膳食营养组分改善视网膜光损伤作用及机理研究进展

随着电子设备和各种照明产品的普及,视网膜光损伤的发生率急剧增加,已成为现代社会危害视觉健康的主要原因。越来越多的研究发现,膳食补充花色苷、类胡萝卜素、长链不饱和脂肪酸及VA等营养成分能够有效改善视力、提高视网膜抗氧化应激能力。因此,本文综述视网膜光损伤发生机制,并在此基础上探讨不同膳食营养成分改善视网膜光损伤的作用及调控机制,以期为通过膳食营养补充预防和改善视网膜光损伤提供科学依据。

实验性大鼠视网膜光损伤的发生机制(英文)

目的:研究视网膜光损伤与视细胞凋亡的相互关系,以探讨视网膜光损伤的发生发展机制。方法:所有SD大鼠经循环光环境适应7d,实验前暗适应36h,分别于光照3,6,9,12,15和18h,灌流固定,摘除眼球。光镜标本在常规脱水、透明、石蜡包埋切片后,行苏木精-伊红(HE)、TUNEL法染色,光镜观察;电镜标本在树脂包埋、超薄切片、醋酸-柠檬酸铅双重染色后,透射电镜观察;应用CIAS-1000图像分析系统定量检测外核层面积和视细胞凋亡指数,所得数据作统计学分析。结果:可见视网膜出现光损伤和视细胞凋亡现象,随着光照时间的延长,视网膜光损伤逐渐加重,视细胞凋亡逐渐增多。在外核层,透射电镜观察见核染色质浓集,而无炎性反应。外核层面积和视细胞凋亡指数作相关性分析有显著意义。结论:视细胞凋亡是视网膜光损伤的重要机制;光损伤启动了视细胞凋亡的发生,外核层细胞核的丢失是视细胞凋亡的结果;视网膜光损伤与视细胞凋亡有着密不可分的联系。

Caspase-3在急性视网膜光损伤模型中的作用

【目的】探讨Caspase-3在急性视网膜光损伤模型中的作用。【方法】利用手术显微镜光源E=(30000±50)lx照射SD大鼠右眼,照射时间为30min,建立急性光损伤模型。分别在照射后6h、1d、3d、7d和15d处死动物,取眼球做光镜和电镜检查;通过流式细胞仪检测视网膜细胞凋亡情况、Caspase-3试剂盒检测其活性、Westernblot法检测Caspase-3蛋白水平的表达。【结果】①光镜及电镜检查表明:随着时间的推移,视网膜的内、外节水肿逐渐加重,其中内节线粒体肿胀逐渐加重、外节盘膜叠状结构解离,而外核层细胞核排列紊乱、核固缩、核层变薄,后期视网膜色素上皮细胞几乎消失。②AnnexinV联合PI染色法结果表明:随着时间推移,凋亡细胞所占的比例呈上升趋势,但7d与15d凋亡细胞的比例无明显差异,分别为83%和81%。③Caspase-3活力测定表明:随着时间推移,Caspase-3活力呈上升趋势,由最初6h时的0.02活力单位,在第7天达最高峰至10.2,然后开始下降,在15d时下降至6.8活力单位。④WesternBlot检测结果表明:6h、1d、3d基本检测不到激活的Caspase-3蛋白酶,而7d与15dCaspase-3蛋白酶含量相似。【结论】急性光损伤引起的SD大鼠视网膜光感受器细胞凋亡与Caspase-3密切相关。

多焦视网膜电图在大鼠视网膜光损伤模型评价中的应用

目的观察大鼠视网膜光损伤多焦视网膜电图(multifocal electroretinogram,mfERG)的改变,探讨运用mfERG对动物模型进行评价及其在药物开发研究中的价值。方法采用自制光照箱维持光照24h以建立大鼠视网膜光损伤模型,将模型动物随机分为4组,分别为模型对照组(光照后即刻),光照后3d、7d和14d组,另设正常对照组,每组10只。按标准刺激和记录方法,分别记录各组大鼠mfERG波形的改变。结果模型对照组与正常对照组比较,mfERG的N1及P1波各环反应密度均明显减弱,N1波(1~5环)反应密度为(6.23±3.77)nV·deg-2^(0.95±1.18)nV·deg-2,正常对照组为(47.87±12.78)nV·deg-2^(8.16±5.26)nV·deg-2,二者比较差异有显著统计学意义(P<0.01),P1波(1~5环)反应密度为(28.25±15.18)nV·deg-2^(9.18±3.18)nV·deg-2,正常对照组为(118.43±20.58)nV.deg-2^(39.27±8.44)nV·deg-2,二者比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。光照后3d、7d和14d后有不同程度恢复,与模型对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05),但仍未恢复至正常水平;N1波各环峰潜时在光照前后无明显改变(P>0.05);P1波各环峰潜时光照后与模型对照组比较显著延迟(P<0.05),但14d后各环峰潜时已基本恢复正常(P>0.05)。结论mfERG能较好地反映光损伤大鼠视功能的损伤程度,为客观评价模型动物视功能损害提供了量化方法,可用于药物开发研究中的药效学评价。

黄色晶状体AcrysofNatural对急性视网膜光损伤保护作用的形态学研究(英文)

目的:在造成急性视网膜光损伤的光照条件下,通过不同人工晶状体下比较视网膜组织及超微结构的变化,以观察AcrysofNatural对视网膜的保护作用。方法:在无菌条件下将新鲜离体猪眼制成眼杯,利用显微镜光源对视网膜后极部照射,使相应视网膜蓝光光照强度为30J/cm2 或40J/cm2,进行单独光照、透过Acrysof一片IOL、透过Acrysof Natu-ral,照射后培养48h,对相应部位视网膜组织,HE染色光镜、透射电镜下观察。结果:未照射部位:视网膜各层次结构清晰,神经上皮层内各细胞排列规则,整齐,RPE 细胞排列紧密均匀,色素颜色一致;单独光照和透过Acrysof一片式IOL:光感受器层部分细胞丢失,外核层可见固缩核,浓密,内颗粒层细胞大量丢失,内丛状层内空泡明显增多,RPE 表面,细胞大小不均,可见肿胀、缺失,细胞内色素浓密、聚集成块;透过Nat-ural 一片:与未照射处相比,视网膜各层次结构仍有部分破坏,但程度明显减轻。结论:30J/cm2 与40J/cm2 蓝光光照强度均可造成新鲜离体猪视网膜的急性光损伤;Acrysof一片与直接光照相比对视网膜的光损伤形态学没有明显改变;AcrysofNatural与Acrysof一片相比具有减弱光损伤的作用。

实验性大鼠视网膜光损伤与视细胞凋亡的关系

目的 :研究视网膜光损伤与视细胞凋亡的相互关系 ,以探讨视网膜光损伤的发生、发展机制。方法 :所有SD大鼠在循环光环境中适应 7d ,在实验前先行暗适应 36h ,分别于光照 3、6、9、12、15和 18h时灌流固定 ,摘除眼球。光镜标本在常规脱水、透明、石蜡包埋切片后 ,行HE、TUNEL法染色 ,用光镜观察 ;电镜标本在树脂包埋、超薄切片、醋酸 柠收稿日期 :2 0 0 2 -0 7-15 ;修回日期 :2 0 0 2 -10 -2 0基金项目 :辽宁省教育厅资助项目 ( 99172 114 9)。作者简介 :刘学政 ( 1962 -) ,辽宁葫芦岛人 ,医学博士 ,解剖学教授 ,研究生导师。通信作者 :刘学政 (E -mail:xuezheng @hotmail.com)。檬酸铅双重染色后 ,用透射电镜观察 ;应用CIAS 10 0 0图像分析系统定量检测外核层面积和视细胞凋亡指数 ,所得数据做统计学分析。结果 :视网膜出现了光损伤和视细胞凋亡现象 ,随着光照时间的延长 ,视网膜光损伤逐渐加重 ,视细胞凋亡逐渐增多。在外核层 ,透射电镜观察见核染色质浓集 ,而无炎性反应。外核层面积和视细胞凋亡指数做相关性分析 ,显示有显著性意义。结论 :视细胞凋亡是视网膜光损伤的重要机制。光损伤启动了视细胞凋亡的发生 ,外核层细胞核的丢失是视细胞凋亡的结果。视网膜光损伤与视细胞凋亡有着密不可分的联系。

大鼠视网膜光损伤模型的行为观察

目的 进行可见光照射所致大鼠视网膜光性损伤后的行为测试 ,探讨动物视功能与行为的关系。方法 2 1只SD大鼠在 (95 0± 5 0 )lx绿色光损伤仪光照 3、12、2 4h ,实验前及实验后暗适应 2 4h ,光损伤前 2d及光损伤后 2d测定大鼠的头部视动跟踪反应、前置刺激反应。光损伤后 72h摘除眼球 ,冰冻切片后行HE、Rhodopsin免疫荧光染色 ,光镜观察。实验对照组为 7只双眼球摘除术后的大鼠。结果 随着光照时间的延长 ,动物的头部视动跟踪反应逐渐丧失 ,对照组反应最弱 ,前置刺激反应逐渐增强 ,对照组反应最强。结论 不同程度的视细胞损伤后的动物行为是不同的 ,随着损伤程度的加重 。

视网膜光损伤的药物防治

视网膜光化学损伤可致感光细胞凋亡和视网膜变性,严重者导致视力丧失。近10余年来,人们对药物防治光损伤进行了大量研究,包括神经营养因子、抗氧化剂、自由基清除剂、钙通道阻滞剂及皮质激素等。本文对各种药物的保护作用作一综述。

牛磺酸对大鼠视网膜光损伤保护作用的实验研究

目的 探讨牛磺酸对大鼠视网膜光损伤和视细胞凋亡的保护作用及其作用机制。方法 所有大鼠被随机分为牛磺酸用药组、阳性对照组、正常对照组。通过持续光照射 2 4h ,形成视网膜光损伤模型。光照后 3d ,通过光镜观察视网膜组织病理学结构 ,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况。结果 组织病理学结果显示 ,阳性对照组视网膜结构破坏严重 ,感光细胞内外节消失 ,外核层变薄 ,细胞核明显减少 ,而牛磺酸用药组无明显改变。牛磺酸治疗组视网膜细胞凋亡数明显低于阳性对照组(P <0 0 5 )。结论 牛磺酸对视网膜光损伤具有保护作用 。

驻景丸加减方对实验性视网膜光损伤闪光视网膜电图的影响

目的观察驻景丸加减方对视网膜光损伤后闪光视网膜电图(flashelectroretinogram,F-ERG)的影响。方法健康SD大鼠50只(100只眼),体重150～180g,随机分为高剂量组,中剂量组,低剂量组,模型组和正常组,每组10只(20只眼)。除正常组外,连续给药4周后,各组实验用大鼠接受1900±1069(Lux)绿色荧光灯24小时持续光照射。光照后继续给药1周,观察各组间闪光视网膜电图、视网膜形态的差异。结果F-ERG各波波幅组间比较,模型组较正常组显著降低(P<005),高剂量组较模型组显著升高(P<005)。中剂量组a波波幅较模型组升高明显(P<005)。结论中、高剂量的驻景丸加减方对视网膜光损伤后F-ERG中a波振幅的降低有保护作用;高剂量的驻景丸加减方可有效的保护光照后F-ERG中b波振幅的降低。

实验性大鼠视网膜光损伤模型的建立与研究

目的 :建立和研究视网膜光损伤动物模型 ,观察较强可见光对大鼠视网膜光损伤的病理变化。方法 :自制光损伤箱。取健康成年SD大鼠 35只 ,随机分成正常对照组(CON)、光损伤后 1d(D1)、3d(D3)、5d(D5 )、7d(D7)组 ,每组7只 ,各组大鼠在 12h明 12h暗环境中饲养 7d ,然后暗适应36h。D1、D3、D5、D7组大鼠采用 4 178Lux照度的可见光进行 12h间歇光照射 ,连续 3d ,总计 36h ,然后在正常环境中分别饲养 1d、3d、5d和 7d。大鼠以 10 %水合氯醛麻醉 ,分别用 4 %多聚甲醛液、3%戊二醛灌流固定 ,摘取眼球 ,制成石蜡切片及超薄切片 ,应用光镜、电镜观察。结果 :正常大鼠视网膜组织结构层次清楚 ,内、外节视杆排列整齐、规则。内、外核层排列紧密 ,染色均匀。光照后各组均可见光感受器形态的变化 ,其变化随着时间的延长而加重。D7组变化与D5组基本相似。主要变化为外核层变薄而稀疏。光感受器视杆外节排列紊乱 ,膜盘叠状结构解离。内节线粒体肿胀 ,空泡变。外核层细胞核染色质固缩 ,分布不均匀 ,向中央聚集。结论 :采用 4 178Lux照度的可见光较长时间 (36h)间歇照射可诱导大鼠视网膜光损伤 ,成功地模拟了大鼠视网膜光损伤模型。在光损伤的早期 ,即出现光感受器形态的变化 ,并随着时间的延长损伤逐渐加重。

小檗碱抗小鼠视网膜光损伤及P2X4受体调节作用研究

目的从小胶质细胞P2X4受体角度揭示小檗碱抗视网膜光损伤的部分作用机制。方法将健康清洁级小鼠完全随机分为空白组、LD组和BBR组,后两组持续给予照度为10000±1500 Lux的光照4 h建立视网膜光损伤模型,48 h后取材,比较各组小鼠视网膜形态学变化,并观察小胶质细胞及P2X4在视网膜中的阳性表达。结果与空白组比较,LD组小鼠视网膜明显变薄,细胞凋亡明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05),而BBR可缓解其凋亡情况;与空白组比较,LD组小鼠视网膜外核层(Outer Nuclear Layer,ONL)的小胶质细胞数量和P2X4表达均明显增加(P<0.05),而BBR组的小胶质细胞数量和P2X4表达均降低,以P2X4的表达降低最为明显(P<0.05)。结论小檗碱具有较好的抗视网膜光损伤的作用,这可能与BBR通过P2X4受体调控小胶质细胞的活动有关。

神经生长因子对小鼠视网膜光损伤后c-fos、c-jun表达的影响

目的进一步提高黄斑变性疾病的治疗效果。方法将54只BALB/C小鼠随机分为光照组24只、神经生长因子(NGF)组24只和对照组6只;前两组在自制光照箱中连续光照3 h制作光损伤模型,NGF组制模成功后即刻腹腔注射NGF 20μl(含NGF 2μg),光照组腹腔注射等量生理盐水,对照组不作任何处理。NGF组和光照组分别于制模后6 h、12 h、36 h和7 d各处死大鼠6只。光镜下观察各组小鼠视网膜组织结构的改变。应用免疫组织化学法检测各组小鼠视网膜组织凋亡相关基因c-fos、c-jun蛋白的表达。结果对照组视网膜组织结构层次清楚,外核层排列规则,光照组光照后出现视网膜细胞绒毛肿胀、断裂,线粒体肿胀,感光细胞及细胞核破坏,损伤主要发生在光感受器细胞层;对照组视网膜组织c-fos、c-jun几乎不表达,NGF组及光照组c-fos、c-jun表达均明显升高,但NGF组明显低于光照组(P<0.01)。结论 NGF对视网膜光照有保护作用,其机制可能为抑制c-fos、c-jun的表达,减少视网膜细胞凋亡。

复方光明胶囊对实验性大鼠视网膜光损伤的作用

目的研究视网膜光损伤动物模型,观察复方光明胶囊对手术显微镜光损伤大鼠视网膜作用的超微结构.方法SD大鼠30只(60只眼),随机分为高、中、低剂量组,模型组和正常组,每组6只动物(12只眼).造模前7 d给药,连续灌胃2周.除正常组以外各组实验用大鼠距角膜(150±3)mm照射,使大鼠眼在接受手术显微镜水平位时照度为(22 000±1 000)Lux,60 min的持续光照射.光照后继续给药1周,观察各组视网膜电镜的变化差异.结果正常大鼠视网膜组织结构层次清楚,内、外节视杆排列整齐、规则.内、外核层排列紧密,染色均匀;光照后各组均可见外核层变薄而稀疏;光感受器视杆外节排列紊乱,膜盘间隙部分断裂;内节线粒体肿胀;外核层细胞核染色质固缩,分布不均匀.药物剂量高、中、低组较模型组有改善.结论手术显微镜视网膜光损伤动物模型造模成功,复方光明胶囊各剂量组对视网膜光损伤后有一定的保护作用.

手术显微镜致大鼠视网膜光损伤中Caspase-3的表达

目的:探讨手术显微镜致大鼠视网膜光损伤中的半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate-specificproteinase-3,Caspase-3)的表达,探索葛根素(puerarin)对视网膜中Caspase-3表达的影响。方法:将48只SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、低剂量组和高剂量组。采用YZ20T眼科手术显微镜,距角膜距离为(150±3)mm照射右眼,照射时间为30分钟,照度为(22000±1000)Lux。光照后暗适应24小时。低剂量组、高剂量组尾静脉注射葛根素,空白对照组、模型对照组尾静脉注射等容量生理盐水。1次/d,连续给药7天。7天后取眼球,进行视网膜免疫组化检查,测定Caspase-3的表达。结果:空白对照组视网膜外核层细胞浆中Caspase-3阳性物质含量较少。模型对照组视网膜外核层细胞浆中Caspase-3阳性物质含量较多。用药各组视网膜外核层细胞浆中Caspase-3阳性物质有不同程度减少。结论:葛根素对手术显微镜导致的视网膜光损伤有修复作用。其作用机制可能是通过减少Caspase-3的表达从而拮抗细胞凋亡。

复方樟柳碱修复视网膜光损伤作用临床研究

目的 研究复方樟柳碱对治疗性视网膜光损伤的防治作用。方法 :采用自身前后对照设计 ,接受激光治疗的 5 4名患者 ,随机分为复方樟柳碱组、对照组及空白组。在激光治疗后 2 4小时开始药物治疗 ,持续用药两个月后 ,就激光区视阈值平均高度、各视点相对正常视阈值的偏移值进行随访评估并与激光治疗前后对比研究。结果 用药前后各组视丘高度差值对比有显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,各组激光区视点的视阈值偏移值于用药前后对比亦有显著性差异 (P <0 .0 1 )。结论 复方樟柳碱在视网膜激光损伤防治中有改善激光区视阈值平均高度 (降低视阈值 ,提高视敏度 )的作用 。

视网膜光损伤与中医“光毒”邪说理论探析

从视网膜光损伤的病变特点与中医邪毒理论角度出发,阐述光损伤致病性与中医"光毒"邪说的内在本质联系。

万寿菊提取物对大鼠视网膜光损伤过程中细胞凋亡因子Caspase-3的影响

目的:探讨万寿菊提取物对大鼠视网膜光损伤过程中细胞凋亡因子半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的影响。方法:SD大鼠40只,随机分为正常对照组、模型对照组、万寿菊提取物低剂量组与高剂量组,各10只。除正常对照组外,其余3组大鼠均缝成开睑,采用日光灯照射,照光强度(3000±100)Lux,持续12h。光照射完毕后立即拆除缝线送回暗环境饲养笼中饲养12h,再重复以上过程,连续3次,光照射时间总计36h,建立视网膜光损伤模型。各组在光照前充分暗适应36h,暗适应前万寿菊提取物低剂量组、高剂量组大鼠给药,1天1次,直至光照后7天。实验结束,处死大鼠,检测视网膜细胞中Caspase-3表达情况。结果:光照后模型对照组大鼠视网膜外核层细胞浆中Caspase-3阳性物质弥漫分布,含量增多。其面积、平均光密度、积分光密度和平均黑度均高于正常对照组(P<0.05),而万寿菊低剂量治疗组视网膜外核层细胞浆中Caspase-3阳性物质减少明显,四项指标与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量治疗组阳性物质减少不明显。结论:万寿菊提取物对大鼠视网膜光损伤有修复作用,其作用机制可能与减少Caspase-3的表达,从而拮抗细胞凋亡有关。