机械敏感通道蛋白Piezo在眼球组织中的表达分布研究

目的探索机械敏感通道蛋白Piezo1和Piezo2在眼球的表达分布。设计实验研究。研究对象12周龄的成年雄性C57BL/6N小鼠9只(9眼),成年雄性Piezo1^(td-Tomato)小鼠3只(3眼),人眼球石蜡切片1张。方法通过RNAscope荧光原位杂交实验检测Piezo1和Piezo2 mRNA在C57BL/6N小鼠眼球视神经冰冻切片上的表达;通过实时荧光聚合酶链反应定量实验(qPCR)检测Piezo1和Piezo2 mRNA在C57BL/6N小鼠眼球中的相对表达量;通过免疫印迹实验检测Piezo1和Piezo2蛋白在C57BL/6N小鼠眼球中的表达;通过免疫荧光染色实验检测Piezo1-tdTomato蛋白在Piezo1^(td-Tomato)小鼠眼球视神经冰冻切片中的表达;通过免疫荧光染色实验检测人眼球石蜡切片中Piezo1蛋白的表达分布。主要指标相对荧光强度,循环阈值(Ct值)。结果RNAscope荧光原位杂交实验显示Piezo1 mRNA在角膜、虹膜、睫状体、晶状体上皮、巩膜、视网膜、视盘胶质筛板区的神经组织中表达,Piezo2 mRNA在角膜、虹膜和巩膜组织表达。眼球组织的qPCR实验显示:在角膜、虹膜、晶状体、视网膜、视盘胶质筛板区的神经组织、巩膜和眼外肌组织中,Piezo1 cDNA的平均Ct值均<30;在晶状体和视网膜组织中,Piezo2 cDNA的平均Ct值>30。眼球组织的免疫印迹实验显示:Piezo1蛋白在角膜、虹膜、晶状体、视网膜、视盘胶质筛板区的神经组织、巩膜和眼外肌中表达;Piezo2蛋白在角膜、虹膜和巩膜中表达。Piezo1^(td-Tomato)小鼠眼球冰冻切片的免疫荧光染色显示,Piezo1-tdTomato蛋白在眼球视盘胶质筛板区的神经组织中表达。人眼球石蜡切片的免疫荧光染色也显示,Piezo1蛋白在视盘筛板区的神经组织中表达。结论机械敏感通道蛋白Piezo1在小鼠眼球组织中广泛表达,包括眼前段、眼后段及视盘胶质筛板区的神经组织。Piezo1蛋白在人眼球的视盘筛板区明确表达,可能是该区域感受并响应眼压、视神经鞘膜间隙脑脊液压力及它们之间压力差变化的重要力学传感器。