光遗传学工具蛋白视紫红质通道蛋白-2的结构与特性介绍

视紫红质通道蛋白-2(ChR2)来自莱茵衣藻,由通道蛋白-2(Chop2)与视黄醛结合形成,属于视蛋白的一种,在470nm左右蓝光照射下,ChR2分子构象发生变化形成非选择性阳离子通道,对一价阳离子Na^+、K^+、H^+等和二价阳离子Ca^(2+)等具有通透性,使细胞膜电位变为内正外负,引起细胞去极化兴奋,进而改变细胞的膜电势产生感应电流。ChR2是光遗传学中应用最为广泛的兴奋性光敏蛋白之一,发现和诱导了多种突变体,可根据需要选择其中某种进行相关研究。

血清及尿β_(2)微球蛋白、视黄醇结合蛋白、水通道蛋白-2与肾盂输尿管连接部梗阻致小儿肾积水严重程度的关系研究

目的探讨血清及尿β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、视黄醇结合蛋白(RBP)、水通道蛋白-2(AQP2)与肾盂输尿管连接部梗阻(UPJO)致小儿肾积水严重程度的关系。方法选取南宁市第六人民医院泌尿外科接受肾盂输尿管梗阻手术治疗的60例肾积水患儿为肾积水组,根据肾积水严重程度分为轻度组(n=13)、中度组(n=22)和重度组(n=25),另外选取同期该院接受体检的60例健康儿童为对照组。比较对照组和肾积水组不同严重程度患儿血清及尿β_(2)-MG、RBP、AQP2水平;分析β_(2)-MG、RBP、AQP2水平与超声参数[肾盂前后径(APD)、肾实质厚度(PT)]的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清及尿β_(2)-MG、RBP、AQP2对中重度肾积水的诊断效能。结果肾积水组血清及尿β_(2)-MG、RBP水平均高于对照组,血清及尿AQP2水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。肾积水患儿血清β_(2)-MG、尿β_(2)-MG、尿RBP水平和APD水平由低到高为轻度组、中度组、重度组,尿AQP2水平和PT由高到低为轻度组、中度组、重度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。轻度组血清RBP水平低于中度组和重度组,差异有统计学意义(P<0.05)。肾积水患儿血清β_(2)-MG、尿β_(2)-MG、尿RBP水平与APD均呈正相关,与PT均呈负相关(P<0.05);尿AQP2水平与APD呈负相关,与PT呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清β_(2)-MG、尿β_(2)-MG、尿RBP、尿AQP2检测对中重度肾积水均具有一定诊断价值,曲线下面积(AUC)分别为0.652、0.688、0.859、0.680,尿RBP诊断中重度肾积水的AUC显著大于其余指标(P<0.05)。结论血清β_(2)-MG、尿β_(2)-MG、尿RBP、尿AQP2与UPJO致小儿肾积水严重程度相关,尿RBP对中重度肾积水的诊断效能优于其他指标。

负载紫红质通道蛋白2重组腺病毒的包装及功能鉴定

背景紫红质通道蛋白2（ChR2）是从单细胞绿藻莱茵衣藻上分离的一种光敏感通道蛋白，可作为光刺激神经细胞的手段，与电、磁和超声波相比，光在时间和空间上对神经细胞的刺激将更精确。目的构建负载ChR2基因的重组腺病毒，并鉴定其功能。方法将人胚肾293（HEK293）细胞在含质量分数10％胎牛血清的DFl2培养基中进行培养及传代。腺病毒穿梭质粒pSB291-hCHR2-GFP与腺病毒包装质粒pBHGloxAEI，3Cre共转染HEK293，包装得到少量负载ChR2基因的重组腺病毒（Ad—ChR2），经HEK293细胞扩增、CsCl梯度离心，Tris—HCl透析后得到纯化Ad—ChR2。获取4只出生1d的清洁级LongEvans大鼠视皮层组织，用组织块培养法利用无血清培养基原代培养视皮层细胞，用纯化的Ad—ChR2转染培养的视皮层细胞，当转染成功的视皮层细胞表达绿色荧光时给予460hill蓝光刺激，应用膜片钳技术记录视皮层细胞的动作电位。结果纯化浓缩后的Ad—ChR2滴度可达7．9×10^10PFU／ml，HEK293细胞转染Ad—ChR224h后倒置荧光显微镜下即可见细胞膜上有绿色荧光表达，转染13d可见细胞由扁平变为圆形。无血清培养的视皮层细胞转染纯化的Ad—ChR2后细胞膜上可见绿色荧光蛋白（GFP）的表达，460nm蓝光刺激后用膜片钳技术可记录到蓝光诱发的视皮质细胞的动作电位。结论本研究成功构建了负载ChR2基因的重组腺病毒表达载体，并证实ChR2能够感染有功能的视皮质细胞，这对视觉可塑性方面的研究非常重要。

人睫状肌细胞中核转录因子抑制因子-α与基质金属蛋白酶-2作用机制研究

目的探讨在人睫状肌(human ciliary muscle,HCM)细胞中,基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达和核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号转导通路之间的关系。方法合成针对人核转录因子抑制因子-α(inhibitorαof nuclear factor-kappa B,IκBα)siRNA片段,并将其转染入HCM中,分别于转染后24 h、48 h、72 h利用RT-PCR和Western blot法检测IκBα、NF-κB p65和MMP-2 mRNA和蛋白水平的表达情况。Zymography技术检测酶原形式的MMP-2(pro-MMP-2)和活性形式的MMP-2(active-MMP-2)的表达变化。结果转染IκBαsiRNA进入HCM后24 h、48 h、72 h,IκBαmRNA水平和蛋白水平均下降(均为P<0.05)。IκBαsiRNA转染入HCM 24 h、48 h、72 h,实验组NF-κB p65总mRNA水平和蛋白水平变化均无显著差异(均为P>0.05),但细胞核内的NF-κB p65蛋白表达却大幅度升高(均为P<0.05)。MMP-2 mRNA水平和蛋白水平的表达在IκBαsiRNA转染入HCM细胞后各时间点均有上升,转染后72 h表达最高(均为P<0.05)。Pro-MMP-2和active-MMP-2的表达也在转染后各时间点不同程度增加,峰值也是出现在转染后72 h,分别为170.2%±10.4%和151.8%±8.4%(均为P<0.05)。各时间点pro-MMP-2、active-MMP-2均较空白对照组表达增加(均为P<0.05)。结论在HCM细胞中通过抑制IκBα表达,引起NF-κB p65的激活,转位入HCM细胞核,促进了MMP-2分泌和活化,从而降解HCM细胞外基质,增加葡萄膜巩膜房水外流。

血清β_2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、胱抑素C、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白及基质金属蛋白酶2多指标联合检测在糖尿病肾病患者中的价值

目的探讨糖尿病肾病(DN)患者应用血清β_2微球蛋白(β_2-MG)、视黄醇结合蛋白(RBP)、胱抑素C(Cys C)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)多指标联合检测的价值。方法选择260例T2DM患者,根据尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)将其分为DN组(UACR 30~<300μg/mg)112例与单纯T2DM组(UACR<30μg/mg)148例。选择同期进行体验的130例健康对象作为对照组。比较3组研究对象血清β_2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2水平,DN组血清β_2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2与联合检测的阳性率。分析UACR与β_2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2的相关性。结果 3组研究对象血清β_2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2水平对比差异有统计学意义,即DN组血清β_2-MG、RBP、Cys C、NGAL>单纯T2DM组>对照组(P<0.05),MMP-2<单纯T2DM组<对照组(P<0.05)。DN组联合检测阳性率88.39%,均显著高于单纯β_2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2阳性率62.50%、60.71%、59.82%、60.71%、63.39%(P<0.05)。UACR与β_2-MG、RBP、Cys C、NGAL呈正相关性(P<0.01);UACR与MMP-2呈负相关性(P<0.01)。结论血清β_2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2多指标联合检测可作为DN的有效诊断与监控指标。

血清RBP4、NGAL、CysC、IL-2、白蛋白球蛋白比值在老年慢性肾脏病中的变化特点及意义

目的探讨血清视黄醇结合蛋白(RBP)4、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、胱抑素(Cys)C、白细胞介素(IL)-2、白蛋白球蛋白比值在老年慢性肾脏病患者中的变化特点及意义。方法选取2019年2~7月天津市中医药研究附属医院收治的老年慢性肾脏病患者90例为慢性肾脏病组,同年龄段的健康志愿者30名为健康对照组。采集空腹外周静脉血4 ml,检测血清RBP4、NGAL、CysC、IL-2、总蛋白、白蛋白浓度,计算白蛋白球蛋白比值。采用肾动态显像法检测肾小球滤过率,进行疾病分期。进行1年的随访,根据随访结束时肾小球滤过率变化情况分为肾功能恶化组和肾功能稳定组。结果慢性肾脏病组血清RBP4、NGAL、CysC水平明显高于健康对照组,血清IL-2、白蛋白球蛋白比值明显低于健康对照组(P<0.01)。随着疾病分期的增加老年慢性肾脏病患者血清RBP4、NGAL、CysC水平明显升高,IL-2、白蛋白球蛋白比值明显降低(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,老年慢性肾脏病患者肾小球滤过率与血清RBP4、NGAL、CysC呈显著负相关(P<0.01);与血清IL-2、白蛋白球蛋白比值呈显著正相关(P<0.01)。随访1年期间90例患者中肾功能恶化56例(62.22%),肾功能稳定34例(37.78%)。肾功能恶化组血清RBP4、NGAL、CysC水平明显高于肾功能稳定组,血清IL-2、白蛋白球蛋白比值明显低于肾功能稳定组(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清RBP4、NGAL、CysC、IL-2、白蛋白球蛋白比值单独和联合检测对老年慢性肾脏病患者肾功能恶化均具有较高的预测价值(P<0.05);其中联合检测的预测价值最高,特异度和阳性预测值明显高于各指标单独检测。结论老年慢性肾脏病患者血清RBP4、NGAL、CysC高表达,IL-2、白蛋白球蛋白比值低表达,且与肾小球滤过率密切相关,联合检测可用于预测肾功能恶化情况。

血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2联合检测对糖尿病肾病的诊断价值

目的观察中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、胱抑素C(CysC)、视黄醇结合蛋白(RBP)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)联合检测诊断2型糖尿病肾病(T2DN)的价值。方法 149例2型糖尿患者依据尿蛋白结果分成3组:正常蛋白尿组(NA组),微量蛋白尿组(MA组)和临床肾病组(CN组)。选取同期50例健康体检者为对照组(NC组)。分析并比较各组血清NGAL、CysC、RBP、MMP-2水平。结果 NA组、MA组和CN组血清中NGAL、CysC、RBP水平显著高于NC组(P<0.05或P<0.01),MMP-2水平显著低于NC组(P<0.01)。NA组、MA组、CN组NGAL、CysC、RBP及MMP-2联合检测的阳性率分别为66.0%、85.7%、92.0%,均高于单项检测的阳性率(P<0.05)。NGAL与CysC、RBP呈正相关(P<0.05),与MMP-2呈负相关(P<0.05)。结论 DN患者中血清NGAL、CysC、RBP显著升高,MMP-2显著降低,联合检测可作为DN的早期监控评估指标。

KCNE2对胃癌细胞上皮间质转化和PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨钾离子通道蛋白家族成员2(KCNE2)在胃癌细胞增殖、迁移侵袭和上皮间质转化(EMT)中的作用及其对磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法采用GEPIA和UALCAN分析KCNE2在胃癌组织中的表达。收集胃癌肿瘤组织和胃癌细胞系(MKN-1、MKN-28、SGC-7901、MKN-45和MGC-803)用于检测KCNE2表达;采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验进行生存分析。将MKN-45和MGC-803细胞分为pcDNA3.1组(阴性对照)和pcDNA3.1-KCNE2组(KCNE2过表达),CCK-8、伤口愈合实验和Transwell小室实验评估细胞的增殖、迁移和侵袭情况,qPCR和Western blot检测波形蛋白、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)和磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-AKT)的表达。结果KCNE2在胃癌组织中表达下调,与胃癌分期、分级和淋巴结转移有关(P<0.05)。与GES-1细胞相比,KCNE2在胃癌细胞中低表达(P<0.05)。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-KCNE2组MKN-45和MGC-803细胞的增殖、伤口愈合率、侵袭细胞数和EMT过程均受到抑制(P<0.05)。另外,pcDNA3.1-KCNE2组MKN-45和MGC-803细胞中p-PI3K和p-AKT表达较pcDNA3.1组降低(P<0.05)。结论KCNE2可作为肿瘤抑制因子,下调PI3K/AKT信号通路活性,抑制胃癌EMT过程以及细胞增殖和转移。

血清RBP、ADPN、NGAL、CysC、α_1-MG与胰岛素抵抗及2型糖尿病肾病的相关性

目的探讨血清视黄醇结合蛋白(RBP)、脂联素(ADPN)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、α_1-微球蛋白(α_1-MG)、胱抑素C(Cys C)与胰岛素抵抗及2型糖尿病肾病的相关性。方法选择2014年2月至2016年9月确诊为2型糖尿病的60例患者作为糖尿病组(G2组),选择同期确诊为2型糖尿病合并早期肾病的60例患者作为G3组,选择同期确诊为2型糖尿病合并晚期肾病的60例患者作为G4组,选择同期健康体检者60例作为健康对照组(G1组)。同时检测4组研究对象的血清RBP、ADPN、NGAL、α_1-MG、Cys C、空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS)水平并进行比较。结果 G3组和G4组患者血清RBP、NGAL、α_1-MG、Cys C水平和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均明显高于G1组和G2组(P<0.05);G4组患者的血清RBP、NGAL、α_1-MG、Cys C水平和HOMA-IR均明显高于G3组(P<0.05);G2组、G3组、G4组患者ADPN水平均明显低于G1组(P<0.05);G2组、G3组、G4组患者ADPN水平差异均有统计学意义(P<0.05)。G3组和G4组患者血清RBP、ADPN、NGAL、α_1-MG、Cys C指标灵敏度均超过80.00%,联合检测灵敏度均超过95.00%;G3组联合检测明显高于各单项指标检测结果,差异有统计意义(P<0.05),但G4组差异无统计学意义(P>0.05)。G3联合检测的特异度为88.33%(53/60)。结论血清RBP、ADPN、NGAL、α_1-MG、Cys C与胰岛素抵抗及2型糖尿病肾病具有一定的相关性,血清RBP、ADPN、NGAL、α_1-MG、Cys C联合检测能提高2型糖尿病肾病早期患者的检出率,其指标变化对2型糖尿病肾病的早期诊断、治疗监测、预后判断均具有较好的临床价值。

香芹酚对2型糖尿病小鼠星形胶质细胞损伤的保护作用

目的:探讨香芹酚对自发性2型糖尿病db/db小鼠星形胶质细胞损伤的保护作用。方法 :选择8周龄雄性db/db小鼠20只,随机分为模型组和香芹酚组,每组10只,随机抽取10只db/m小鼠为对照组。香芹酚组小鼠给予香芹酚(20 mg/kg)灌胃,对照组和模型组分别给予等量生理盐水灌胃,每天灌胃1次,连续给药6周。利用免疫组化法标记胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),观察不同分组中海马CA1区星形胶质细胞形态的病理改变。免疫组化法检测对照组、模型组和香芹酚组海马CA1区脂质运载蛋白-2(lipocalin 2,LCN2)、水通道蛋白-4(aquaporin 4,AQP4)表达的阳性细胞数量。采用TUNEL法检测海马CA1区LCN2、AQP4与星形胶质细胞凋亡的关系。应用RT-PCR和Western blot检测对照组、模型组和香芹酚组海马CA1区LCN2、AQP4、核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、嗜中性白细胞碱性磷酸酶-3(neutrophilic alkaline phosphatase-3,NALP3)的表达。结果:模型组空腹血糖(glucose,GLU)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)表达量较对照组明显升高,而香芹酚组较模型组GLU、HDL、TG、TC的表达量明显降低(均P<0.05)。免疫组化显示,模型组GFAP标记的星形胶质细胞数量增加且体积增大,分枝增多、变长;香芹酚组可改善星形胶质细胞的形态,减少星形胶质细胞的数量(均P<0.01)。免疫组化表明,模型组中LCN2、NF-κB、NALP3阳性细胞数量增加,而AQP4阳性细胞数量减少;香芹酚组AQP4阳性细胞数量增加,LCN2、NF-κB、NALP3阳性细胞数量减少(均P<0.01)。TUNEL染色显示,模型组中LCN2与凋亡细胞均增加,AQP4则明显减少;香芹酚组与模型组相比,凋亡细胞、LCN2阳性细胞明显降低,AQP4阳性细胞数量明显增加(均P<0.01)。RT-PCR和Western blot结果显示,与模型组相比,香芹酚组降低海马CA1区中LCN2、NALP3、NF-κB表达,增加AQP4的表达(均P<0.01)。结论:香芹酚对自发性2型糖尿病小鼠星形胶质细胞损伤具有保护作用,其机制可能与降低LCN2、NF-κB、NALP3和增加AQP4表达有关。

视神经脊髓炎IgG刺激原代培养大鼠星形胶质细胞免疫反应

视神经脊髓炎(NMO)主要累及星形胶质细胞,导致中枢神经系统炎症、脱髓鞘和组织损伤。脑内病灶常高表达水通道蛋白4(AQP4),AQP4被认为是NMO血清IgG的抗原目标。根据NMO的可逆性及对NMO病灶演变特点的分析,笔者推测NMO IgG可能诱导了星形胶质细胞的动态免疫过程。培养原代大鼠星形胶质细胞,加入从NMO患者血清中提取或纯化的IgG,星形胶质细胞出现炎性增殖,同时基因表达出现与之匹配的明显变化。且星形胶质细胞反应因子脂质运载蛋白-2、多种趋化因子、细胞因子、应激反应因子的表达均增加。而在培养的原代星形胶质细胞中加入从正常对照者血清中提取的IgG则无上述变化。此星形胶质细胞的反应还与疾病种类相关。从复发缓解型多发硬化、Sj觟gren's或系统性红斑狼疮患者血清中提取的IgG加入培养的原代星形胶质细胞中也不能导致上述变化。笔者推测是NMO IgG与AQP4结合,导致星形胶质细胞出现炎症反应,并出现基因在转录和翻译水平的相应变化。抑制星形胶质细胞的炎症反应可能有助于减少星形胶质细胞增殖,缓解NMO病灶的发展。

房角关闭对兔眼小梁组织MMP-2、TIMP-2及AQP-1表达的影响

目的建立兔眼房角关闭模型,比较基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)、水通道蛋白-1(AQP-1)在对照组和模型组表达水平的变化,探讨房角关闭对小梁网功能变化的影响。方法实验研究。健康成年新西兰大白兔24只(48只眼)随机分为4组,每组6只(12只眼),每只随机选取一眼作为实验组,予玻璃体腔注入透明质酸钠联合前房放液,建立房角关闭模型,另一眼不作处理为对照组,应用免疫荧光和计算机图像分析技术分别于造模成功后1个周、1个月、2个月、4个月观察各组MMP-2、TIMP-2、AQP-1的表达情况。结果正常对照组和各实验组均有MMP-2、TIMP-2、AQP-1的表达。MMP-2在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05);TIMP-2在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05);MMP-2/TIMP-2比值在造模后1个周、1个月组与正常对照组相比无明显差异(P>0.05),而2个月组、4个月组与正常对照组相比差异明显(P<0.05);AQP-1在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05)。结论房角关闭早期,小梁网因代偿机制,仍存有部分功能,应尽早采取干预措施。

视紫红质通道蛋白2在系统神经科学研究中的应用与展望

光遗传学技术因其低组织损伤性、高时空分辨率以及遗传特异性等优势,虽然历史并不长,但却在近几年来成为最热门的技术之一,并在神经科学研究中迅速被应用。视紫红质通道蛋白2(channelrhodopsin-2,Ch R2)作为光遗传学技术的代表性蛋白质之一,在系统神经科学领域中已成为非常理想的工具并取得了一系列突破性的进展。现针对Ch R2的背景、分子结构以及生理学功能,及其在体脑功能区绘图和在体神经功能调控的研究进展,进行综述及展望。

水通道蛋白-4、基质金属蛋白酶-2,-14在胶质瘤瘤周水肿组织中的表达及其临床意义

目的 对比不同恶性程度胶质瘤的瘤周水肿区与正常脑组织中基质金属蛋白和水通道蛋白的差别,探讨胶质瘤细胞侵袭能力与脑水肿之间的关系.方法 选取新乡市中心医院神经外科在2011年12月至2013年6月经手术病理证实的27例胶质细胞瘤病例标本,采用SP免疫组织化学方法对胶质瘤水肿组织和正常脑组织中水通道蛋白-4（AQP-4）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、-14的表达进行测定.胶质瘤Ⅰ和Ⅱ级作为低度恶性组,胶质瘤Ⅲ和Ⅳ级作为高度恶性组,比较正常脑组织组与低度恶性组、高度恶性组之间的差异,同时分析AQP-4、MMP-2,-14之间的相关性.结果 AQP-4、MMP-2,-14随着胶质瘤病理级别的增高而升高,在正常脑组织组[分别为（117±12）、（102±11）、（106±11）IA]、低度恶性组[分别为（118±12）、（128±12）及（130±11）IA]和高度恶性组[分别为（151±19）、（152±9）及（156±13） IA]间的差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 AQP4、MMP-2,-14在脑组织及各级胶质瘤瘤周水肿组织均表达呈正相关,提示胶质瘤的侵袭性与胶质瘤水肿程度呈正相关.

MMP-9联合RBP、Cys-C和β2-MG在糖尿病肾病早期诊断及应用研究

目的:探究基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinase-9,MMP-9)、视黄醇结合蛋白(Retinol-Binding Protein,RBP)、胱抑素C(Cystatin C,Cys-C)和β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)在糖尿病肾病中的早期诊断价值。方法:选择2020年1月至2021年12月于本院确诊为糖尿病肾病的300例患者为研究组,将其按照尿微量清蛋白/肌酐比值(UREA)水平区分为尿蛋白正常组(UREA<30mg/g,n=130)、微量清蛋白尿组(UREA 30~300mg/g,n=100)和大量清蛋白尿组(UREA>300mg/g,n=70),另选同期于本院接受体格检查的100例健康个体为对照组,进行相关指标检测并分析其诊断价值。结果:1)研究组血清MMP-9、RBP、Cys-C及β2-MG水平高于对照组,大量清蛋白尿组血清以上指标高于微量清蛋白尿组,微量清蛋白尿组以上指标高于尿蛋白正常组(P<0.05);2)糖尿病肾病患者血清MMP-9、RBP、Cys-C及β2-MG水平存在正相关性(P<0.05);3)血清MMP-9、RBP、Cys-C、β2-MG及联合诊断对糖尿病肾病诊断AUC为0.7042、0.6858、0.7448、0.6936、0.8061(P<0.05)。结论:血清MMP-9、RBP、Cys-C及β2-MG对糖尿病肾病具有较好的诊断价值,但若将其联合应用将有助于提高诊断效率,便于糖尿病肾病患者的早期预防和治疗。

水通道蛋白4在1,2-二氯乙烷中毒性脑水肿中表达研究

目的探讨水通道蛋白4(AQP4)在1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)亚急性吸入所致中毒性脑水肿发生中的作用。方法无特定病原体级健康成年雌性SD大鼠,随机分为对照组(8只)、低剂量组(12只)和高剂量组(12只)。采用口鼻式动式吸入法染毒,3组大鼠1,2-DCE染毒剂量分别为0、600和1 800 mg/m3,连续7 d,8.0 h/d。染毒结束后,取大脑皮质行病理组织学检查,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测大脑皮质组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、钠-钾-氯共转运体1(NKCC1)、AQP4的mRNA相对表达水平,采用免疫印迹法检测大脑皮质组织中AQP4蛋白相对表达水平。结果病理组织学检查结果显示,低剂量组大鼠可见大脑皮质血管周围组织疏松,血管组织间隙扩大;高剂量组大鼠可见较明显的大脑皮质或血管周围组织疏松和空泡,程度较低剂量组严重。分别与对照组及低剂量组比较,高剂量组大鼠大脑皮质MMP2 mRNA相对表达水平均升高[(1.07±0.41)vs(1.56±0.55),(1.21±0.59)vs(1.56±0.55),P<0.05],AQP4 mRNA相对表达水平均下降[(1.03±0.25)vs(0.81±0.12),(1.00±0.20)vs(0.81±0.12),P<0.05];3组大鼠大脑皮质NKCC1 mRNA相对表达水平比较,差异无统计学意义[(1.03±0.31)vs(1.14±0.43)vs(1.36±0.50),P>0.05]。高剂量组大鼠大脑皮质AQP4蛋白相对表达水平低于对照组[(0.80±0.25)vs(1.19±0.42),P<0.05]。结论 1,2-DCE亚急性吸入所致大鼠脑水肿是以血管源性为主的混合型脑水肿,其发病机制与AQP4的表达量改变有关。

G蛋白βγ亚单位功能研究进展

G蛋白（guanine nucleotide-binding proteins）是由α、β、γ亚单位组成的杂三聚体,除了能够转导多种信息,如光子、激素、神经递质、气味分子、蛋白酶以及离子进入细胞内之外,还在细胞骨架形成与维持、信号转导反馈环的形成等方面发挥重要作用。但长久以来,人们一直认为在这些过程中发挥主导作用的是Gα亚单位;Gβγ亚单位的作用是将Gα锚固于细胞膜上并通过与之结合或脱离来调节其活性,而缺乏重要的直接功能。但是,近年来的研究发现Gβγ亚单位在多方面有着广泛的作用。本文仅就其中的几个重要方面作一综述。

下调视黄醇结合蛋白2基因表达对顺铂耐药卵巢癌细胞生物学特性的影响及其机制

目的探讨下调视黄醇结合蛋白2(RBP2)基因表达对卵巢癌细胞生物学特性的影响及其机制。方法建立稳定下调RBP2表达的顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP-RBP2i,并设置阴性对照组和空白对照组。采用细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关分子标志物的表达。通过裸鼠移植瘤实验验证RBP2对卵巢癌生长的影响,采用美国TCGA数据库中的卵巢癌临床数据分析RBP2表达与肿瘤转移和患者预后的关系。结果下调RBP2的表达后,SKOV3/DDP细胞的增殖能力明显下降,第5天时,SKOV3/DDP-RBP2i组、阴性对照组和空白对照组的增殖活性分别为(56.67±4.16)%、(84.67±3.51)%和(87.00±4.00)%,差异开始有统计学意义(P<0.001)。SKOV3/DDP-RBP2i组的凋亡率为(14.19±1.50)%,高于阴性对照组[(8.77±0.75)%]和空白对照组[(7.48±0.52)%,P<0.001];侵袭细胞数为(55.20±2.39)个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为(82.60±5.18)个和(80.80±7.26)个,P<0.001)];划痕愈合率为(28.47±2.72)%,低于阴性对照组和空白对照组[分别为(50.58±4.06)%和(48.92±4.63)%,P<0.001]。SKOV3/DDP-RBP2i组细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白表达量高于阴性对照组(P=0.015,P<0.001)和空白对照组(P=0.006,P<0.001),N-cadherin的mRNA和蛋白表达量低于阴性对照组(P=0.012,P<0.001)和空白对照组(P=0.005,P<0.001),vimentin的mRNA和蛋白表达量也低于阴性对照组(P=0.016,P=0.001)和空白对照组(P=0.011,P=0.001)。裸鼠接种细胞后,自第5周开始,SKOV3/DDP-RBP2i组、阴性对照组和空白对照组的肿瘤体积差异有统计学意义,SKOV3/DDP-RBP2i组的肿瘤体积小于阴性对照组和空白对照组(P=0.001)。生物信息学分析显示,发生转移的卵巢癌患者RBP2表达量高于未转移者(P=0.043),RBP2高表达卵巢癌患者的生存时间(中位生存时间为41个月)短于RBP2低表达患者(中位生存时间为69个月,P<0.001)。结论下调RBP2表达可抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制EMT有关。

大黄素对大鼠急性脊髓损伤后继发脊髓水肿的影响

目的探讨大黄素对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的影响及其机制。方法将180只健康雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(A组),模型组(B组),大黄素低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组36只。采用Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,术后3 d、7 d、14 d及28 d,BBB评分及斜板实验观察大鼠运动功能恢复。术后3 d,HE染色观察脊髓组织病理变化,干湿重法检测脊髓组织含水量,伊文思蓝(EB)染色检测血脊髓屏障(BSCB)通透性,RT-PCR和Western blotting检测水通道蛋白-4(AQP-4)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)m RNA和蛋白表达。结果 BBB评分及斜板实验结果显示,术后7 d、14 d、28 d,C组、D组和E组均优于B组(P<0.05),E组最佳(P<0.05)。术后3 d,HE染色显示,B组损伤节段内有大片出血灶,神经细胞肿胀、破坏,大量炎性细胞浸润,组织间隙增宽,水肿严重,C组、D组和E组上述病理改变改善,其中E组最明显;B组脊髓组织含水量较A组增高(P<0.05),D组、E组脊髓组织含水量低于B组和C组(P<0.05),E组低于D组(P<0.05);B组EB含量高于A组(P<0.05),C组、D组和E组EB含量均低于B组(P<0.05);C组、D组和E组AQP-4、MMP-2 m RNA和蛋白表达均低于B组(P<0.05),E组最低(P<0.05)。结论大黄素能减轻大鼠急性脊髓损伤后的脊髓水肿,促进肢体功能康复,这可能与大黄素下调损伤后脊髓组织AQP-4和MMP-2表达,降低BSCB通透性有关。

格列苯脲调控HSP70/p-Akt/MMP-9/COX-2炎性信号通路保护脑缺血再灌注损伤大鼠的神经血管单元

目的探讨磺酰脲类受体1(SUR1)-转化受体电位阳离子通道亚家族M成员4(TRPM4)特异性抑制剂格列苯脲对脑缺血再灌注损伤大鼠神经血管单元的保护作用及其机制。方法采用随机数字表法将120只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组及格列苯脲组,每组40只。后2组采用线栓法制备成急性局灶性大脑中动脉闭塞缺血2 h再灌注模型,其中模型组于缺血2 h后给予单次腹腔注射含0.05%二甲基亚砜的生理盐水,格列苯脲组给予单次腹腔注射10 μg/kg格列苯脲(5 μg/mL)。再灌注后8 h时,采用免疫荧光双标染色及Western blotting检测各组大鼠脑组织中SUR1、TRPM4的表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量。再灌注后24 h时,采用Zea Longa评分法评估各组大鼠的神经功能缺损程度,采用干湿重法检测脑组织含水量,采用伊文思蓝(EB)染色检测血脑屏障通透性,采用尼氏染色检测脑组织中存活神经元数量,采用免疫组化染色检测IgG渗出量及离子钙接头蛋白-1(Iba-1)、环氧化酶-2(COX-2)阳性细胞的表达,采用Western blotting检测热休克蛋白70(HSP70)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)蛋白的表达。结果(1)再灌注后8 h时,与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中SUR1、TRPM4蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且该两种蛋白存在共定位;与模型组比较,格列苯脲组的SUR1、TRPM4蛋白表达降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠的MMP-9含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,格列苯脲组的MMP-9含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)再灌注后24 h时,与假手术组比较,模型组大鼠的神经功能缺损评分明显升高,脑组织含水量明显升高,EB渗出量明显升高,IgG渗出量明显升高,尼氏染色阳性神经元数量明显降低,Iba-1、COX-2阳性细胞数量明显升高,HSP70、p-Akt蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,格列苯脲组的神经功能缺损评分明显降低,脑组织含水量明显降低,EB渗出量明显降低,IgG渗出量明显降低,尼氏染色阳性神经元数量明显升高,Iba-1、COX-2阳性细胞数量明显降低,HSP70、p-Akt蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SUR1-TRPM4在脑缺血再灌注损伤后表达升高,而其抑制剂格列苯脲对脑缺血再灌注损伤诱导的神经元及血脑屏障等神经血管单元损伤具有一定的保护作用,机制可能与调控HSP70/p-Akt/MMP-9/COX-2炎性信号通路有关。