察病毒粒子约 75 0 nm× 1 3 nm。参考已发表的小西葫芦黄化花叶病毒 ( Zucchini yellowmosaicvirus,ZYMV) CP基因序列设计引物 ,RT-PCR扩增得到 CP基因片段。将该 CP片段克隆到 p GEM-3 Zf( + )中 ,测序结果表明 ,该 CP基因全长 840 nt,共编码 2 79个氨基酸 ,与国内报道的 ZYMV CP基因的核苷酸序列同源性为 83 .0 %～97.3 % ,氨基酸序列的同源性为 91 .8%～ 99.8% ,证明该分离物为 ZYMV。

西瓜转基因抗病毒病新材料BH-1

西瓜新材料BH-1,是导入了西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因、小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)复制酶基因、黄瓜花叶病毒(CMV)复制酶基因的转基因新材料。经温室及大田抗病毒病鉴定表明其抗性达中抗以上水平,是我国第1个通过转基因获得的抗病毒病西瓜新材料。

美国科学家研制出快速鉴定西瓜抗病毒基因的新标记

小西葫芦黄化花叶病毒，是马铃薯Y病毒家族的一个成员，它严重影响了全世界的葫芦科作物中西瓜的商业化生产。目前马铃薯Y病毒是34个公认的植物病毒中最大的，大部分是通过蚜虫进行传播的。

西瓜抗病毒病材料的抗性鉴定和筛选研究

对35份来源于山西金鼎生物种业股份有限公司的西瓜资源进行了人工苗期接种西瓜花叶病毒2号(WMV-Ⅱ)和西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)的鉴定筛选,结果表明,V-7、V-15、V-26和V-31等4份材料表现抗病(或耐病),可望在育种上进一步利用。

ZYMV感染对甜瓜苯丙氨酸解氨酶和叶绿素的影响

研究了小西葫芦黄化花叶病毒新疆株 (ZYMV XJ)感染抗性不同的甜瓜品种后 ,苯丙氨酸解氨酶酶活性a(TAL)和叶绿素质量浓度 ρ(叶绿素 )的变化 ,与健康对照相比 ,受感染植株的a(TAL)均有所增高 ,但抗性品种“新玉”增高的幅度是感性品种“网纹香”的 2倍 ,a(TAL)峰早出现12d ,即抗性品种a(TAL)增高幅度大 ,峰出现早 .叶绿素的变化则与抗性呈负相关 ,抗性品种“新玉”受ZYMV XJ感染后的 ρ(叶绿素 )与健康对照差异不大 ,而感性品种“网纹香”的 ρ(叶绿素 )则比健康对照的下降了 6 2 .9% .a(TAL)和 ρ(叶绿素 )的变化均与甜瓜品种对ZYMV XJ的抗性呈现规律性的相关性 ,这种规律性可用于甜瓜品种对ZYMV XJ抗性鉴定的生化分析 .

黄瓜ZYMV抗性鉴定与抗性基因的分子标记辅助选择

近年来,小西葫芦黄化花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)在黄瓜(Cucumis sativus L.)上危害愈发严重,影响黄瓜植株的生长发育,降低黄瓜的产量与品质。由于ZYMV缺乏有效的防治药剂,因此需要培育ZYMV抗性黄瓜品种。以ZYMV Z5-1为病毒源,对不同黄瓜材料的ZYMV抗性进行鉴定,并对抗性位点候选基因进行了测序分析。结果显示,黄瓜品种SA02、SA06、S94、S1003、WI7230与TMG-1具有ZYMV抗性,其抗性候选基因Csa6G152960.1的突变位点一致。在ZYMV抗性鉴定的基础上,通过回交转育,将黄瓜自交系TMG-1中的ZYMV抗性基因转入感病自交系SA0422中,回交期间利用分子标记对回交群体进行前景选择和背景选择,经过3代回交,将ZYMV抗性基因转入SA0422,为培育抗ZYMV黄瓜新品种奠定了基础。