温度、盐度和体长对西藏拟溞耗氧率的影响

在实验室内研究了盐度(S=5、10、15、20和25)、温度(T=3、8、14、20和22℃)和体长(L=0.83、1.25、1.49、1.87和2.42mm)对西藏拟耗氧率的影响。结果表明,在试验盐度内该的个体耗氧率(IO)和比耗氧率(SO)均随盐度(S)升高而升高,其回归方程分别为IO=0.0014S+0.0126和SO=0.115S0.5612,数值范围为0.02～0.045μg/(indh)和0.31～0.67μg/(mg·h)。个体耗氧率和比耗氧率在温度试验中有同样的趋势,回归方程分别为IO=0.0049e0.1574T和SO=0.0678e0.1605T,数值分别为0.0076～0.13μg/(ind·h)和0.10～1.71μg/(mg·h)。体长试验中个体耗氧率随体长增大而增大,而比耗氧率则降低,回归方程分别为:IO=0.0545L2.5962和SO=-0.2059L+0.7908,数值范围为0.036～0.68μg/(ind·h)和0.38～0.63μg/(mg·h)。讨论了盐度、温度和体长对西藏拟耗氧率的影响。

碱度和pH对西藏拟溞存活、生长和生殖的影响

在温度为16±0.5℃和盐度15.5±0.5的条件下,研究了碱度和pH对西藏拟溞(Daphniopsis tibetanaSars)存活、生长和生殖的影响。结果表明,西藏拟溞的24h半致死pH为4.18和10.84;48h半致死pH为4.37和10.71;24h和48h半致死碱度分别为529.43mmol/L和503.69mmol/L。西藏拟在培养液的pH7—8时,生长率和存活率显著高于其他各组。pH7时,西藏拟溞的内禀增长率最大,为0.3014/d。pH8时次之,为0.2924/d。西藏拟溞在各碱度组中的生长率和存活率差异不显著。碱度为11.9mmol/L时,西藏拟溞产幼前发育期最短,为18.70±0.65d。在碱度11.9和18.9mmol/L时,其产卵率为1.1671和1.1877,高于其他各组。西藏拟溞在碱度为7.54mmol/L组中的rm最高,为0.3425/d,其他各组的rm在0.2889—0.3276/d之间。西藏拟溞生存的最适pH为7—8,最适碱度为4.75—18.9mmol/L。

西藏拟溞遗传多样性的初步研究

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对西藏拟溞Daphniopsis tibetana4个群体(新疆赛里木湖、西藏色林错、纳木卡错和班戈湖)的遗传多样性进行了初步研究,用21个随机引物对4个群体80个样本进行了随机扩增,从中筛选出5个扩增效果比较稳定的引物,共得到多态位点为25个。利用POPGENE32分析表明,西藏拟溞各群体遗传变异由高向低依次为色林错(SLC)>赛里木湖(SLM)>纳木卡错(NMKC)>班戈湖(BGH)。根据遗传距离结果,采用UPGMA和NJ方法分别进行聚类分析,结果表明,赛里木湖(SLM)和色林错湖(SLC)两群体亲缘关系较近,纳木卡错(NMKC)与班戈湖(BGH)两群体之间的亲缘关系比较近。

Cu^(2+)、Zn^(2+)、Co^(2+)、Ni^(2+)、Li^+对西藏拟溞的急性与联合毒性效应

分别将Cu2+、Zn2+Co2+、Ni2+和Li+按照等对数间距法设置浓度梯度,测定其对西藏拟溞(Daphniopsis tibetana Sars)的急性毒性,根据各单种金属的48hEC50值,按毒性1:1等距离设置浓度梯度测定这些金属离子对西藏拟溞的联合毒性。结果表明,西藏拟溞对这5种金属离子表现出了较高的耐受性,其毒性由强到弱依次为铜、锌、钴、镍、锂,其24hEC50分别为12.75mg/L、18.32mg/L、83.26mg/L、196.97mg/L、386.34mg/L;48h EC50分别为3.27mg/L、4.96mg/L、27.49mg/L、66.09mg/L和325.42mg/L。联合毒性实验中,Cu+Zn、Co+Ni、Co+Li、Ni+Li、Co+Ni+Li,、Cu+Zn+Li和Cu+Zn+Co+Ni+Li对西藏拟溞的毒性效应为拮抗作用,而Cu+Zn+Li、Cu+Zn+Ni和Cu+Zn+Co+Ni对西藏拟溞表现出先拮抗作用后协同作用的毒性效应。西藏拟溞对金属离子有较高的耐受性,特别是对含有锂的金属离子组合往往表现为拮抗作用的特征,这很可能是西藏拟溞在西藏高锂盐湖中可高密度存活和快速生长的适应性机制。本研究旨在了解西藏拟溞对金属离子的耐受性,探讨其作为金属离子测试生物的可行性,并为大规模培养中培养液条件优化提供理论依据。

西藏拟溞营养成分的分析与评价

对采自西藏纳木卡错并驯养于稀释海水(盐度20)中的西藏拟(Daphniopsis tibetanaSars)一般生化组成、氨基酸和脂肪酸组成进行测定,与蒙古裸腹(Moina mongolica)、淡水裸腹(Moinaspp.)、日本虎斑猛水蚤(Tigiopus japoni-ca)、褶皱臂尾轮虫(Brachionus plicatilis)和卤虫(Artemia)进行比较。结果表明,西藏拟的氨基酸和组成与上述饵料生物基本相似,18种氨基酸占蛋白质含量的69.68%,其中异亮氨酸、苏氨酸、蛋氨酸和组氨酸的含量均明显高于上述饵料生物,蛋氨酸的含量最高,达3.64%,完全能满足鱼虾生长对必需氨基酸的需要。西藏拟的主要脂肪酸为C16∶0、C16∶3、C18∶1ω9、C18∶2ω6和C18∶3ω3,不饱和脂肪酸含量高达71.58%,C18∶2ω6和C18∶3ω3含量分别达到9.97%和26.52%。EPA(C20:5ω3)和AA(C20:4ω6)的含量分别为1.41%和0.63%。从营养成分的角度进行评价,西藏拟经一定的营养强化后将成为一种很有前途的海淡水仔稚鱼虾的活饵料。

温度、盐度和食物条件对西藏拟溞摄食强度的影响

报道了不同温度、盐度和饵料条件下西藏拟溞的摄食强度、西藏拟溞对不同饵料生物蛋白核小球藻(Chlorellapyrenoidesa)、牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri)、湛江等鞭金藻(Isochrysis zhanjiangensis)、亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)、盐藻(Dunaliella salina)、新月拟菱形藻(Nitzschiella closterium)的选择性以及摄食节律。结果表明,在适温范围(2 20℃)内,西藏拟溞的滤水率、摄食率随着温度的升高而增加,14 16℃为西藏拟溞的适宜温度。在盐度20时,西藏拟溞的摄食率最高,幼、成溞对等鞭金藻的摄食率分别为1.88 ng C/(ind.h)和3.46 ng C/(ind.h)。西藏拟溞对角毛藻的滤水率和摄食率均随着龄期增加而增加,而对等鞭金藻呈相反趋势,但二者的日粮均随体长增大而减小。幼、成溞的滤水率和摄食率随食物密度变化的趋势基本一致,均是在盐藻密度为1×106 ind./L时均最高,分别为0.194、0.221 mL/(ind.h)和0.030μgC/(ind.h)和0.034μgC/(ind.h)。幼溞对6种藻的食物选择性为角毛藻>小球藻>盐藻>扁藻>金藻>拟菱形藻;成溞为扁藻>角毛藻>盐藻>金藻>小球藻>拟菱形藻。幼溞、成溞均对角毛藻和盐藻的选择性较好。西藏拟溞的幼溞和成溞对牟氏角毛藻的摄食有相同的节律,在15:00 17:00和01:00 03:00时有两个摄食高峰,在09:00 11:00和23:00 01:00有两个低谷。

Cu^(2+)和Zn^(2+)对西藏拟溞存活、生长和生殖的影响

在温度(15±0.5)°C,盐度15.5±0.5的条件下,研究了Cu2+和Zn2+对西藏拟溞(DaphniopsistibetanaSars)存活、生长和生殖的影响。结果表明,西藏拟溞在各Cu2+活度组中的存活率差异不显著,而在10-8.60mol/L组中的体长增长率显著高于其他各组。当水环境中Cu2+活度为10-8.30和10-8.13mol/L时,西藏拟溞的内禀增长率(rm)为0.2211和0.2171/d,显著高于对照组,而西藏拟溞在不同Cu2+活度组中的产卵率均高于对照组,为0.9705—1.1742。西藏拟溞在各Cu2+活度组中的存活率和生长率差异均不显著。当Zn2+活度为10-7.04—10-6.82mol/L时,西藏拟溞的rm为0.2249—0.2296/d,显著高于对照组。西藏拟溞在Zn2+活度为10-7.04mol/L组中的产卵率最大,为1.0178,10-6.82mol/L组次之,为0.867。当Zn2+活度为10-7.04—10-6.82mol/L时,西藏拟溞一生生殖次数显著高于对照组(1.58),为1.92—2.17次。因此,综合来看,当水环境中的Cu2+活度为10-8.60—10-8.13mol/L、Zn2+活度为10-7.04—10-6.82mol/L时能明显的促进西藏拟溞的种群增长、发育和生殖。论文讨论了Cu2+和Zn2+对西藏拟溞的促长机理。

环境胁迫对西藏拟溞SOD、CAT活性和MDA含量的影响

采用实验生态学方法,研究了高盐(20和25)和高温(20℃和25℃)胁迫对西藏拟溞幼溞和成溞的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的变化。结果发现:1)在高盐胁迫下,幼溞的SOD、CAT活性增强,MDA含量降低;成溞的SOD活性变化不明显,CAT活性和MDA含量均降低。2)在高温胁迫下,幼溞的SOD、CAT活性显著增强,MDA含量也显著增加;成溞的SOD、CAT活性增强,MDA含量则降低。研究表明幼溞对高盐胁迫的应激能力较强,而对高温胁迫的应激能力较弱,成溞则相反。

西藏拟溞形态构造的再描述

详细观察和描述了西藏拟溞Daphniopsis tibetanaSars的外部形态和内部构造,对其非需精卵、休眠卵、精子、壳腺、幼体的触角腺和颈呼吸器、感觉器官等都是首次描述。证实西藏拟溞与西藏溞的外部形态具有截然不同的特征,它们应分属于不同的种。西藏溞的壳瓣后背角生成壳刺,而西藏拟溞的壳瓣后背角钝圆不生成壳刺。

4个品系西藏拟溞12S rRNA基因序列及其分子进化研究

应用线粒体12S rRNA基因序列对4个地理品系的西藏拟溞(纳木卡错品系、色林错品系、班戈湖品系、赛里木湖品系)进行分子系统发育研究,并结合GenBank中7种相近溞类的12S rRNA基因序列探讨了西藏拟溞的分子系统进化关系。结果表明,在4个品系西藏拟溞的4条12S rRNA基因序列中,A、T、G、C的平均含量分别为31.9%、32.45%、17.33%和17.95%,A+T的含量64.35%,G+C的含量为35.28%,A+T的含量明显高于G+C的含量,符合节肢动物A、T含量高的特点。聚类分析结果表明,西藏拟溞和其他溞属枝角类动物有着明显的遗传差异,说明西藏拟溞在枝角类生物学研究中有其独特的地位。遗传多样性计算结果表明:在4个品系的西藏拟溞中,纳木卡错品系与色林错品系以及纳木卡错品系与班戈湖品系的遗传相似性均较高,达98%左右;班戈湖品系与纳木卡错品系间的遗传距离最小,仅为0.0126,班戈湖与赛里木湖间的遗传距离最大,为0.0199;与其他溞属枝角类相比较,4个品系西藏拟溞种内差异相对不明显,而与其他溞种间的差异显著,西藏拟溞有着较高的遗传多样性水平。研究表明,12S rRNA基因序列包含有可靠的进化信息,可作为西藏拟溞种类鉴定良好的分子标记,同时利用这种分子标记法从分子系统进化方面证明了Daphnia tibetana和Daphniopsis tibetana Sars应分属于不同的种。

海水中规模化培养西藏拟溞的技术优化研究

为了给北方海水鱼虾蟹类育苗增添一种新的生物活饵料,利用循环水培养装置研究了西藏拟溞Daphniopsis tibetana Sars在稀释海水（盐度为18~20）中规模化培养的技术工艺参数,即起始放养密度、充纯氧和日采收率。结果表明：起始放养密度对西藏拟溞种群增长和日产量影响显著（P〈0.05）,不同起始放养密度（200、550、900、1250 ind./L）培养试验中,放养密度为1250ind./L时,培养第33天时种群密度达最高,为（9500±550.73）ind./L,平均日产量为（125.00±8.35）g/（m3·d）;充纯氧与充空气相比较,充纯氧能显著提高种群密度和日产量（P〈0.05）,当放养密度为1250 ind./L、充纯氧时,西藏拟溞种群密度最高达（11 600±560.45）ind./L,平均日产量为（156.82±8.49）g/（m3·d）;日采收率对西藏拟溞的种群增长和日产量也有显著影响（P〈0.05）,日采收率为20%时最佳,放养密度为1250ind./L、日采收率为20%时,西藏拟溞种群密度最高为（12 900±995.04）ind./L,平均日产量为（176.52±15.08）g/（m3·d）。

重金属Hg^(2+)、Cd^(2+)对西藏拟溞的急性毒性研究

在静置不换水条件下,研究了重金属Hg2+、Cd2+对西藏拟溞的急性毒性作用。结果表明,Hg2+和Cd2+对西藏拟溞的24hLC50分别是468.3441μg/L、12.3140 mg/L,48hLC50分别是124.3158μg/L、6.8183 mg/L,Hg2+、Cd2+对西藏拟溞急性毒性的安全浓度分别是2.6277μg/L、0.6271 mg/L。Hg2+对西藏拟溞的毒性大于Cd2+的毒性。

温度和盐度对西藏拟溞抗氧化酶和脂质过氧化作用的影响

采用实验生态学方法,研究了温度(T=16、19、22、25、28℃)、盐度(S=5、10、15、20、25)对西藏拟溞总超氧化物歧化酶(TSOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明:温度和盐度能够诱导西藏拟溞抗氧化应激反应,胁迫24h后,SOD、GPX活性及MDA含量在28℃、盐度20时均达到最高值,分别为(37.18±1.97)U mg-1μg-1、(75.1±9.96)U mg-1μg-1和(12.24±2.12)nmol mg-1μg-1;48h后,高温低盐组(25—28℃、5—10)和高温高盐组(25—28℃、20—25)SOD、GPX活性及MDA含量显著高于其他处理组(P<0.05),在28℃,盐度5时均达到最大值,分别为(19.25±3.48)U mg-1μg-1、(59.95±4.66)U mg-1μg-1和(4.98±0.66)nmol mg-1μg-1;温度、盐度以及这两个因子之间对西藏拟溞体内SOD、GPX活性和MDA含量均有极显著影响(P<0.01)。

西藏拟溞生物学的初步研究

报道了西藏拟Daphniopsistibetana在西藏内陆盐水的分布及其实验种群生物学的一些参数。西藏拟广泛分布于海拔 40 0 0m以上的藏北咸水湖泊中 ,对有西藏拟出现的 1 3个水体的测定及室内驯养结果表明 ,西藏拟分布的适温为 - 2～ 2 0℃ ,盐度为 9～ 3 5 ,pH为 9 0～ 1 0 4。盐度 1 6～ 1 7(纳木卡错 )、 2 2～ 2 5 (纳木卡错 )和 3 1～ 3 2 (班戈Ⅲ湖 ) 3个试验组西藏拟的平均寿命分别为 (48 0 0± 1 2 6 0 )、 (44 6 0± 1 4 2 0 )、(5 5 1 0± 9 70 )d ;最大寿命分别为 6 9、6 8、 72d ;产幼前发育期分别为 (2 1 3 3± 1 41 )、(2 3 2 5± 3 3 8)和 (2 2 3 4± 3 76 )d ;两次产幼间隔分别为 (7 5 5± 1 48)、 (8 0 7±1 82 )、 (7 88± 1 88)d ;每龄生殖量分别为 (8 86± 1 47)、 (7 6 7± 2 1 9)和 (6 82±0 81 )个 ;每龄最大生殖量分别为 1 7、 1 5、 9个 ;一生总生殖量分别为 (2 4 3 3± 1 5 78)、(1 9 3 3± 7 0 0 )、 (2 0 5 0± 5 6 7)个 ;其最大值分别为 5 9、 3 7、 3 3个。另外 ,还讨论了西藏拟的开发利用前景。

温度、盐度和体长对西藏拟溞(Daphniopsis tibetana Sars)排氨率的影响

在实验室内研究了温度(T=3、8、14、20℃和22℃)、盐度(S=5、10、15、20和25)和体长(0.80、1.23、1.51、1.84mm和2.38mm)对西藏拟溞排氨率(NR)的影响。结果表明,在试验温度范围内,西藏拟溞幼溞排氨率随温度(T)的升高而升高,其回归方程为NR=0.0359Ln(T)-0.0185(n=5,r=0.9881,P<0.05),数值范围为0.022～0.092mg/(g·h)。在盐度(S)试验中,西藏拟溞幼溞排氨率有同样的趋势,回归方程为NR=0.0535e0.0213S(n=5,r=0.9884),其数值范围为0.061～0.092mg/(g·h)。而体长试验中,西藏拟溞排氨率随体长(L)的增加而降低,回归方程为NR=0.0568L-1.4154(n=5,r=0.9938,P<0.05),数值范围为0.017～0.083mg/(g·h)。

海水中大量培养西藏拟溞及作为红鳍东方鲀鱼苗活饵料的研究

为了给北方海水鱼虾蟹苗提供一种新的活饵料，在海水中进行了大量培养西藏拟[氵蚤]Daphniopsis tibetana和将该涵投喂红鳍东方[鱼屯]Fugu rubripes的试验。结果表明：西藏拟[氵蚤]培育的最高密度为1570～2320个／L，平均日产量为23．0～35．2g／（m^3·d）；摄食西藏拟[氵蚤]的红鳍东方[鱼屯]的存活率、体长和体重相对增长率与对照组差异不显著（P〉0．05），饵料系数高于对照组。而日粮却与对照组接近；摄食西藏拟[氵蚤]的红鳍东方[鱼屯]鱼体的高度不饱和脂肪酸（HUFA）中，除C22：6w3（DHA）的含量低于对照组外，其余脂肪酸的含量均高于或与对照组相当。同时也讨论了影响西藏拟[氵蚤]密度和产量的生态因子及西藏拟[氵蚤]的营养价值问题。

培养密度和容积对西藏拟溞生长和生殖的影响

在温度为(17±1)℃和盐度为16±1的条件下,研究了培养密度(0.1、0.2、0.3个/mL)和容积(20、50、80、150 mL)对西藏拟溞Daphniopsis tibetana生长和生殖的影响。结果表明:在试验范围内,低种群密度比高种群密度更有利于西藏拟溞的生长和繁殖,当种群密度为0.1个/mL时,最有利于溞体的生长和繁殖,当种群密度达到0.3个/mL时,水体中开始出现雄体(CV3组除外);在容积试验中,容积为20～80 mL时,西藏拟溞的体长随着容积的增大而增大,容积为80 mL时,最适宜溞体的生长和生殖;西藏拟溞的生殖量随着体长的增加而增加。

西藏拟溞Daphniopsis tibetana核糖体18S和ITS2序列克隆及进化分析

利用PCR反应扩增出西藏拟溞Daphniopsis tibetana核糖体18S和转录间隔区II (ITS2)片段,经克隆测序后获得其序列,在此基础上研究西藏拟溞分类进化地位。西藏拟溞18S rDNA序列长2296 bp,A、T(U)、G、C含量分别为21.2%、24.4%、29.8%和24.6%; ITS2序列长度平均为1229 bp,A、T(U)、G、C含量平均为28.3%、23.5%、25.5%及22.7%。采用最大似然法(ML)构建的18S rDNA系统进化树显示,西藏拟溞D.tibetana和方角拟溞D.quadrangula亲缘关系最近,在进化树上聚集在同一分支;和溞属的大型溞Daphnia magna在不同分支上,该结果再次证明了西藏拟溞在分类上应归属于拟溞属。与18S rDNA相比,西藏拟溞ITS2序列存在个体间碱基及长度差异,与同科异属物种之间差异更大。获得的西藏拟溞18S rDNA、ITS2序列,为该种进一步的分子水平研究提供了基础数据。

西藏拟的染色体核型研究

对采自西藏北部的西藏拟Daphniopsistibetana染色体进行了研究。结果表明:西藏拟染色体数目为2n=24,其中6条为中部着丝粒染色体,18条为端部着丝粒染色体,染色体总臂数NF=30,核型公式为2N=6M+18T。将此结果与裸腹属和属几个种类的染色体核型结果进行了比较,探讨了三者之间的亲缘关系,并根据西藏拟染色体核型特点,对其进化地位进行了分析。