视网膜激光光凝对增殖性糖尿病视网膜病变患者视网膜前膜新生血管生成的作用

目的探讨增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)患者视网膜激光治疗对视网膜前膜新生血管的作用。方法收集PDR患者20例20眼,按照玻璃体手术前是否接受过视网膜激光光凝治疗分为光凝组和非光凝组。收集术中剥离的视网膜前膜行苏木精-伊红染色,观察组织病理学改变。应用免疫组织化学染色法检测CD34在新生血管内皮细胞中的表达,比较两组患者视网膜前膜新生血管的密度及单细胞新生血管密度。结果两组患者的人口基线特征和眼部特征比较,差异无统计学意义(P>0.05),非光凝组患者视网膜+++级新生血管8眼,光凝组患者为1眼,二者比较差异有统计学意义(P<0.01)。组织病理学结果表明,非光凝组增生膜内可见较多散在的毛细血管型新生血管,多数由单个血管内皮细胞构成管腔,部分区域可见较多出血;光凝组增生膜组织变薄,玻璃样变成分较多,新生毛细血管明显减少。免疫组织化学检测证实,新生血管内皮细胞中CD34均呈强阳性表达,光凝组400倍镜下观察,每个视野新生血管密度为(2.18±1.26)个,非光凝组为(10.00±6.15)个,差异有统计学意义(Z=-2.994,P<0.05)。结论视网膜激光光凝可抑制PDR患者视网膜前膜新生血管的形成,从而降低玻璃体手术治疗PDR的难度。

视网膜激光光凝对PDR患者视网膜前膜新生血管生成的作用

目的探析视网膜激光光凝(PRP)对增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)患者视网膜前膜新生血管生成的作用。方法选取2015年8月~2016年12月本院诊治的60例PDR病例为研究对象,随机分为实验组29例、对照组31例。均行玻璃体手术,仅实验组在术前接受PRP治疗。观察两组取得的有效性和视力、新增血管变化情况。结果实验组有效率(93.10%)、视力提高或不变概率(93.10%)、新生血管全部消退率(75.86%),均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论经PRP治疗,PDR患者的视力有所提升,视网膜处新生血管大幅度消退,治疗效果显著,故PRP疗法值得运用。

阻断促红细胞生成素抑制小鼠视网膜新生血管生成

目的：建立C57BL/6小鼠氧致血管增生性视网膜病变模型（oxygen induced retinopathy,OIR）,探讨阻断促红细胞生成素（Erythropoietin,EPO）对视网膜新生血管的抑制作用。方法：取鼠龄7d（P7）的健康C57BL/6小鼠置于75%±2%氧气浓度的密闭氧舱中5d,鼠龄12d（P12）时返回正常空气环境以建立氧诱导鼠视网膜新生血管模型;新生小鼠于P12~P16隔日给予玻璃体腔内注射0.5μL含有25ng（A组）,50ng（B组）,250ng（C组）可溶性EPO受体的PBS液以及不含EPO受体的PBS液（D组）。于P17时分批处死各组小鼠,小鼠眼球以4%多聚甲醛固定,制成病理切片,进行视网膜组织形态病理学观察计数突破内界膜新生血管细胞核数,了解视网膜新生血管增生程度。结果：计数病理切片突破内界膜新生血管细胞核数目,各组玻璃体内EPO受体注射组较PBS注射组新生血管细胞核数明显减少,差异有统计学意义（P〈0.01）。并且各不同浓度EPO受体组间新生血管细胞核计数差异亦有统计学意义（P〈0.01）,随着EPO受体浓度增高,突破内界膜新生血管内皮细胞数减少。结论：可溶性EPO受体玻璃体腔内注射能够阻断EPO的促新生血管生成作用,有望成为治疗眼部新生血管性疾病的新方法。

促红细胞生成素受体抗体抑制小鼠视网膜新生血管形成

目的:观察促红细胞生成素受体抗体(erythropoietin recep-tor antibody,EpoRA)对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法:将鼠龄为7d的C57BL/6J幼鼠置于750±20mL/L氧仓中连续饲养5d,建立高氧诱导的血管增生性视网膜病变模型。幼鼠20只右眼在建模前1d予以玻璃体内注射EpoRA 2μL作为治疗眼,左眼不注射作为对照眼。在H.E.染色的组织学切片上观察并计数突破视网膜内界膜进入玻璃体的新生血管内皮细胞核数目;用ADP酶组织化学法行视网膜铺片,观察视网膜血管改变。饲养在正常条件下的幼鼠作为正常对照组;模型幼鼠8只仅在玻璃体内注射生理盐水,作为阴性对照组。结果:在组织切片上,可见突破视网膜内界膜进入玻璃体腔内的新生血管内皮细胞核,在用EpoRA注射的右眼,明显少于未经EpoRA注射的左眼(17.20±5.42个vs23.47±8.43个;P<0.01)。ADP酶组织化学法视网膜铺片中,可见视网膜新生血管的密度和异常程度,在用EpoRA注射的右眼,明显轻于未经EpoRA注射的左眼以及阴性对照组。正常对照组未见明显异常。结论:EpoRA可抑制小鼠模型中的视网膜新生血管形成。

血管生成素-1对小鼠视网膜新生血管和血管内皮生长因子的抑制作用

目的探讨血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)体内抑制视网膜新生血管形成的作用及对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立视网膜缺血性病变动物模型。将32只小鼠随机分为4组:正常组、高氧对照组、大剂量治疗组(高氧+100 mg·L-1Ang-1)、小剂量治疗组(高氧+50 mg·L-1Ang-1)。前两组小鼠玻璃体内注射1μL BSS,后两组小鼠玻璃体内分别注射1μL不同浓度的Ang-1。视网膜切片HE染色,计数并比较各组小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数。免疫组织化学染色法检测各组小鼠视网膜切片VEGF的表达情况。结果吸入高氧小鼠视网膜均可见突出内界膜的新生血管内皮细胞,发生率为100%。高氧对照组可见突出细胞数为(24.69±2.61)个,大剂量治疗组为(6.56±1.37)个,小剂量治疗组为(10.83±1.81)个。大小剂量治疗组与高氧对照组相比新生血管细胞数明显减少(P<0.01)。在Ang-1治疗的两组中,随着剂量的加大,抑制视网膜新生血管形成的作用逐渐加强。高氧对照组(4.50±0.22)、大剂量治疗组(3.29±0.18)、小剂量治疗组(3.81±0.16)视网膜各层中VEGF表达均较正常组(2.23±0.20)明显增强,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与高氧对照组相比,大、小剂量治疗组VEGF表达水平明显降低(P<0.05)。结论 Ang-1能有效抑制高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成,且能减少VEGF的合成和分泌,其抗血管新生作用可能与抑制VEGF表达有关。

小胶质细胞在视网膜血管生成中的作用机制研究进展

视网膜小胶质细胞作为视网膜的常驻免疫细胞,不断监测其周围环境的变化,并通过与其他视网膜细胞的信号传导维持稳态。视网膜小胶质细胞不仅在视网膜血管系统的发育和生理过程中发挥重要作用,而且在病理性新生血管形成中也起着至关重要的作用。在某些视网膜病变中,活化的小胶质细胞通过神经血管耦联,促进异常血管生成,从而造成不可逆的损伤,但具体的作用机制尚不明确。本文简要综述小胶质细胞与视网膜新生血管生成的相关性,并讨论了参与该过程的细胞和分子信号机制,旨在为视网膜新生血管性疾病的预防和治疗提供新的有效的策略。

促红细胞生成素在视网膜新生血管形成中的作用

探讨促红细胞生成素(EPO)在增殖性视网膜新生血管形成中的作用。采用高氧诱导的方法制作小鼠增殖性视网膜病变模型,运用视网膜铺片免疫组化染色观察视网膜新生血管的形态。用RT-PCR及Western blot技术测定视网膜组织中EPO的表达水平。结果显示,模型鼠视网膜组织具有大片无灌注区和视网膜新生血管形成伴荧光渗漏。模型鼠视网膜组织中EPO mRNA及蛋白质表达水平在缺氧状态下逐渐升高,于缺氧48小时(出生后14天)到达高峰,然后缓慢下降,至出生后26天降至基线水平。这说明,氧诱导的增殖性视网膜病变模型鼠中,持续缺氧的视网膜组织通过增加EPO的表达,从而诱导视网膜新生血管的发生。

高氧诱导的视网膜新生血管模型鼠中血管生成素2及酪氨酸激酶受体表达的研究

目的研究高氧诱导的视网膜新生血管模型鼠中血管生成素2(Ang-2)及酪氨酸激酶(Tie-2)受体表达。方法高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立视网膜缺血性病变动物模型。将30只小鼠分为2组:正常组;高氧组。视网膜切片HE染色,计数各组小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数,并加以比较。于鼠龄17d取各组小鼠视网膜及前增生的血管膜,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法半定量测定Ang-2及Tie-2受体mRNA的表达。结果吸入高氧鼠每只眼均可见突出内界膜的新生血管内皮细胞,发生率为100%。高氧组Ang-2及Tie-2受体mRNA表达分别为对照组的3.7倍(P<0.05)、4.1倍(P<0.05)。结论血管抑素能有效抑制高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成,但并不影响VEGF的合成和分泌,其抗血管新生作用可能为抑制VEGF功能发挥。

血管生成促进因子在糖尿病视网膜病变新生血管形成中的作用

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病最常见和最严重的并发症之一。目前,DR的发病机制尚不明确,但近年来研究表明,血管生成促进因子与DR新生血管的发生、发展密切相关,是导致视网膜新生血管形成的主要致病因子。本文就血管生成促进因子在DR新生血管形成中的作用进行综述。

小鼠氧诱导视网膜新生血管形成中促红细胞生成素的变化

目的:观察C57BL/6小鼠氧诱导视网膜新生血管病变模型(oxygen-induced retinopathy,OIR)眼内促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)含量的变化。方法:新生C57BL/6小鼠20只,随机分为实验组(n=10)和对照组(n=10)。实验组小鼠于出生后7d(P7)与母鼠共置于密闭的氧箱,含氧75±5mL/L,共培养5d(P5)后回到正常氧环境,含氧20±1mL/L,建立OIR模型。对照组小鼠不进入氧箱,与母鼠一同饲养于正常氧环境。于P17处死各组小鼠,摘取右眼眼球制作组织切片,HE染色后行病理组织学检查,计数突破内界膜视网膜新生血管(retinal neovascularization,RNV)内皮细胞核数。采用放射免疫法测定实验组和对照组小鼠左眼视网膜组织EPO含量。结果:实验组小鼠视网膜突破内界膜RNV内皮细胞核计数为80.0±6.2个,而对照组仅为1.0±0.9个,两者差异有统计学意义(P<0.01)。实验组视网膜EPO含量为80.8±20.7U/L,对照组为14.4±6.8U/L,两者差异有统计学意义(P<0.01),且视网膜组织EPO表达与RNV增生程度呈明显正相关(r=0.58,P<0.01)。结论:小鼠视网膜新生血管形成与眼球局部EPO上调有关。

Ahmed青光眼引流阀植入联合丝裂霉素C及视网膜光凝治疗新生血管性青光眼的术前心理护理

新生血管性青光眼（NVG）是虹膜和小梁表面及房角有新生的纤维血管膜造成房角关闭所致的青光眼，是眼科临床治疗中较为棘手的问题之一。NVG行常规小梁切除术后滤过道易于瘢痕化，成功率较低，近年来新型的前房引流装置不断问世，青光眼引流阀有易植入、单象限操作、压力自身调节、可预防术后早期低眼压等优势；而抗代谢药物丝裂霉素对纤维细胞DNA复制有抑制作用，对各增殖期细胞有杀伤作用，可减少瘢痕形成，二者联合为难治性青光眼提供了一种新的有效的治疗途径。

免疫相关的巨噬细胞和髓样血管生成细胞在视网膜新生血管发生发展中的作用

视网膜新生血管是许多致盲性眼病主要的病理学改变,病因复杂,发病机制尚未阐明,治疗棘手。近年来大量研究证实,免疫相关的巨噬细胞和髓样血管生成细胞在其发生发展中发挥着重要作用,本文对此进行相关综述。

血管生成素在视网膜新生血管中的作用

视网膜新生血管形成与眼部多种疾病有关，如糖尿病性视网膜病变、眼底血管栓塞等缺血病变、新生儿视网膜病变等，视网膜新生血管形成以及与其相伴的渗出、出血、增生等一系列病理改变可严重破坏眼的结构和功能，并导致患者不可逆的视功能障碍。多种细胞因子参与新生血管生成的调控，其中血管生成素几乎完全特异于血管内皮细胞。近年来血管生成素在视网膜新生血管生成中的作用逐渐被认识，本文就血管生成素家族成员及其受体在视网膜新生血管生成机制的作用进行综述。

缺氧条件下自噬在视网膜血管内皮细胞血管生成中的作用

目的研究缺氧条件下自噬对体外培养的小鼠视网膜血管内皮细胞（RVECs）增生、迁移和管腔形成的影响。方法取清洁级C57BL/6J小鼠50只，采用组织块培养法分离和培养小鼠RVECs，采用CD34免疫荧光染色法对培养细胞进行鉴定。将生长良好的RVECs分为正常对照组、缺氧对照组及缺氧＋3-甲基腺嘌呤（3-MA）组。正常对照组细胞常规培养，缺氧对照组细胞在氧体积分数1%的环境下培养24 h，缺氧＋3-MA组细胞先用5 mmol/L 3-MA预处理4 h，然后在上述缺氧环境下培养24 h。采用Western blot法检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ）比值及细胞中Beclin-1的表达；透射电子显微镜下观察细胞内形成的自噬小体的超微结构；分别采用Click-iT EdU试剂盒、细胞划痕法和Matrigel胶法检测细胞增生率、细胞迁移情况及细胞管腔形成情况。 结果原代培养后5～7 d培养的细胞呈铺路石样排列生长，CD34表达阳性。透射电子显微镜下缺氧对照组细胞自噬小体明显多于正常对照组和缺氧＋3-MA组。正常对照组、缺氧对照组和缺氧＋3-MA组细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为0.243±0.030、0.658±0.032和0.405±0.095，Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.260±0.040、0.650±0.071和0.461±0.089；细胞增生率分别为（45.93±6.39）%、（22.74±2.35）%和（24.12±3.59）%；细胞划痕愈合率分别为（36.02±5.84）%、（57.26±11.98）%和（18.16±9.73）%；细胞管腔形成数分别为（29.20±6.10）、（41.40±4.04）和（22.00±2.92）个；总体比较差异均有统计学意义（F＝35.86、23.53、34.28、21.12、23.27，均P〈0.01）。与正常对照组相比，缺氧对照组细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1蛋白相对表达均明显增加，细胞增生率明显下降，划痕愈合率和管腔形成数明显增加，缺氧＋3-MA组细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin-1蛋白相对表达量、划痕愈合率和细胞管腔形成数较缺氧对照组明显降低。结论缺氧激活小鼠RVECs自噬，进而促进细胞迁移和管腔形成，自噬抑制剂3-MA可抑制自噬小体活性，并抑制RVECs的迁移和管腔形成能力。

自噬抑制联合抗-VEGF对视网膜血管内皮细胞血管生成的作用

目的观察自噬抑制联合抗-血管内皮生长因子(VEGF)对小鼠视网膜血管内皮细胞(RVECs)的增殖、迁移和管腔形成的作用。方法将RVECs随机分为4组:自噬抑制组、抗-VEGF组、自噬抑制+抗-VEGF联合组和对照组,4组细胞均在低氧条件下继续培养。分别采用Ed U法、Transwell法及Matrigel胶法检测细胞增殖、迁移和管腔形成。结果与对照组相比,其他3组的细胞增殖率、迁移细胞数和管腔形成数有不同程度的减少,且3-MA+抗-VEGF组的上述指标均明显小于3-MA组和抗-VEGF组。结论自噬抑制联合抗-VEGF在抑制视网膜新生血管中可能比单纯抗-VEGF发挥更好的作用。

自噬在高糖条件下视网膜色素上皮细胞表达血管内皮生长因子促进RF/6A细胞血管生成中的作用

目的研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)自噬对其表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移和管腔形成的影响。方法根据不同干预将ARPE-19细胞随机分为对照组、高糖组及3-甲基腺嘌呤(3-MA)+高糖组。对照组细胞在无糖DMEM培养基中常规培养24 h,高糖组细胞在DMEM培养基中加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h,3-MA+高糖组细胞先用10 mmol·L^-1 3-MA处理24 h,然后更换培养基再加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h。Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-related protein 1 light chain 3,LC3)II型和I型的比值(LC3-II/LC3-I)、Beclin-1及细胞中自噬相关基因3(autophagy-related gene 3,Atg3)的蛋白表达。ELISA法检测ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达。比较三组ARPE-19细胞LC3-II/LC3-I、Beclin-1、Atg3及VEGF的蛋白表达量。然后将以上三组ARPE-19细胞上清液分别加入RF/6A细胞培养基中,将RF/6A细胞也按以上方法分组,分别采用Transwell法及Matrigel胶法检测并比较三组RF/6A细胞迁移数及细胞管腔形成数。结果对照组、高糖组和3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/LC3-I比值分别为0.405±0.095、0.932±0.024和0.635±0.048;Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.205±0.035、0.590±0.120和0.425±0.082;Atg3蛋白相对表达量分别为0.277±0.035、0.539±0.071和0.389±0.019。ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达量三组分别为(44.03±9.08)ng·L^-1、(205.70±17.90)ng·L^-1和(112.52±21.06)ng·L^-1;RF/6A细胞迁移数三组分别为(125.60±6.35)个、(153.60±19.20)个和(67.40±7.95)个;细胞管腔形成数三组分别为(12.22±0.84)个、(18.44±1.68)个和(5.44±0.51)个;整体比较差异均有统计学意义(均为P<0.01)。与对照组相比,高糖组ARPE-19细胞的LC3-II/LC3-I比值、Beclin-1及Atg3蛋白相对表达量均明显增加(均为P<0.01),VEGF表达水平均明显升高(P<0.01),RF/6A细胞迁移数和管腔形成数均明显增加(均为P<0.01),3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/I比值、Beclin-1和Atg3蛋白相对表达量、VEGF表达量、RF/6A细胞迁移数和细胞管腔形成数均较高糖组明显降低(均为P<0.01)。结论高糖激活ARPE-19细胞自噬,进而上调VEGF的表达并促进RF/6A细胞迁移和管腔形成,自噬抑制剂3-MA可抑制ARPE-19细胞自噬,并下调VEGF的表达从而抑制RF/6A细胞的血管形成能力。

内皮抑素对视网膜新生血管中干扰素α表达的影响

目的 观察血管生成抑制因子内皮抑素 (endostatin ,ES)对视网膜新生血管中干扰素α(Interferonα,IFN α)表达的影响。方法 通过缺氧的方法建立小鼠视网膜新生血管模型 36只 ,随机分为高氧组及ES治疗组。ES治疗组小鼠在出氧箱后 12h、36h ,玻璃体腔内注射 1μg的ES。另将生活在正常氧环境中的 18只同龄小鼠作为正常对照组。提取 3组小鼠视网膜总RNA ,通过RT PCR方法定量检测IFN α在 3组小鼠视网膜中的表达。结果 RT PCR结果显示氧致视网膜病变视网膜中IFN α的表达升高 ,达到 (4.92± 1.5 2 )相对拷贝数 ,与正常对照组 (3.76± 1.89)相对拷贝数比较有统计学意义 (P <0 0 5 ) ;ES作用后IFN α的表达为 (6 .81± 1.6 7)相对拷贝数 ,较给氧组比较有明显增强 ,统计学分析有差异 (P <0 .0 5 )。结论 ES可以上调IFN αmRNA基因的表达 ,这可能是ES抑制视网膜新生血管的生成机制之一。

结缔组织生长因子mRNA在增生性糖尿病视网膜病变视网膜前纤维血管膜中的表达

目的 观察结缔组织生长因子 ( connective tissue growth factor,CTGF) m RNA在增生性糖尿病视网膜病变 ( proliferative diabetic retinopathy,PDR)纤维血管性视网膜前膜中的表达。方法 采用原位杂交方法 ,对玻璃体切割术获得的 6例 PDR的纤维血管性膜进行 CTGF m RNA的检测。结果 2例纤维血管性膜标记为阳性染色 ( ) ,4例为强阳性染色 ( ) ;每例标本随机计数 10 0个细胞中的阳性细胞数 ,取 6例标本的平均值 ,计算平均阳性率为 77% .阳性细胞多见于成纤维细胞样细胞和新生血管的血管内皮细胞。结论 PDR纤维血管性膜形成过程中成纤维样细胞及血管内皮细胞在 TGF-β等生长因子的刺激下 ,CTGF m RNA显著上调 ,CTGF参与了 PDR纤维血管性膜的形成和发展。

血管生成素-2和血管内皮生长因子在酸中毒诱导早产儿视网膜病的大鼠动物模型中的表达

目的建立酸中毒诱导的早产儿视网膜病(ROP)大鼠动物模型(AIR模型),研究血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素-2(Ang-2)的表达变化规律,探讨其与ROP血管发育及新生血管形成之间的关系。方法 1日龄SD新生大鼠随机分为酸中毒诱导模型组(ROP组)和正常对照组(C组),通过管饲NH4Cl方法建立AIR模型。应用免疫组化方法标记视网膜VEGF、Ang-2的表达水平。结果免疫组化结果显示,8日龄ROP大鼠VEGF、Ang-2的表达水平明显低于对照组(P<0.05),而在停止管饲NH4Cl后的10日龄、13日龄ROP组大鼠视网膜VEGF、Ang-2表达水平明显高于对照组(P<0.05)。在实验过程中VEGF及Ang-2的表达趋势相同。结论酸中毒使VEGF及Ang-2的蛋白表达水平下调;停止管饲NH4Cl后2者表达水平上调;2者变化过程与视网膜新生血管发展进程有关。VEGF、Ang-2可能在视网膜正常血管发育及ROP的新生血管化进程中起到重要作用。

和厚朴酚抑制视网膜新生血管形成的实验研究

目的:观察和厚朴酚对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法:氧诱导幼鼠建立视网膜NV模型。治疗组分别腹腔注射和厚朴酚100 mg/kg和50 mg/kg,每日2次共5 d;对照组注射等量BSS。视网膜铺片了解血管改变;组织切片计数突破视网膜内界膜血管内皮细胞核;免疫组化检测视网膜VEGF和MMP-2表达。结果:治疗组视网膜血管密度降低,新生血管数减少。治疗组突破内界膜胞核数较对照组明显减少;大剂量组减少更显著。治疗组视网膜VEGF和MMP-2表达较对照组明显减少;大剂量组更少,两者差异显著。结论:和厚朴酚可以有效抑制视网膜新生血管形成,呈剂量依赖关系。