西藏猪主要生产区旋毛虫病调研报告

在西藏猪主要生产区(林芝工布江达县错高乡、那曲地区嘉黎县忠玉乡)分别开展了猪旋毛虫病的检测调查,检测了2257头份,阳性检出率为1.02%,并初步提出了合理的综合防治措施以及对策与建议。通过本次调查研究,基本摸清了旋毛虫病在我区主要西藏猪生产区的流行基数,为彻底控制、消灭我区旋毛虫病的发生奠定了基础。

西藏藏猪戊型肝炎病毒全基因组生物信息学分析

为了解藏猪源戊型肝炎病毒(HEV)分子特性,选取1株西藏藏猪源HEV4d型(GenBank登录号OQ981960)进行全基因组克隆,并通过多种生物信息学工具对其非结构蛋白、衣壳蛋白和磷蛋白进行生物信息学分析。结果显示:非结构蛋白为不稳定、亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽,分别有27和29个T、B细胞抗原表位,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,三级结构包含锌离子受体、多个甲基化位点及多种解旋酶;衣壳蛋白为不稳定、亲水性蛋白,有跨膜区和信号肽,分别有14和29个T、B细胞抗原表位,二级结构以无规则卷曲和延伸链为主,三级结构包含推定的糖基水解酶、镁离子位点、合成酶、连接酶、异构酶等;磷蛋白为稳定、亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽,分别有7和15个T、B细胞抗原表位,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,三级结构包含多个转移酶、聚合酶、连接酶、分泌系统、甲基转移酶、金属离子结合蛋白等。本研究为进一步了解西藏藏猪源HEV基因组和蛋白功能奠定了基础。

西藏猪分娩行为特征的研究

通过对西藏猪分娩行为观测发现,分娩前征兆明显,衔草做窝、挤出初奶、身体抽搐或阵缩及胎膜破裂的出现率分别为100％、100％、84．5％和92．8％。一天中母猪分娩时间分布以下午最多,占44．07％,其次是上午、上半夜,下半夜最少。仔猪的初生重大小与产仔间隔的时间长短有关,各组之间差异不显著(P>0．05)。仔猪数正生多于倒生,但差异不显著(P>0．05)。仔猪平均初生重正生低于倒生,但差异不显著(P>0．05)。正生、倒生仔猪中的公母比例差异均不显著(P>0．05),说明胎位与性别无关。窝产仔数少于5头与多于9头两组之间差异显著(P<0．05),其余各组之间差异均不显著(P>0．05),说明产仔数与仔猪的初生重有关。

西藏小型猪血液生理生化指标的初步研究

目的探讨西藏小型猪的生理生化指标特性。方法采用全自动血球计数仪和全自动生化仪，对1．5—5月龄西藏小型猪（♂21，♀24）血液的部分生理和生化指标进行测定和分析。结果西藏小型猪血液生理指标的性别差异不显著，部分生化指标性别差异显著；但多数指标在不同月龄间差异极显著（P〈0．01）或显著（P〈0．05），并有近半数项目随月龄的增长呈减少或增加的趋势，其余多无明显的变化规律。所测生理生化指标中部分与巴马小型猪相近，与普通猪差异较大，与人类水平接近。结论西藏小型猪、其他小型猪和人类的生理生化特性有一定的相似性。

西藏小型猪线粒体DNA控制区的分子遗传学研究

通过扩增102头西藏小型猪以及16头巴马小型猪、17头贵州香猪的线粒体DNA控制区,测序并与国内其他猪种进行比较,研究西藏小型猪的遗传标记以及与其他国内地方猪种的亲缘关系。结果显示,西藏小型猪线粒体DNA D-loop区分3个区域。串联重复序列区处于中间位置,包含有15~29个10 bp的重复片段,分为A、B 2种类型。3′端340 bp,与国内其他猪种的序列相同,比较保守 D-loop 5′端704 bp,共有22个变异位点。由22个变异位点中归纳出25个单倍型,其中有2种主要的单倍型,分别占34.4%和36.6%。根据3个转换位点：305、500、691,将西藏小型猪分成了2组,几乎与串联重复序列所分的A、B 2组类型相对应。与西藏小型猪相比,巴马小型猪和贵州香猪D-loop 5′端变异位点较少,分别只有4种和2种单倍型,串联重复区也只有1个类型。说明西藏小型猪可能有2个母系祖先,并且与我国西南地区的猪种有较近的亲缘关系 不同的串联重复片段类型和5′端的变异位点可以联合组建西藏小型猪的遗传标记。

西藏小型猪线粒体D-loop区及微卫星多态性的遗传学分析

目的通过分析西藏小型猪线粒体控制区(D-loop区)及微卫星位点的遗传多态性,检测西藏小型猪的遗传背景,从而为其作为实验动物提供分子生物学方面的可靠依据。方法利用特异性引物对西藏小型猪的线粒体D-loop区及10个具有多态性的微卫星位点进行扩增,割胶纯化并对线粒体D-loop区进行测序,另外采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法分离微卫星位点的等位基因。结果西藏小型猪线粒体D-loop区全序列没有多态性,微卫星位点则具有高度的遗传多态性和杂合度,分别为0.584和0.573。结论西藏小型猪线粒体基因组无多态性,证明其在母系进化和遗传上与其他猪种较为一致,本实验所用的西藏小型猪生长于一个封闭的环境,导致其微卫星位点遗传多态性的中低度水平。

F1代西藏小型猪早期生长发育特点

目的研究西藏小型猪早期生长发育的规律。方法对本基地F1代西藏小型猪的体重、体长、胸围、体高、体温、呼吸频率、心率及血液生理生化指标进行了测定。结果西藏小型猪体型小,生长性能稳定,生长速度与原产地西藏小型猪基本一致;西藏小型猪的体温、呼吸次数和心率与原产地西藏小型猪相近,且雌雄之间差异不显著(P>0.05);F1代雌雄间除嗜碱性粒细胞、单核细胞数和尿素氮外其他指标也基本一致,大部分指标与人接近。结论由于西藏小型猪体型小、生长性能稳定,血液生理生化值与人类相近,因而是理想的医学研究用实验动物。

亚热带气候环境下西藏小型猪部分血液生理生化指标的比较

目的比较研究西藏小型猪在亚热带气候环境下的部分血液生理生化指标。方法常规方法测定原代和F1代西藏小型猪血液的9项生理和9项生化指标,比较两代之间以及雌、雄之间的不同,并与其他实验动物及人类的同类指标进行对比分析。结果在生化指标中,原代雌雄之间AST差异显著;F1代雌雄之间TG、ALB有差异,BUN、CHOL有显著性差异。在生理指标中,原代雌、雄间无差异,F1代雌雄间MONO有显著性差异。结论西藏小型猪已经基本适应亚热带地区的环境。与其他实验动物相比西藏小型猪许多生理生化指标更接近人类,非常适合替代犬、猴用于生物医学研究。

实验用西藏小型猪原代和第一代间部分血液指标比较

目的:比较来自高原地区的原代西藏小型猪与其广州第一代子猪部分血液生理生化指标的变化。方法:西藏小型猪原代(G0代)25头,G1代35头,常规方法测定血液的9项生理指标(白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MONO)、粒细胞(NEU)、嗜酸性粒细胞(EOS)、嗜碱性粒细胞(BASO))和9项生化指标(谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、白蛋白(ALB)),比较2代之间以及雌、雄之间18项指标的不同。结果:在西藏小型猪9项生化指标中,G0代雌、雄之间差异无统计学意义,在G1代雌雄之间TP、BUN、CHOL和ALB的差异有统计学意义,2代雌性间CREA、雄性间BUN和CREA的差异均有统计学意义。在9项生理指标中,G0代雌、雄间RBC、HGB的差异有统计学意义;G1代雌、雄之间只有WBC的差异有统计学意义。2代同性别间血液生理指标比较:雌性间WBC、雄性间HGB、WBC、PLT和EOS的差异有统计学意义。其他差异均无统计学意义。结论:2代西藏小型猪之间以及雌、雄之间部分血液生理生化指标的差异有统计学意义。西藏小型猪可以培育成具有独特特性的实验动物。

生长激素受体基因突变对西藏藏猪生长迟缓的影响

本研究旨在探索西藏藏猪生长迟缓成因和分子机理。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对西藏藏猪生长激素受体(GHR)基因克隆,采用生物信息学方法分析西藏藏猪生长激素受体基因与其他常见品种猪基因与蛋白序列差异,并构建GHR基因的真核过表达质粒,转染到西藏藏猪胚胎成纤维细胞(PEFs)上进行瞬时表达,通过MTT检测细胞增殖活性,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的情况。西藏藏猪GHR基因编码区1 716bp,编码572个氨基酸;与普通猪GHR基因序列进行比对分析表明,在西藏藏猪GHR基因编码区1 225bp处发生T→G突变,导致丝氨酸突变为丙氨酸;GHR基因真核过表达质粒成功转染PEFs后,PEFs生长活性显著提高;qPCR检测表明,细胞株中IGF-1表达显著上调。综上表明,GHR基因的表达可以提高PEFs细胞的增殖活性,诱导IGF-1基因的表达,GHR基因在1 225bp处的点突变可能影响西藏藏猪的生长迟缓。

高原不同饲养管理条件下西藏猪生产性能及效益分析

通过对农村放牧和舍饲条件下西藏猪生产性能各项指标的测定结果进行对比分析显示 ,产仔表现各指标间均差异明显(P <0 .0 1) ;除膘厚 (P <0 .0 5 )和花板油重 (P <0 .0 1)外 ,屠宰测定其它各项指标间均无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,肉质测定各项指标均差异不显著 (P <0 .0 5 ) ) ,且在正常值范围 ;肥育性能表现各指标间均差异明显 (P <0 .0 1) ,经济效益存在较大差异 (P <0 .0 1)。

广州地区西藏小型猪的繁殖行为学表现

目的对广州地区西藏小型猪的繁殖性能和繁殖行为进行了观察研究。方法以广州地区雌雄西藏小型猪为研究对象,根据其繁殖卡的详细资料进行分类统计。结果雄性西藏小型猪阴茎首次伸出日龄为(39.50±2.63)d,此时体重为(3.26±0.87)kg;其射精日龄为(65.22±3.69)d,体重为(5.34±1.03)kg。雌性西藏小型猪初情日龄为(142±5.3)d,成年母猪发情周期为(20.35±0.72)d,发情持续期(4.2±0.31)d;其妊娠期约为114 d左右。初产雌性西藏小型猪产仔数为(2.30±0.82)头,2月龄断乳存活率为86.5%;而经产雌性西藏小型猪产仔数为(5.70±1.00)头,其2月龄断乳存活率为91.4%。哺乳期雌性西藏小型猪母性强,护仔行为强烈。结论广州地区西藏小型猪生长发育繁殖正常,产仔率和2月龄存活率等繁殖性能指标与原产地一致。

西藏小型猪与高原藏猪的血液生理生化值的比较

目的比较西藏小型猪与高原藏猪的血液生理、生化指标的差异。方法采用全自动血液细胞和生化分析仪测定21个血液生理生化指标。结果藏猪与西藏小型猪之间,红细胞、白细胞、血小板计数、总胆固醇、血清甘油三酯指标的测定差异有显著性,谷草转氨酶、血清总蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、肌酸激酶指标的测定差异极显著。其中红细胞、白细胞、谷草转氨酶、肌酸激酶的值藏猪高于西藏小型猪,而血小板计数、血清总蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、总胆固醇、血清甘油三酯的值藏猪低于西藏小型猪。结论不同的生活环境、气候条件和营养水平会对动物的血液生理、生化值的测定造成一定的影响。

西藏小型猪与军牧一号白猪IGFBP-6基因表达差异分析

采用实时荧光定量PCR(Real Time PCR)方法,对不同生长阶段的西藏小型猪和军牧一号白猪的肝脏、脾脏、肾脏及肌肉组织中胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)基因mRNA表达水平进行检测,并利用t检验,对相同生长阶段的各组织2个品种猪之间的表达水平进行比较分析。结果表明:西藏小型猪与军牧一号白猪IGFBP-6基因均在肌肉组织中表达量最高,而在肝组织中表达量最低。IGFBP-6基因在1日龄肾脏中,西藏小型猪表达水平高于军牧一号白猪,差异显著(P<0.05);在脾脏组织中,西藏小型猪表达水平低于军牧一号白猪,表达水平差异极显著(P<0.01)。其他生长阶段和组织中,2个品种猪IGFBP-6基因表达水平差异均不显著(P>0.05)。

西藏小型猪H-FABP基因的PCR-RFLP研究

目的研究西藏小型猪心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因5′-上游区和第二内含子内的遗传变异。方法应用PCR-RFLP技术测定30头西藏小型猪H-FABP的基因型。结果(1)在5′-上游区的HinfI-RFLP位点上,西藏小型猪表现出多态性,等位基因h的频率为0.80;(2)在在第二内含子内的HaeⅢ-RFLP位点上,西藏小型猪均为DD纯合子;(3)在第二内含子内的HinfI*-RFLP位点上,除一头猪表现为bb基因型外,其余猪都表现为BB基因型,等位基因B的频率为0.97;(4)除HaeⅢ-RFLP位点外,在其余位点上西藏小型猪均处于Hardy-Weinberg不平衡状态。(5)在HinfI-RFLP中,西藏小型猪表现为中度多态性(0.25<PIC<0.5),而在其他位点的RFLP中表现为低度多态(PIC<0.25)。结论可以利用西藏小型猪H-FABP基因5′-上游区的多态遗传标记来分析其与肌内脂肪的关系。

戊巴比妥钠联用速眠新Ⅱ对西藏小型猪麻醉效果观察

目的观察联合应用速眠新Ⅱ和戊巴比妥钠对西藏小型猪的麻醉效果。方法采用速眠新Ⅱ（0.1mL/kg）肌内注射和3%戊巴比妥钠生理盐水溶液（0.2 mL/kg）静脉注射联合麻醉方法对15头行胚胎移植术的西藏小型猪进行麻醉,观察动物麻醉维持时间、镇痛效果、呼吸频率和心率变化及术后苏醒情况。结果80%（12头/15头）西藏小型猪初始量麻醉状态维持45 min以上,20%（3头/15头）西藏小型猪手术过程中追加麻醉。麻醉期间肌肉松弛效果好,动物呼吸和心率平稳。手术过程中西藏小型猪呼吸频率为（12-22）次/min,心率为（63-85）次/min,麻醉过程中未出现麻醉死亡,术后苏醒时间为30-60 min。结论速眠新和戊巴比妥钠混合麻醉效果好,且麻醉剂量较以往大幅减少,术后苏醒快。戊巴比妥钠联用速眠新复合麻醉对西藏小型猪是一种较理想的麻醉方法,且动物麻醉安全性高。

西藏小型猪心脏、呼吸系统组织学观察

目的积累西藏小型猪心脏和呼吸系统的组织学资料,对西藏小型猪在相关生物学研究上的应用提供参考。方法将西藏小型猪心脏和呼吸系统各脏器固定于10%中性甲醛溶液中,常规石蜡切片,HE染色,光镜下观察。结果西藏小型猪心脏壁厚,心内膜下浦肯野纤维粗,束细胞大而清晰,排列规则;心肌纤维粗大,排列紧密,横纹较模糊,润盘少且不清楚,肌间血管丰富;心外膜较厚。西藏小型猪鼻黏膜较厚;气管和支气管假复层柱状纤毛上皮排列紧密,纤毛粗而长,黏膜下腺体量少;肺支气管周围无炎性细胞浸润,肺泡腔内尘细胞极少,肺泡壁和肺间质血管较丰富。结论西藏小型猪心脏、呼吸系统表现出高原动物组织学特点,其这种特点对今后西藏小型猪实验所涉及的组织学判断有重要参考价值。

西藏小型猪IGFBP-3基因甲基化与表达差异分析

为研究西藏小型猪类胰岛素生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)基因甲基化及表达差异,对IGFBP-3基因的CpG岛甲基化程度、mRNA及蛋白表达水平进行分析,并以军牧一号猪为对照。结果表明:西藏小型猪肝脏组织中IGFBP-3基因CpG岛甲基化水平显著高于军牧一号猪(P<0.05);西藏小型猪不同组织中IGFBP-3mRNA表达量均显著高于军牧一号猪(P<0.05);同时肾脏中IGFBP-3蛋白含量显著高于军牧一号猪(P<0.05)。这为猪生长发育调控及促生长机制提供了分子依据。

西藏小型猪在广州地区的行为学特性

为了解西藏小型猪在亚热带地区的行为特性,对从西藏自治区偏僻山区引进到广州市的42头西藏小型猪,进行为期1年的封闭饲养,观察并记录其行为特性。结果表明,母猪走动时间约占全天的15%~25%,卧息时间占75%~85%,排粪5次~6次;4月龄~5月龄左右出现初次发情,发情特征明显;产前19h开始出现闹圈等一系列产前行为,产仔持续时间2.0h^4.2h,胎衣排出时间4.9h^6.4h,产仔数为3头~6头;每天哺乳25次,产后10d^15d达到高峰。公猪65日龄~80日龄出现爬跨行为,120日龄可配种利用。说明西藏小型猪对亚热带气候区的生态条件具有很好的适应能力。

西藏小型猪ESR基因PvuⅡ多态性与生长繁殖性能相关分析

目的了解ESR基因PvuⅡ位点在西藏小型猪中的多态性分布情况;研究其在西藏小型猪上的遗传效应,为西藏小型猪生长繁殖性状的分子遗传标记辅助选择提供实验依据。方法记录44头西藏小型猪母猪繁殖性能,并对其所产仔猪的生长性能进行测定,采用PCR-RFLP方法对ESR基因PvuⅡ位点进行多态性与生长繁殖性能进行相关性分析。结果西藏小型猪ESR候选基因PvuⅡ位点表现出多态性,为AA、AB、BB型,A、B等位基因频率特征。初产胎的产仔数在不同基因型间差异存在显著性,不同基因型间产仔数呈BB>AB>AA的趋势,初产胎和经产胎的母猪其他指标在不同基因型间差异均没有显著性。结论提高西藏小型猪猪群ESR基因PvuⅡ位点B等位基因频率,有利于提高西藏小型母猪的产仔数。