与视皮层脑片膜片钳全细胞记录相结合的生物素标记技术

目的 在视皮层脑片膜片钳全细胞记录的同时 ,建立神经元的生物胞素标记技术。方法 利用盲法获得视皮层脑片膜片钳全细胞记录 ,在电生理记录的同时 ,Biocytin通过记录电极尖端灌注到所记录的细胞内 ,标记成功后再进行组织学染色。结果 能观察视皮层同一细胞的电生理和形态学特性及神经元之间的染色耦合。结论 本法操作简便 ,细胞标记成功率高 ,易于推广使用。

利用激光扫描共聚焦显微镜研究视皮层脑片长时程增强过程中核酸的变化(英文)

本文使用 1 5— 2 0天龄幼年大鼠视皮层脑片的标本 ,在通氧状态下 ,用荧光探针 AO染色 ,激光扫描共聚焦显微镜对全脑片不同层面进行共聚焦断层扫描 ,沿纵轴每 2 0μm扫一次 ,共扫描 1 6次。再利用总值方式的投影算法对其三维重建 ,分析幼年大鼠视皮层脑片长时程增强过程中核酸的变化。

视皮层LTP维持阶段的突触形态计量学研究

本实验使用１８～２０ｄ的幼年大鼠视皮层脑片标本，在ＬＴＰ出现后３ｈ取局部微脑片固定进行ＬＴＰ维持阶段超微结构的研究。分别与孵育相同时间而未予任何刺激的脑片和仅给予测试刺激的脑片作比较。运用图像分析仪分别对三组电镜结果进行以下参数的测量：（１）突触间隙的宽度；（２）突触后致密物（ＰＳＤ）的厚度；（３）活性区的长度；和（４）突触界面曲率。用双盲法对突触数目进行计量，并用立体计量学方法对各种突触类型进行定量，所得数据用方差分析进行统计学处理。结果显示：（１）ＬＴＰ形成后１５ｈ左右，其反应达到峰值，然后维持在最高水平一直到３ｈ仍无下降趋势；（２）突触间隙的宽度较两个对照组明显增宽；（３）ＰＳＤ的厚度也明显增厚；（４）活性区的面密度及突触界面曲率明显增加；（５）总突触数目和棘突触数目的数密度较空白对照明显增高；（６）穿孔性突触的数密度与对照组相比明显增加。结果提示：活性区面密度的增加及突触界面曲率的增大可能是ＬＴＰ维持的形态学基础。穿孔性突触的形成与ＬＴＰ的维持密切相关。

三维显示视皮层长时增强过程中DNA/RNA分布的定量分析

激光扫描共聚焦显微镜可对数百 μm厚的组织切片进行共聚焦扫描 ,获得连续的共聚焦平面图像系列 ,通过计算机三维重建算法得到相应组织的立体图像。本文使用 15- 2 0天龄幼年大鼠视皮层脑片的标本 ,在通氧状态下 ,用荧光探针AO染色脑片 ,激光扫描共聚焦显微镜对全脑片不同层面进行共聚焦断层扫描 ,沿纵轴每 2 0 μm扫一次 ,共扫描 16次。再利用总值方式的投影算法对其三维重建 ,得到幼年大鼠视皮层脑片的DNA/RNA分布的立体图像。

吗啡成瘾对视皮层突触可塑性的影响

采用离体脑片灌流的电生理技术，观察吗啡成瘾大鼠的视皮层诱发场电位及其特点。结果显示：吗啡成瘾可以明显易化视皮层诱发场电位，使出现长时程增强（ｌｏｎｇｔｅｒｍｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ＬＴＰ）样变化，而且强直刺激对其增长的影响不大。结果提示：成瘾性ＬＴＰ与强直性ＬＴＰ现象可能具有相同的机制。

激光共聚焦扫描观察脑片及其神经元内RNA与DNA变化的技术

本研究采用双重染料 Acridine Orange( AO)对常规长时程增强 ( LTP)电生理实验后的视皮层脑片进行荧光标记 ,并应用激光共聚焦扫描显微镜 ( confocal laserscanning microscope,CLSM) ,测定 LTP形成过程中脑片局部 RNA和 DNA的变化。结果表明 :长时程增强的诱导期与维持期脑片与空白对照组比较 ,视皮层 OC1区局部 RNA显著增高。此外 ,本研究还对使用激光扫描共聚焦显微镜测定海马脑片内神经元核酸含量的方法进行了探索。