常规高压氧对新生小鼠视网膜影响的研究

【目的】观察常规剂量的高压氧(HBO)和持续常压高浓度氧对新生小鼠视网膜的影响。【方法】比较常规剂量的HBO与常压高浓度氧下新生小鼠突破视网膜内介膜血管内皮细胞核数量,血浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;观察两种氧处理视网膜形态。【结果】常规剂量的HBO未诱发未成熟视网膜新生血管的形成,突破视网膜内介膜血管内皮细胞核数无显著性增高,SOD和MDA的含量无显著性差异。常压持续高浓度氧组突破视网膜内介膜血管内皮细胞核数明显增加,血浆中MDA含量明显增加。【结论】常规剂量的HBO治疗不影响新生小鼠视网膜血管的正常生长,不诱发视网膜新生血管异常增生,也不影响小鼠血浆中SOD、MDA的含量;而持续的常压高浓度氧影响新生小鼠视网膜血管的正常生长,可诱发与ROP发生密切相关的视网膜新生血管形成,其影响可能与降低SOD,增加MDA的生成相关。

合理选择视网膜电图检查指标客观了解内层视网膜的功能

视网膜的解剖结构和生理功能非常复杂，目前临床上视网膜功能的客观评估主要依靠视网膜电图（ERG）。对主要累及外层视网膜的疾病，ERG可以准确判断病变所处的组织学部位，但对主要位于内层视网膜，即视细胞突触以后的视网膜病变，视觉电生理检查的辨识度尚远不及于外层视网膜，这是因为内层视网膜神经传导通路较长、内层视网膜也受外层视网膜视觉信号传人变化的影响以及视杆系统和视锥系统的反应存在相互影响，因此客观了解内层视网膜的功能是一个难点。近20年来，一些新的能够用于检测内层视网膜功能的ERG检测技术，如振荡电位（OPs）、ON．OFF反应、明视负波反应（PhNR）、暗视阈值反应（STR）等已用于临床，这些ERG指标主要起源于双极细胞、无长突细胞和视网膜神经节细胞，是评估内层视网膜疾病的有用工具。临床眼科医师应充分了解这些ERG检测指标在内层视网膜疾病诊疗中的临床意义，从而更好地指导临床诊疗工作。

低氧诱导因子-1α在胚胎及出生后大鼠视网膜中的表达变化

目的观察大鼠视网膜胚胎期及出生后早期发育过程中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的时空表达，探讨其表达变化与视网膜发育的关系。方法实验大鼠分为孕12、16、20d组，出生后1、5、10d组及成年组，每组各5只，共35只大鼠。用免疫组织化学方法、半定量逆转录聚合酶联反应（RTPCR）方法检测视网膜HIF-1α蛋白及HIF-1α mRNA的表达。结果胚胎期大鼠视网膜神经上皮层及视网膜色素上皮层均有HIF-1α阳性表达，出生后发育早期视网膜神经上皮层及视网膜色素上皮层也可见HIF-1α阳性表达，以神经节细胞、内网层更明显。随着发育进展，其阳性表达主要位于视网膜节细胞层。大鼠视网膜HIF-1α蛋白及mRNA的表达在胚胎期最高、出生后发育期逐渐下降、成年期最低，其差异有统计学意义（P〈0．01）。结论大鼠视网膜胚胎及出生后发育过程中HIF—1α的表达存存时空上的变化，这种变化可能与大鼠视网膜胚胎期及出生后早期的发育密切相关。

糖尿病性白内障超声乳化术后黄斑中心凹视网膜厚度的临床研究

目的观察糖尿病性白内障患者行白内障超声乳化联合人工晶体植入术后黄斑中心凹视网膜厚度（FRT）的变化，探讨黄斑中心凹视网膜厚度变化对视力的影响。方法采用前瞻性对照研究方法，选取患有2型糖尿病的年龄相关性白内障患者30例（30只眼）为观察组（A组），无糖尿病病史的年龄相关性白内障患者32例（32只眼）为对照组（B组），正常无眼疾者30例（30只眼）为正常对照组（c组）。A组及B组均行白内障超声乳化联合折叠式人工晶体植入术。常规检查A组、B组、C组术前及A组、B组术后的裸眼远视力、最佳矫正logMAR远视力、眼压、眼前节及眼底情况，并采用光学相干断层扫描仪（OCT）分别检测A组、B组、C组术前以及A组和B组术后1周、术后1、3个月黄斑中心凹视网膜厚度，并进行统计学分析。结果术前A、B、C三组的最佳矫正log—MAR远视力分别为1．06±0．42、0．92±0.37、-0．3±0．06，术后1周A、B两组的最佳矫正logMAR远视力分别为0．35±0．06、0．31±0.34（P〉0．05），术后1个月分别为0．38±0.19、0．27±0.17（P〈0．05），术后3个月分别为0．30±0.14、0．22±0．13（P〈0．05）；术后1、3个月A组的最佳矫正logMAR远视力≥0．5的眼数分别占40．0％、76．7％，B组分别占81．3％、87．5％，A、B两组之间差异具有统计学意义（P〈0．05）。A、B、C三组术前黄斑FRT分别为（234．03±11．12）μm、（231．47±16．61）μm、（233．23±15．31）μm（P〉0．05）；术后1周，A、B组FRT分别为（242．80±10．83）μm、（236．25±18．13）μm（P〉0．05）；术后1个月分别为（252．43±15．60）μm、（238．94±17．58）μm（P〈0．05）；术后3个月分别为（238．57±11．68）μm、（236．56±23．46）μm（P〉0．05）。结论糖尿病性白内障超声乳化联合折叠式人工晶体植入术后黄斑中心凹视网膜增厚，1个月时厚度最大，导致了亚临床黄斑水肿以及最佳矫正视力下降，3个月时基本恢复正常。

正常眼多焦视网膜电图一阶核反应分析

目的 :观察正常眼后极部视网膜 (感光细胞 )功能。方法 :应用RETIscan多焦视觉电生理检查系统 (短M序列 )对2 4例 (32只眼 ) 10～ 30岁、4 0～ 6 0岁正常人眼后极部约 30°范围内视网膜行 6 1个刺激阵列的多焦视网膜电图 (multifocalelec troretinogram ,mfERG)一阶核反应 (firstorderkernel,FOK)测定 ,分别比较以黄斑中心凹为圆心排列的 1～ 5环FOKP1、N1波峰时和振幅密度值 ,以及黄斑鼻颞侧 ,后极部四个象限视网膜 ,后极部视网膜上、下半侧P1、N1波峰时和振幅密度值。结果 :随离心度增加 ,FOK反应P1、N1波有振幅密度值逐渐降低、峰时先逐渐缩短后逐渐延长的特征 ;10～ 30岁年龄组正常眼P1、N1波振幅密度值较 4 0～ 6 0岁年龄组大 ,峰时短 ,其差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ;各组的四个象限间和后极部视网膜上下半的P1波振幅密度值差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;10～ 30岁年龄组正常眼黄斑鼻颞侧P1波振幅密度值鼻侧大于颞侧 ,其差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ,而 4 0～ 6 0岁年龄组黄斑鼻颞侧差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 :mfERG一阶核反应与视网膜感光细胞特别是视锥细胞的功能相对应。FOK振幅密度值随年龄增长而降低 ,说明视网膜感光细胞功能逐渐减退 ,FOK最短峰时的出现可能与有功能锥?

成年人与2个月月龄婴儿视网膜的蛋白质组学初步研究

目的 建立成年人与2个月月龄婴儿视网膜组织的双向凝胶电泳图谱,初步分析成年人视网膜与婴儿视网膜蛋白质的表达差异.方法 9例角膜移植后剩余的成年人眼球视网膜组织,2例角膜移植后剩余的2个月月龄婴儿眼球视网膜组织;抽提蛋白质,双向凝胶电泳后考马斯亮蓝染色扫描分析图谱,选取明显差异蛋白点进行质谱鉴定.结果 成年人与2个月月龄婴儿视网膜组织的凝胶经考马斯亮蓝染色分别检测到1179和1295个蛋白点,其中1039个蛋白点位置相匹配.5个差异蛋白点的质谱鉴定结果显示,人血清白蛋白、鸟苷酸激酶在成年人的视网膜中高表达;微管蛋白、转醛醇酶和晶体蛋白在2个月月龄婴儿的视网膜中高表达.结论 成功建立了人视网膜蛋白质的双向凝胶表达图谱.经质谱鉴定证实了成年人和婴儿的视网膜蛋白质存在表达差异.

P38丝裂素活化蛋白激酶信号通路阻断对糖尿病鼠早期血视网膜屏障和视网膜节细胞的保护作用

目的 组织化学法检测视网膜上caspase-3和血管内皮生长因子（VEGF）的荧光表达.糖尿病鼠建模后2周,对实验组行玻璃体腔注射p38 MAPK抑制剂SB203580,注射后6周检测caspase-3和VEGF的荧光表达,caspase-3免疫荧光染色法计数RGC凋亡数量.采用SPSS 13.0应用软件进行统计分析.结果 正常对照组大鼠中,IgG染色局限于血管腔内,几乎没有渗漏的迹象.糖尿病鼠建模后8周,IgG渗漏明显增加.SB203580璃体腔注射6周后的糖尿病鼠IgG渗漏减少明显.荧光免疫组织化学及相对定量分析结果显示,SB203580玻璃体腔注射6周后的糖尿病鼠视网膜上VEGF荧光表达呈下降趋势,VEGF相对荧光量从糖尿病鼠8周时较正常对照组高2.9倍减少到仅高于正常对照组1.8倍,两者比较差异有统计学意义（t=5.203,P〈0.01）.caspase-3免疫荧光染色法RGC凋亡计数结果显示,SB203580玻璃体腔注射6周后,caspase-3-阳性节细胞凋亡数与未注射SB203580相比明显减少,两者差异有统计学意义（t=5.731,P〈0.01）.结论 p38 MAPK抑制剂SB203580能够减轻糖尿病早期血视网膜屏障的破坏和视网膜节细胞的调亡,提示p38 MAPK信号通路在糖尿病早期对DR的发展起着一定的作用.

糖尿病大鼠早期视网膜小胶质细胞活化与神经节细胞损害的关系

目的 观察糖尿病早期视网膜小胶质细胞的活化特征与视网膜神经节细胞（RGC）损害的关系.方法 20只成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,采用链脲佐菌霉素腹腔注射方法制作糖尿病动物模型,分为糖尿病1、3个月组及相应正常对照组,每组5只大鼠.对所有大鼠行上丘定位注射逆行标记RGC,分别用免疫组织化学法标记视网膜铺片、冰冻切片小胶质细胞和RC-C,共聚焦显微镜下观察小胶质细胞细胞形态及分布特征.结果 糖尿病组视网膜铺片小胶质细胞胞体增粗,形态不规则.与对照组相比,糖尿病3个月组RGC层发生吞噬的小胶质细胞密度显著增加（t=3.83,P〈0.01）.与对照组相比,糖尿病大鼠1、3月个组RGC层小胶质细胞平均密度均显著增加（t=2.71,4.22 P〈0.05） 糖尿病大鼠3个月组RGC层小胶质细胞平均密度较糖尿病1个月组显著增加（t=7.45,P〈0.0001）.糖尿病早期小胶质细胞与RGC数量之间存在相关关系（r=0.9,P〈0.05）.结论 糖尿病早期小胶质细胞活化与RGC损伤关系密切.

动态对比增强磁共振定量检测糖尿病视网膜病变血视网膜屏障渗漏的实验研究

目的 利用动态对比增强磁共振（DCE-MRI）定量检测实验性糖尿病视网膜病变（DR）血视网膜屏障（BRB）破坏程度,并探讨其可行性.方法 40只鼠龄3周的健康Sprague-Dawley（SD）大鼠随机平均分为实验组和正常对照组,实验组大鼠腹腔注射链脲佐菌素,注射48、72 h后检测大鼠空腹血糖及尿糖.血糖浓度在16.65 mmol/L、尿糖（＋＋＋）以上者视为建模成功,并按病程再分为糖尿病2、4、6、8个月,组每组各5只大鼠.正常对照组腹腔注射等体积缓冲液.并根据与实验组大鼠年龄匹配原则再平均分为4组.每组大鼠5只.分别在注射后2、4、6、8个月时利用DCE_MRl扫描眼球,计算BRB渗漏速度 戊巴比妥过量麻醉后摘除眼球观察视网膜组织形态.采用SPSS 12.0对数据进行统计学分析.结果 实验组大鼠成模率100%,正常对照组、糖尿病2、4个月组大鼠BRB未见明显渗漏,糖尿病6、8个月组大鼠BRB渗漏速度分别为（0.1399±0.0065）、（0.1816±0.2756）mm3/min,两者之间差异有统计学意义（Z=-2.121,P〈0.05）.实验组大鼠病程4个月时出现明显视网膜组织水肿,细胞排列紊乱,随病程延长逐渐加重,出现血管扩张,出血.结论 DCE-MRI能够较精确地检测实验性DR的BRB渗漏速度,定量化评价BRB的破坏程度.

蛋白酶体抑制剂对糖尿病大鼠视网膜病变激活核转录因子-κB信号通路及视网膜神经节细胞凋亡的作用

目的 观察泛素蛋白酶体抑制剂对早期糖尿病性视网膜病变（DR）中激活核转录因子（NF-κB）和其抑制性信号蛋白IκB激酶的降解调控作用,及其对视网膜神经节细胞（RGC）凋亡的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠40只,用数字随机法随机分为正常对照组（A组）、DR安慰剂组（B组）、DR＋蛋白酶体抑制剂（MG132）低浓度干预组（C组）,DR＋MG132高浓度干预组（D组）,每组10只大鼠.给药后6、8周,检测每组大鼠体重、血糖,并制备视网膜石蜡切片,采用免疫组织化学法分析NF-κB及其抑制性信号蛋白IκB在大鼠视网膜中的表达.采用原位凋亡检测（TUNEL）法分析RGC的凋亡情况.结果 NF-κB在B组表达较A组明显增强,D组表达强度较B组减弱 IκB在B组表达较A组明显减少,D组表达强度较B组增强 RGC凋亡在B组的表达较A组明显增多,D组表达强度较B组减少 差异均有统计学意义（P〈0.01）.C组NF-κB和IKB的表达强度及RGC凋亡与B组相比,差异均无统计学意义（P〈0.05）.结论 泛素蛋白酶体抑制剂MG132通过抑制IKB泛素化降解,阻断NF-κB激活,抑制RGC的凋亡.

C57小鼠视网膜蛋白质组的初步研究

小鼠视网膜的结构与人非常相近，已成为研究各种视网膜疾病的常用实验动物，尤其是生后17d小鼠更是成为视网膜新生血管的经典模型。蛋白质组，指的是“一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质”。了解并掌握小鼠视网膜中各种蛋白的组成，建立小鼠视网膜蛋白质组的数据库必将对今后使用该种系动物的有关研究提供重要的参考数据。近年来纳米高效液相色谱以其操作自动化，

雌激素对视网膜主要细胞功能的影响

雌激素通过与雌激素受体（ER）结合而发挥生理功能,ER亚型和特异性激动剂和拮抗剂的研究进展为进一步认识雌激素作用机制提供了可能.雌激素可能通过对视网膜血管内皮细胞、色素上皮细胞、神经节细胞、光感受器细胞和M＆#252;ller细胞等主要视网膜细胞功能的影响,改善血视网膜屏障、保护视网膜光感受器细胞、视神经,减轻氧化应激反应对视网膜色素上皮细胞损害.详尽研究ER各亚型在视网膜主要细胞的分布及特异性激动剂和拮抗剂对这些细胞的作用将为眼底病的防治开拓一个新的领域.

视网膜变性大鼠视网膜神经节细胞变化及其触发因素探讨

目的观察探讨视网膜变性大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的变化及其触发因素。方法出生后21、60、90d含色素的RoyalCollegeofsurgeons（Rcs）-p’视网膜变性大鼠各6只，RCS-rdy＋-p＋无视网膜变性大鼠各6只。立体定位下行大鼠上丘和外膝体荧光金逆行标记RGCs，荧光显微镜下观察RGCs细胞形态并计数。作视网膜铺片和切片，采用激光共聚焦显微镜观察RGCs细胞内钙成像情况，分析RGCs细胞内钙浓度的变化。结果荧光显微镜观察发现，出生后90d，无视网膜变性大鼠RGCs分布于整个视网膜，细胞大小均一，细胞胞体和突起清晰可见；视网膜变性大鼠RGCs分布稀疏，细胞大小不一，细胞突起分枝数和范围减小，出现杆状或碎屑细胞。出生后21、60、90d，视网膜变性大鼠RGcs数量分别为（5421.0±72．1）、（4195．0±136．4）、（2906．0±133．2）个／mm2。与无视网膜变性大鼠比较，出生后21d时其RGCs数量间差异无统计学意义（t=-1．301，P〉0．05）；出生后60、90d时其RGCs数量显著减少，差异有统计学意义（t=16．172，30．131；P〈O．05）。出生后21d有无视网膜变性大鼠RGCs细胞内钙荧光强度比较，差异无统计学意义（t=-1．545，P〉0．05）；出生后60、90d视网膜变性大鼠RGCs细胞内钙荧光强度较无视网膜变性大鼠明显增强，差异有统计学意义（t=-18．058，-15．015；P〈0．01）。结论视网膜变性大鼠RGCs发生变性死亡，细胞形态和数量受到显著影响。RGcs细胞内钙浓度的变化可能是视网膜变性中RGCs继发变性、死亡的触发因素。

抑制Claudin-3表达对体外培养鼠视网膜神经节细胞的作用研究

目的 观察腺相关病毒（AAV）介导小发夹RNA（shRNA）干扰抑制Claudin-3表达对体外培养小鼠视网膜神经节细胞（RGC）的影响.方法 原代培养小鼠RGC分为正常对照组、AAV-shScramble组、AAV-shClaudin3组.细胞接种24 h后,AAV-shScramble组、AAV-shClaudin3组RGC分别转染AAV-shScramble和AAV-shClaudin3.转染96h后,活细胞荧光动态显微镜观察目的病毒转染效率;β-微管蛋白免疫荧光染色检测RGC轴突长度;免疫荧光4′,6-二脒基-2-苯基吲哚染色观察RGC凋亡形态;实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组RGC Claudin-3、血管内皮生长因子（VEGF） mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组RGC Claudin-3、VEGF、B淋巴细胞瘤/白血病-2基因（Bcl-2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达水平.结果 活细胞动态荧光显微镜观察发现,AAV-shScramble组、AAV-shClaudin3组RGC病毒转染效率均＞50％;病毒转染96 h后,AAV-shClaudin3组RGC轴突长度明显低于正常对照组、AAV-shScramble组,差异有统计学意义（F=2 363.274,P＜0.05）;AAV-shClaudin3组RGC密度较正常对照组、AAV-shScramble组明显减低,可见细胞核皱缩、趋边以及细胞核裂解形成的凋亡小体.AAV-shClaudin组RGC的Claudin-3、VEGF mRNA表达明显低于正常对照组和AAV-shScramble组,差异有统计学意义（F=257.408、160.533,P＜0.05）.AAV-shClaudin3组RGC的Claudin-3、VEGF、Bcl-2蛋白表达明显低于正常对照组和AAV-shScramble组,差异有统计学意义（F=129.671、420.552、62.669,P＜0.05）;Caspase-3蛋白表达明显高于正常对照组、AAV-shScramble组,差异有统计学意义（F=231.348,P＜0.05）.结论 AAV介导shRNA干扰抑制Claudin-3的表达可下调VEGF、Bcl-2及上调Caspase-3的表达,促进RGC凋亡,抑制RGC轴突生长.