视紫红质蛋白激酶抑制剂对兔增生性玻璃体视网膜病变的作用

目的分析视紫红质蛋白激酶(ROCK)抑制剂Y27632对兔增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的作用。方法培养兔视网膜色素上皮(RPE)细胞。相差显微镜及免疫荧光染色检测Y27632对RPE细胞平滑肌肌动蛋白(SMA)压力纤维形成的影响。体外Ⅰ型胶原凝胶收缩试验和噻唑蓝(MTT)试验来检测Y27632对细胞收缩力量和增殖的影响。用第6代兔RPE细胞建立兔PVR模型,玻璃体腔内给予50μmol/LY27632,每周1次,持续28d,以牵拉性视网膜脱离的发生率来评估药物的体内效应。行视觉电生理和组织学检查以分析该药的毒性。结果50μmol/LY27632破坏了兔RPE细胞αSMA压力纤维的形成,并减弱了RPE细胞产生的收缩力(P<0.01);RPE细胞的增殖不受Y27632的影响。Y27632用药组的牵拉性视网膜脱离的发生率降低(P<0.01)。在用药组中,未发现明显的视网膜组织结构和功能的损害。结论特异性ROCK抑制剂Y27632可减弱RPE细胞产生的收缩力,并且可阻止兔PVR的发展。该药无明显的副作用,有可能成为一种防治PVR的有效方法。

胰岛素样生长因子1受体抑制剂对甲磺酸伊马替尼继发耐药性胃肠道间质瘤细胞增殖及蛋白激酶B蛋白磷酸化的影响

目的探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂AG-1024对甲磺酸伊马替尼继发耐药性胃肠道间质瘤(GIST)细胞增殖及蛋白激酶B(Akt)蛋白磷酸化的影响。方法采用甲磺酸伊马替尼诱导GIST-T1细胞以建立继发耐药性细胞系。将继发耐药性GIST-T1细胞分为对照组(0μmol/L AG-1024)以及5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L AG-1024组,给予相应浓度AG-1024干预12 h、24 h、48 h后,检测细胞增殖情况。将继发耐药性GIST-T1细胞分为AG-102412 h组、AG-102424 h组、AG-102448 h组和对照组,各AG-1024组加入10μmol/L AG-1024干预相应的时间,对照组加入等体积的二甲亚砜(干预即刻收集细胞),检测各组细胞Akt蛋白、磷酸化Akt蛋白表达水平。结果(1)各浓度AG-1024组的吸光度值呈下降趋势;同一时间点,各浓度AG-1024组的吸光度值均低于对照组,且10μmol/L AG-1024组与20μmol/L AG-1024组的吸光度值低于5μmol/L AG-1024组(均P<0.05),但10μmol/L AG-1024组与20μmol/L AG-1024组差异无统计学意义(P>0.05)。(2)AG-102412 h组、AG-102424 h组、AG-102448 h组和对照组Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);对照组、AG-102412 h组、AG-102424 h组、AG-102448 h组细胞磷酸化Akt蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。结论IGF-1R抑制剂AG-1024可抑制甲磺酸伊马替尼继发耐药性GIST-T1细胞的增殖,且呈一定的时间依赖性,抑制磷脂酰肌醇3-激酶/Akt信号通路中Akt的磷酸化可能是其作用机制之一。

转化生长因子β_1的c-jun氨基端激酶和p38蛋白激酶通路及其抑制剂与纤维化

转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β-)是一个多功能肽类生长因子,对生长、分化、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积和免疫应答有广泛的潜在作用.TGF-β1是体内最有力的促纤维化因子之一,已表明其是多种组织纤维化发生的关键介导者.

P38 MAPK抑制剂在高糖诱导系膜细胞CTGF表达和基质蛋白分泌中的作用

目的:探讨P38 MAPK抑制剂SB203580在高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞对丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)与结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达和细胞外基质蛋白分泌的作用。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为4组:正常对照组(NG组,5.5 mmol/L葡萄糖);渗透压对照组(NG+M组,5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇);高糖组(HG组,30 mmol/L葡萄糖);高糖+SB203580组(HG+SB203580组,30 mmol/L葡萄糖+10μmol/L SB203580),分别给予不同刺激。48 h收集细胞,分别提取系膜细胞蛋白、RNA及细胞上清液。采用Western blot检测MKP-1、p38 MAPK及磷酸化p38MaPK的表达;RT-PCR检测p38 MAPK、MKP-1、CTGF和FN mRNA的表达;ELISA法测定细胞上清CTGF和纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)含量,放免法测定细胞上清液Ⅳ型胶原的含量。结果:与NG组相比,HG组系膜细胞MKP-1表达下调,p38 MAPK蛋白表达无明显差别,但磷酸化的p38 MAPK表达明显升高,MKP-1 mRNA表达下降,p38 MAPK、CTGF和FN mRNA的表达增加,细胞上清液中CTGF、FN和Ⅳ型胶原含量增加;与HG组相比,HG+SB203580组MKP-1表达升高,p38 MAPK蛋白表达无明显差别,但磷酸化的p38MAPK表达明显下降,p38 MAPK、CTGF和FN mRNA的表达下降,系膜细胞上清液中CTGF、FN和Ⅳ型胶原含量下降。结论:p38 MAPK抑制剂SB203580通过增强MKP-1的表达,增强p38 MAPK去磷酸化,使p38 MAPK活性下降,从而阻断CTGF的合成和细胞外基质蛋白表达,在糖尿病肾病细胞外基质重构中发挥保护作用。

细菌视紫红质用于光子逻辑门的研究

本文对基于细菌视紫红质变种材料 D96N的三种基本光逻辑操作进行了研究 .随着入射黄光强度的增加 ,菌紫质对黄光的吸收呈饱和吸收特性 ,此时紫光的照射将会使此饱和吸收阈值增加 .在黄光和紫光对样品的共同作用下 ,透射光强度会被调制 ,调制的程度取决于这两束光的相对强度以及被调制光波长 .通过观测被调制的 52 5nm检测光强度 ,我们模拟了几种基本的光子逻辑运算 :“非”、“或”和“与”运算 .

Triton X-100对细菌视紫红质中间产物M_(412)的效应

本文研究用非离子表面活性剂Triton X-100处理后的细菌视紫红质（BR Bacteriorhodo-psin）光循环中间产物M412动力学过程的变化.实验结果表明,用不同浓度的Triton处理pH=6.5的BR体系时,其中间产物M412.快衰减成分的半衰期(τ1/2f)在Triton浓度为0.05%（w/w）附近突然变慢,随着Triton浓度的加大,τ1/2f又逐渐加快;慢衰减部分的半衰期(τ1/2s)则随Tri-ton浓度的增加逐渐变慢.BR的生色团峰发生蓝移.说明不同浓度的Triton在水溶液中聚集状态不同,可不同程度地破坏膜脂的液晶态结构,从而导致镶嵌在其中的BR发生构象的变化,使转运质子的氢键通道受到不同程度的影响,故质子泵转运通道发生改变、致使M412的衰减速率改变.

细菌视紫红质光开关特性实验研究

介绍实现光子开关材料 BR分子的重要性。理论上分析 BR分子材料光学特性 ,实验观测 BR分子材料在 4 0 0 nm和 632 nm光照射下的相互抑制作用 ,最后分析 BR的光子开关特性。

曲古抑菌素A通过调控蛋白激酶C促进食管鳞癌细胞迁移

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人食管鳞癌细胞(ESCC)迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法培养食管鳞癌细胞KYSE-150和EC9706;Transwell法检测TSA、蛋白激酶C(PKC)抑制剂AEB071对食管鳞癌细胞迁移的影响;观察TSA、PKC抑制剂AEB071对人食管鳞癌细胞形态学的影响;Western blotting检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)、Slug、ac H3和H3蛋白的表达水平。结果TSA促进食管鳞癌细胞的迁移,PKC抑制剂AEB071部分抑制TSA促进食管鳞癌细胞的迁移作用;TSA促使细胞由类椭圆形的上皮样细胞形态向类似梭形的成纤维细胞样形态的上皮-间质转化(EMT),AEB071抑制TSA诱导的细胞形态学变化;TSA处理后E-cadherin蛋白表达水平降低,vimentin、β-catenin、Slug、ac H3表达水平升高,联合应用TSA与AEB071,TSA诱导的上述EMT相关蛋白水平的变化得到部分抑制,使E-cadherin蛋白表达水平增加,vimentin、β-catenin、Slug表达水平降低。结论TSA通过促进食管鳞癌细胞EMT增加其迁移能力,其机制可能由PKC相关信号通路介导。

MMP-9抑制剂对人口腔鳞状细胞癌细胞系CAL27生物学行为影响机制的研究

目的:探究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)抑制剂(BB-94)对人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞系CAL27恶性生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:用含不同浓度(0、0.125、0.25、0.5、1.0μg/mL)BB-94培养液培养对数生长期CAL27细胞48 h,明胶酶谱实验分析细胞培养上清液中MMP-9的活性;细胞计数试剂盒-8(cell counting kit‐8,CCK-8)实验检测细胞存活率;流式细胞术、伤口愈合实验及Transwell实验检测CAL27细胞凋亡、迁移及侵袭情况;实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测PI3K、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated proteinkinaseB,又称p-Akt)、MMP-9、波形蛋白(vimentin,Vim)、神经钙黏素(N-cadherin,N-cad)、上皮钙黏素(E-cadherin,E-cad)表达情况。结果:CAL27细胞MMP-9相对活性、存活率、划痕愈合率、细胞侵袭数、PI3K和Akt mRNA相对表达水平及PI3K、p-Akt、Vim、N-cad、MMP-9蛋白相对表达水平均随BB-94作用浓度增大而降低(P<0.05),CAL27细胞凋亡率、E-cad蛋白相对表达水平均随BB-94作用浓度增大而升高(P<0.05)。结论:MMP-9抑制剂可抑制人口腔鳞状细胞癌细胞系CAL27恶性生物学行为,其作用机制可能与阻止PI3K/Akt信号通路激活及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)进展有关。

蛋白激酶C抑制剂对人角膜基质细胞增殖周期的调控作用

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)的抑制剂星状孢菌素 (ST)对人角膜基质细胞在G1/S时相阶段的调控作用及分子机制。方法 流式细胞仪 (FCM)测量PKC抑制剂ST对人角膜基质细胞周期的影响 ,cyclin/DNA双参数法检测细胞周期蛋白E(cyclinE)蛋白含量。 结果 ST使人角膜基质细胞阻滞在G1期 ,实验组G1期细胞百分比 (2 5 μg/LST组为 78 4 % ,5 μg/LST组为 90 9% )明显高于对照组 (72 4 % ) ,并呈现剂量依赖性 ;cyclin/DNA双参数流式细胞术分析显示ST使G1期细胞cyclinE蛋白水平下降 ,同时G1期细胞数增加。结论 PKC抑制剂ST能调控人角膜基质细胞的周期 ,并在G1/S时相发挥其抑制细胞生长的作用。

蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素对肺腺癌A549细胞侵袭力的影响研究

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂星形孢菌素(STS)对肺腺癌A549细胞侵袭移动的影响及作用机制。方法:取A549细胞加入不同浓度STS(1、10、100 nmol.L-1)处理后,应用Transwell小室检测A549细胞移动抑制率和侵袭抑制率;免疫荧光染色法检测细胞内蛋白水解酶基质金属蛋白水解酶-9(MMP-9)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)蛋白表达;激光共聚焦法观测细胞内骨架蛋白微管蛋白α-tubulin的分布,Western blot法检测胞膜和胞浆内PKC-α活性。同时设立不加STS处理的对照组进行比较。结果:与对照组比较,A549细胞的移动抑制率、侵袭抑制率、MMP-9和uPA蛋白表达量均明显下降(P<0.05或P<0.01);胞浆内α-tubulin蛋白分布不均;胞膜内PKC-α蛋白含量减少,而胞浆内PKC-α蛋白含量无明显变化。结论:PKC抑制剂STS能抑制A549细胞移动和侵袭;其机制可能与抑制PKC-α的活性,减弱肿瘤细胞中MMP-9、uPA表达,诱导肿瘤细胞骨架变化相关。

丝裂酶原活化蛋白激酶激酶1／2抑制对家兔关节软骨保护作用的研究

目的评价丝裂酶原活化蛋白激酶（mitogen—activated protein kinase，MAPK）信号转导通路中MAPK激酶1／2（MEKI／2）在骨关节炎发病过程中的作用。方法新西兰家兔30只，制作OA模型，随机分成3组，每组10只。从造模术后第4天开始，第1组和第2组分别注射100μmol／L和40μmol／L的PD98059，第3组注射PBS液体作为安慰剂对照组，每周2次。另取10只家兔，正常关节内注射PBS液体作为正常对照组。8周后处死动物，进行股骨髁关节软骨退变的大体评分。用Western Blot印记杂交法测定软骨组织中ERK1／2以及磷酸化ERK1／2的表达。用实时定量PCR方法测定基质金属蛋白酶-1／13（MMp-1／13）的mRNA表达水平。结果与使用PBS的安慰剂对照组相比，使用PD98059的关节软骨破坏明显减轻。磷酸化的ERK1／2在100μmol／LPD98059干预组明显低于40μmol／L干预组和安慰剂对照组。而MMP-1／13的mRNA表达在不同浓度的干预组均低于安慰剂对照组。结论MAPK信号转导通路参与了骨关节炎关节软骨破坏的病理过程。MEK1／2选择性阻滞剂PD98059可以在关节炎动物活体内有效抑制关节炎软骨破坏的程度，该作用可能与其有效抑制ERK1／2的磷酸化激活有关。

表面活性剂CHAPS对紫膜脂双层微环境的作用

利用顺磁性自旋标记技术 ,探测在表面活性剂CHAPS(3 -[(3 -Cholamidopropyl)dimethyl-ammonio]propanesulfonicacid )作用下 ,紫膜脂双层微环境的物理参数 (序参数S和旋转相关时间τc)的变化。实验结果表明 :CHAPS的增溶过程对紫膜的表层微环境和深层微环境的影响不同。表层序参数S值随CHAPS浓度的增加而逐渐减小 ;深层旋转相关时间τc值开始随CHAPS浓度的增加而增大 ,在CHAPS浓度为5mmol/l时 ,τc值呈现最大值 ,随着CHAPS浓度的继续增大 ,τc值逐渐减小并趋近于恒定。

基于菌紫质的光开关原型器件研究

本文分析和讨论了细菌视紫红质的饱和吸收特性及互补抑制特性，在此基础上进行了细菌视紫红质光开关的实验研究。研究证明了被激发到M态的细菌视紫红质分子对紫光有较大的吸收，而处于基态的分子则对黄光有较大吸收。随着入射黄光强度的增加，菌紫质对黄光的吸收呈饱和吸收特必,时菌紫质对紫光呈较大吸收，而较强的紫光照射将会使此饱和吸收阈值增加，使得菌紫质对黄光的吸收又增大，从而黄光和紫光表现出互补透射特性。利用紫光和黄光控制菌紫质分子在M态和基态上的分布，我们实现了对不同的波长光和选通或者关闭，即光开关模型。

基于细菌视紫红质光子逻辑门的实验研究

研究了基于细菌视紫红质 (简称BR或菌紫质 )变种材料D96N的 3种光逻辑操作 .在 6 33nm激发光照射下 ,菌紫质分子会被激发到M态 ,处于M态的菌紫质对 4 12nm的紫光呈较大吸收 ,会抑制同时入射的紫光 .选择合适的紫光强度 ,通过CCD观测被抑制的 4 12nm检测光透射强度分布 ,模拟了“非”、“或非”、“与非”几种基本的光子逻辑操作 .

肿瘤上皮间质转化中TGF-β作用机制及其活化酶抑制剂研究进展

目的综述近年来肿瘤上皮间质转化(EMT)中转化生长因子(TGF)-β作用机制及其活化酶抑制剂(TAK1)研究进展。方法查阅国外相关文献,对TGF-β介导EMT的信号转导过程及TAK1抑制剂的研究现状进行归纳总结。结果 TGF-β是调控EMT的主要机制之一,其复杂的信号传导网络可分为Sm ad依赖通路和非Sm ad依赖通路,TAK1是启动非Sm ad途径下游信号转导通路的重要蛋白激酶。结论 TAK1可作为阻断TGF-β介导的EMT发生的有效靶点,目前研究显示有3种结构类型的化合物对TAK1具有选择抑制活性。

丝裂原活化蛋白激酶在肿瘤坏死因子α诱导滋养层细胞MMP-9基因表达中的作用

目的探讨早孕滋养层细胞有节制地侵入机制,研究肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导滋养层细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)基因表达的调控机制。方法2004年南方医科大学南方医院将10-4g/LTNFα分别处理滋养层细胞0、5、10、20、30min后,应用细胞ELISA法测定滋养层细胞中蛋白激酶的活性变化;预先给予丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的特异性抑制剂处理滋养层细胞30min,然后给予10-4g/LTNFα处理滋养层细胞24h,应用反转录聚合酶链反应(RTPCR)检测滋养层细胞MMP9基因表达的变化。结果发现10-4g/LTNFα均能迅速激活滋养层细胞的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、cjun氨基末端激酶(JNK)、p38MAPK激酶活性。TNFα刺激滋养层细胞引起MMP9mRNA表达显著增加,其能被ERK或p38MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论ERK和p38MAPK可能是TNFα诱导滋养层细胞MMP9基因表达增加的重要调节物质。

丝/苏氨酸蛋白激酶Polo-like Kinase 1研究进展

Plk1是真核生物细胞分裂的重要调控因子。RNA干扰和小分子抑制剂等新技术的应用增加了对Plk1在有丝分裂中功能、底物和调控机制的认识。Plk1不仅在有丝分裂早期参与调节中心体成熟和双极纺锤体的形成,而且在胞质分裂、DNA损伤检验点甚至DNA复制中也有重要作用。该综述比较全面地讨论了Plk1在细胞分裂周期中的作用,重点介绍了Plk1在有丝分裂后期和间期作用的新发现,并就Plk1作为抗肿瘤药物作用靶点的研究进展做了总结。

血清NGAL、Cys-C和RBP联合检测对早期肾损伤的诊断价值

目的:分析血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys-C)和尿视黄醇结合蛋白(RBP)的检测在早期肾损伤诊断中的价值。方法:选取2021年5月至2022年8月广东省中西医结合医院收治的47例早期肾损伤患者作为观察组,再选取同期40例健康体检者作为对照组。比较两组研究对象的血清NGAL、Cys-C和RBP水平,分析各指标的诊断价值,并分析肾损伤分级与NGAL、Cys-C、RBP的相关性。结果:观察组患者的血清NGAL、Cys-C和RBP水平均显著高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的NGAL、Cys-C和RBP异常率均显著高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);经Spearman相关性分析,NGAL、Cys-C、RBP与肾损伤分级均呈正相关(r=0.759、0.683、0.711,P均<0.05)。结论:早期肾损伤患者的NGAL、Cys-C和RBP水平会显著升高,三项指标联合检测对患者的早期肾损伤诊断与治疗具有一定的指导作用。