野百合碱对大鼠右心室心肌肥厚功能及规范性瞬时感受器电位6表达水平的影响

目的探讨腹腔注射野百合碱(MCT)对大鼠右心室心肌肥厚功能和规范性瞬时感受器电位6(TRPC6)表达水平的影响。方法采用随机数字表法将大鼠分为对照组(CON组)和MCT给药模型组(MCT组),各25只。CON组大鼠置于常压和正常氧浓度(21%)饲养箱中饲养3周,MCT组大鼠以2%MCT 60 mg/kg一次性腹腔注射,后常规饲养3周。记录两组大鼠右心室收缩压(RVSP)、心率(HR)、右心室内压力最大上升/下降速率(RV±dp/dtmax)、平均动脉压(MAP)以及右心室肥大指数(RVMI)。HE染色观察两组大鼠右心室心肌组织形态。并采用实时定量PCR(RT-PCR)检测TRPC6 mRNA表达水平,采用Western blotting方法检测TRPC6蛋白表达水平。结果饲养3周后,CON组大鼠死亡1只,MCT组大鼠死亡7只。MCT组和MCT组m SAP和HR比较,差异无统计学意义(P>0.05);MCT组RVSP、RVMI、RV+dp/dtmax高于CON组,RV-dp/dtmax低于CON组(P<0.05)。HE染色可见CON组大鼠右心室心肌细胞排列有序,胞核清晰;MCT组右心室心肌纤维粗大,细胞内肌原纤维数量增多,心肌纤维排列紊乱,细胞核深染,形状不整。CON组右心室心肌组织TRPC6 mRNA表达水平为(1.00±0.51),低于MCT组的(2.49±0.96)(t=-3.33,P<0.05)。CON组右心室心肌组织TRPC6蛋白表达水平为(1.00±0.46),低于MCT组的(2.90±0.32)(t=14.99,P<0.05)。结论 MCT可诱导SD大鼠产生右心室心肌肥大,并显著上调右心室心肌细胞编码TRPC6 mRNA和蛋白的表达水平,TRPC6可能参与右心室心肌肥大的发生发展。

野百合碱预处理对大鼠右心室功能及规范性瞬时感受器电位亚家族表达的影响

目的:探讨腹腔注射野百合碱(MCT)3周对大鼠右心室功能的影响以及规范性瞬时感受器电位(TRPC)亚家族在野百合碱诱导的右心室心肌肥厚中的表达。方法:将20只SD雄性大鼠随机分为对照组(n=10)和野百合碱诱导右心室肥大模型组(MCT组,n=10)。MCT组以2%MCT 60 mg/kg剂量一次性腹腔注射,建立MCT诱导的右心室肥厚大鼠模型。3周后,分别测定以上两组的右心室血流动力学参数和右心室肥大指数(RVMI),右心室心肌病理切片,并通过逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)来检测信使核糖核酸(mR NA)和TRPC亚型的蛋白表达水平。结果:MCT组与对照组比较,右心室收缩压、RVMI显著升高,右心室内压力最大上升速率显著增加,右心室内压力最大下降速率显著下降,差异均有统计学意义(P<0.01);MCT组右心室心肌纤维增粗,细胞内肌原纤维数量增多,心肌纤维排列紊乱,细胞核深染,形状不整;MCT组较对照组右心室心肌组织TRPC6 mR NA表达升高,(n=6),右心室TRPC6蛋白相对表达水平升高(n=4),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:MCT预处理3周可诱导SD大鼠产生右心室心肌肥厚,上调了右心室心肌细胞TRPC6通道蛋白的mR NA和蛋白的表达,TRPC6可能参与了心肌肥厚的发生发展。

慢性低氧及野百合碱对SD大鼠右心室功能及规范性瞬时感受器电位亚家族表达的影响

目的探讨慢性低氧(CH)及野百合碱(MCT)对SD大鼠右心室功能及右心室心肌细胞上规范性瞬时感受器电位(TRPC)亚家族表达的变化。方法将72只SD雄性大鼠随机平均分为对照组(CON组)、CH组和MCT诱导右心室肥大模型组(MCT组),每组24只。CH组将大鼠置于CH(10%O2)环境饲养3 w以诱导大鼠发生右心室肥厚,MCT组则是对SD大鼠进行腹腔注射诱导液,其剂量规定是2%MCT 60 mg/kg,设计MCT诱导大鼠出现右心室肥厚模型。之后对上述三组SD大鼠的右心室进行全面检查,研究其血流动力学指标和右心肥大指数(RVMI)、右心室心肌病理切片,实时定量PCR法和免疫印迹法检测TRPC亚家族m RNA和相关蛋白的表达水平。结果与CON组比较,CH组及MCT组:SD大鼠的右心室功能相关指标收缩压(RVSP)、右心室内压力最大上升速率(+dp/dtmax)、RVMI均显著增加(P<0.01),且MCT组的血流动力学改变及RVMI均显著高于CH组;心肌纤维组织呈病态状,纤维层变厚,胞核颜色加重、外形不规则,同时经检测发现,MCT组的病理改变较CH组更为显著;CH组右心室心肌组织TRPC1 m RNA表达升高;MCT组右心室心肌组织TRPC6 m RNA表达升高;CH组大鼠右心室TRPC1蛋白指数异常,其表达率增加,MCT组大鼠右心室TRPC6蛋白指数异常,其表达率增加(P<0.05)。结论在CH环境中生长3 w能够顺利诱导大鼠出现右心室肥厚,同时也会提高其心肌细胞中的TRPC1 m RNA与蛋白的表达,MCT预处理3 w可成功诱导SD大鼠产生右心室心肌肥厚,且MCT预处理的诱导的右心室肥厚现象比较明显,同时也提高其心肌细胞中的TRPC6 m RNA与蛋白的表达,这两个亚型或许是诱导右心室肥厚出现的重要因素。

C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道mRNA表达

【目的】观察C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道(TRPM6)mRNA的表达,探讨哮喘低镁血症的可能原因。【方法】健康4～6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠48只,体质量(12±2)g,随机数字表法分为哮喘组和对照组,每组各24只。哮喘组应用卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。第1天(1d)、21d、34d天每组分别随机抽取8只检测血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肾组织TRPM6mRNA的表达。【结果】1d血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肾组织TRPM6mRNA表达水平哮喘组与对照组之间差异无显著性:[(0.85±0.07vs.0.89±0.12)mmol/L、(2.48±0.14vs.2.49±0.07)mmol/L、0.51±0.08vs.0.49±0.06,P均>0.05];21d哮喘组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肾组织TRPM6mRNA表达水平均显著低于对照组:[(0.84±0.09vs.0.95±0.07)mmol/L、(2.39±0.14vs.2.44±0.09)mmol/L、0.32±0.06vs.0.52±0.05,P均<0.05];34d哮喘组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肾组织TRPM6mRNA表达水平亦显著低于对照组:[(0.67±0.10vs.0.94±0.10)mmol/L、(2.17±0.08vs.2.43±0.08)mmol/L、0.24±0.05vs.0.53±0.06,P均<0.05]。肾组织TRPM6mRNA表达水平与血浆Mg2+浓度呈正相关(r=0.630,P<0.001);肾组织TRPM6mRNA表达水平与红细胞内Mg2+浓度呈正相关(r=0.715,P<0.001)。【结论】肾组织TRPM6mRNA的低表达可能是导致C57BL/6哮喘小鼠低镁血症的原因。

慢性阻塞性肺疾病患者血清MCP-4、TRPC6水平与肺功能及病情严重程度的关系

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者血清单核细胞趋化蛋白4(MCP-4)、经典瞬时感受器电位通道蛋白-6(TRPC-6)水平与肺功能及病情严重程度的关系。方法 选取2020年6月至2023年6月期间109例慢阻肺患者作为慢阻肺组,同期选取109例健康体检者作为对照组。根据全球慢阻肺倡议(GOLD),按照1秒用力呼气容积(FEV_(1))占预计值的百分比(FEV_1%)进行严重程度分级,将慢阻肺患者划分为轻度组30例,中度组34例,重度组27例,极重度组18例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清MCP-4、TRPC6的表达水平;Pearson法分析血清MCP-4、TRPC6和肺功能之间的相关性;多因素Logistic回归分析影响慢阻肺发生的因素。结果 与对照组相比,COPD组患者MCP-4、TRPC6表达水平均显著升高(P<0.05)。COPD组深吸气量(IC)、呼气峰值流速(PEF)、FEV_(1)%、1秒率(FEV_(1)/FVC)水平均低于对照组,残总比(RV/TLC)水平高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度、重度、极重度组COPD患者的MCP-4、TRPC6表达水平分别依次显著升高(P<0.05)。与轻度组相比,中度、重度、极重度组COPD患者IC、PEF、FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC水平依次显著降低,RV/TLC水平依次显著升高(P<0.05)。根据Pearson相关性分析,COPD患者MCP-4、TRPC6表达水平均与RV/TLC存在正相关性(P<0.05),与IC、PEF、FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC存在负相关性(P<0.05)。多因素Logistic回归分析发现,MCP-4、TRPC6、RV/TLC是影响COPD发生的危险因素(P<0.05),IC、PEF、FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC是影响COPD发生的保护因素(P<0.05)。结论 COPD患者血清MCP-4、TRPC6表达水平显著升高,与肺功能及疾病严重程度密切相关。

瞬时感受器电位C亚族蛋白6通道与肿瘤发生的研究进展

细胞内游离钙离子(Ca2+)与肿瘤关系密切,直接参与调控肿瘤的生长、侵袭、转移和分化。瞬时感受器电位(TRP)是细胞膜上的一种非选择性阳离子通道,且被认为是最可能的钙库操纵性钙通道和受体操纵性钙通道的分子基础。TRP通道C亚族蛋白(TRPC)在多种细胞中表达。近年研究多发现调控Ca2+进入细胞的TRPC6通道与多种癌症的发生和浸润转移有关。如果能阻遏此过程,可能对肿瘤的治疗提供一个新的思路。现对近年来TRPC6通道与肿瘤的关系的相关研究作一综述。

TRPC6在神经系统内的病理生理功能及机制

瞬时感受器电位经典通道6(TRPC6)自克隆至今,在呼吸、循环和泌尿系统中的研究进展较快。但近年的研究表明,其在神经发育与保护、学习记忆、阿尔茨海默病(AD)、疼痛调节等方面均发挥一定的病理生理功能。本文对其在神经系统内的功能和作用机制进行综述。

慢性低氧对大鼠左右心室的功能及TRPC亚家族表达的影响

目的:探讨慢性低氧3周对大鼠左右心室的影响以及规范性瞬时感受器电位亚家族(TRPC)在慢性低氧诱导的右心室心肌肥厚中的表达。方法:将SD雄性大鼠48只随机分为对照组(CON组)和慢性低氧肺动脉高压模型组(CH组)(n=24),CH组将大鼠置于连续的慢性低氧(10%±0.2%)环境饲养三周以诱导大鼠发生心肌肥厚。通过左、右心室插管法测定右心室内压(RVSP)、左心室内压(LVSP)、心率(HR)、平均体循环动脉压(mSAP)、左、右心室内压力最大上升速率(+dp/dtmax)、最大下降速率(-dp/dtmax)、右心肥大指数(RVMI)、左心肥大指数(LVMI);HE染色观察左、右心室心肌组织切片;通过SYBR Green荧光定量PCR法检测CON组、CH组大鼠的肥厚侧心室心肌组织编码TRPC1/3/4/5/6/7的mRNA表达;结合real-time RT-PCR结果对mRNA表达有显著变化的TRPC亚型通过免疫印迹法检测相应蛋白的表达。结果:与CON组相比:CH组的RVSP、RVMI、右心室±dp/dtmax显著增高(P<0.01),LVSP、左心室±dp/dtmax无显著变化,LVMI显著降低(P<0.01);CH组右心室心肌细胞显著增粗(P<0.01),细胞内肌原纤维数量增多,心肌纤维排列紊乱,细胞核深染,形状不整;左心室心肌纤维无明显改变;CH组编码TRPC1的mRNA和蛋白显著增高(P<0.05),而编码其余TRPC亚型的mRNA无显著变化。结论:慢性低氧3周可特异性诱导SD大鼠产生右心室心肌肥厚,上调了编码右心室心肌细胞TRPC1通道蛋白的mRNA和蛋白的表达,TRPC1可能参与了心肌肥厚的发生发展。

CaR调节TRPC6介导的自噬对软骨细胞SOD及NOX2的影响

目的观察钙敏感受体(CaR)调节瞬时感受器电位通道6(TRPC6)介导的自噬对软骨细胞超氧化物歧化酶(SOD)、NADPH氧化酶-2(NOX2)的影响。方法2023年7月将出生3~5 d SD大鼠关节软骨用胶原酶消化后进行传代培养,取第3代培养的细胞接种于96孔板,用白细胞介素-1β(10 ng/mL)诱导软骨细胞,分为对照组、CaR(10μg/L)组、U73122(5μg/L)组和CaR(10μg/L)+U73122(5μg/L)组,共培养24 h后应用酶联免疫吸附试验检测各组上清液SOD、NOX2水平,采用实时定量-聚合酶链反应检测各组SOD、NOX2、人自噬基因Beclin-1 mRNA表达,Western-blot检测SOD、NOX2、Beclin-1蛋白表达。结果原代关节软骨细胞在显微镜下呈三角形或不规则形或多角形,分布稀疏,培养24 h后可见贴壁生长;第3代软骨细胞显示其蓝染的细胞核,细胞间质及细胞质内偶见紫红色异染颗粒;细胞核染成蓝色,细胞质区呈棕黄色。对照组软骨细胞上清液SOD水平,SOD、Beclin-1 mRNA及其蛋白相对表达量,NOX2 mRNA相对表达量均明显低于CaR(10μg/L)组,NOX2水平、NOX2蛋白相对表达量均明显高于CaR(10μg/L)组,差异均有统计学意义(P<0.05);U73122(5μg/L)组和CaR(10μg/L)+U73122(5μg/L)组软骨细胞上清液SOD水平,SOD、Beclin-1 mRNA及蛋白相对表达量均明显低于对照组,NOX2水平、NOX2 mRNA及蛋白相对表达量均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CaR通过TRPC6介导的自噬降低软骨细胞氧化应激水平,可能是延缓骨关节炎发生、发展的重要机制。

银杏叶提取物对野百合碱诱导的大鼠右心室心肌肥厚的干预作用及其机制

目的:探讨银杏叶提取物对大鼠右心室心肌肥厚的干预作用及其机制。方法:72只SD大鼠随机分为3组,每组24只:对照组(CON组)、野百合碱诱导右心室心肌肥厚组(MCT组)、银杏叶提取物干预组(EGB组)。MCT组与EGB组首日均以2%MCT按60mg/kg剂量腹腔注射,注射后第2日开始,MCT组每日予2ml0.9%NaCl灌胃,EGB组以60mg/kg银杏叶提取物灌胃,对照组SD大鼠首日一次性腹腔注射2ml0.9%NaCl注射液。3周后检测各组大鼠心脏血流动力学变化、计算心脏重量指数、HE染色观察心肌病理形态学变化、RT-PCR法检测TRPC6mRNA表达和Westernblot法检测蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,MCT组反映右心室肥厚程度的指标如RVSP、RV±dp/dtmax及RVMI显著增加(P<0.01),而EGB早期干预组虽然与MCT组的各项指标有相同趋势的变化,但是EGB组各项指标变化的幅度均显著降低(P<0.01),且EGB组的心肌肥厚指数均显著低于MCT组(P<0.01);HE染色观察心肌形态学变化结果:MCT组呈典型心肌肥厚表现;EGB组右心室心肌细胞较MCT组有显著改善;MCT组及EGB组SD大鼠右心室TRPC6mRNA及蛋白相对表达水平升高(P<0.05),而EGB组较MCT组显著降低(P<0.05)。结论:银杏叶提取物可能通过降低TRPC6的表达阻碍心肌细胞中CaN/NFAT信号路径而发挥对心肌肥厚的早期保护作用。

6-姜酚抗大鼠运动病作用的内耳机制研究

目的探讨生姜有效成分6-姜酚抗运动病作用的内耳相关机制。方法SD大鼠30只,按照实验设计分为对照组、旋转组、6-姜酚(50 mg/kg)组、6-姜酚+钌红(5 mg/kg)组、单独钌红(5 mg/kg)组,每组6只。按照实验设计旋转刺激SD大鼠,诱导其产生对0.15%糖精溶液的条件性厌饮行为,模拟运动病。利用qRT-PCR、Western blotting、ELISA等生物技术检测大鼠内耳水通道蛋白2(AQP2)、血浆精氨酸加压素(AVP)的V2受体(V2R)和瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)mRNA和蛋白的表达水平,并观察TRPV4拮抗剂钌红对6-姜酚抗运动病效果的影响。结果6-姜酚抑制旋转刺激后,大鼠内耳AQP2 mRNA和蛋白的表达水平明显升高(P<0.05),TRPV4 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),并降低V2R mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。单独使用钌红(5 mg/kg)诱导,大鼠对糖精溶液的饮用量明显减少(P<0.01);在给予6-姜酚的同时使用钌红(5 mg/kg),则消除了6-姜酚预处理对旋转刺激后大鼠糖精溶液饮用量减少的抑制作用(P<0.01)。结论6-姜酚的抗运动病机制可能与其影响内耳V2R、TRPV4的转录和表达,进而影响AQP2的表达有关。

维生素D调节肠道钙吸收的研究进展

钙是人体内重要的常量元素,它主要来源于食物。通过肠道钙的吸收、肾脏钙的重吸收和骨的重建维持体内钙的稳态。维生素D是影响肠道钙吸收的主要因素,它在人体内经过一系列的代谢过程,生成具有极高生物学活性的1,25-(OH)2D,进入细胞中与维生素D受体结合,从基因水平调节钙吸收途径的多个位点。笔者主要对肠道钙吸收的跨细胞途径和细胞旁途径的多个维生素D调节位点进行综述。