LPS刺激对大鼠视网膜小胶质细胞CD80、CD86和CD40表达的影响

目的研究脂多糖(LPS)刺激对CD80、CD86、CD40在大鼠视网膜小胶质细胞上表达的影响,探讨视网膜小胶质细胞在视网膜和视神经病变中与T细胞活化的关系。方法分离培养大鼠视网膜小胶质细胞并进行OX42染色鉴定,当细胞培养达80%融合状态时分为正常培养组和LPS刺激组。采用RT-PCR法检测两组细胞CD80、CD86和CD40 mRNA的表达,硝酸还原法和ELISA法检测两组细胞一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNFα-)的分泌量。结果RT-PCR检测显示,LPS刺激组的视网膜小胶质细胞CD80、CD86和CD40 mRNA的表达较正常培养组显著增加,两组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。正常培养组的视网膜小胶质细胞有少量NO和TNFα-分泌,LPS刺激组的小胶质细胞培养上清液中NO和TNFα-的分泌量较正常组显著增加[(18.10±1.57)μmol/Lvs(1.55±0.15)μmol/L,(51.07±4.30)pg/mLvs(2.37±0.31)pg/mL],两组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论培养的大鼠视网膜小胶质细胞有共刺激分子表达,LPS刺激后表达上调,提示视网膜小胶质细胞可能与T细胞活化有关。

新生Long Evans大鼠视网膜小胶质细胞原代培养及鉴定

目的:建立稳定高产的新生Long Evans大鼠视网膜小胶质细胞(retinamicrogliacellRMG)体外培养、分离的方法。方法:取出生3d内的LongEvans新生大鼠视网膜神经上皮层进行混合细胞培养,10～12d后振荡分离,纯化培养得到小胶质细胞;小胶质细胞的特异性标记IB-4及CD11b进行组化及细胞免疫荧光鉴定,扫描电镜观察细胞表面突起。结果:得到纯度较高的小胶质细胞,IB-4组化及CD11b细胞免疫荧光鉴定纯度分别为94.5%和95.8%,扫描电镜观察细胞表面为棘状突起,明显与巨噬细胞的细胞表面区别。结论:本方法可以得到纯度高的视网膜小胶质细胞。

视网膜小胶质细胞与青光眼

近年来,小胶质细胞因其作为中枢神经系统中最有代表性的免疫细胞而成为青光眼免疫学发病机制的研究热点。其神经保护与神经毒性的双重作用归因于它对一系列病变做出反应后所能合成和分泌的物质不同。因此我们就视网膜小胶质细胞的青光眼免疫发病机制及治疗的展望进行综述。

SD大鼠视网膜小胶质细胞原代培养方法的改良

目的对经典的原代视网膜小胶质细胞体外纯化培养方法进行简单的改良以提高细胞产量。方法在视网膜小胶质细胞原代培养过程中以McCarthy等的经典方法为基础,寻找适当的初始种植密度,并在初次振荡分离后继续培养以获得多次产出,使用免疫细胞化学染色方法进行小胶质细胞纯度鉴定。结果视网膜小胶质细胞原代培养最宜初始种植密度为1×106/mL,多次分离纯化获得的视网膜小胶质细胞均达到97%以上的纯度。结论视网膜小胶质细胞原代培养过程中,以适当的初始种植密度和多次振荡分离方法可在保证有效纯度的基础上提高细胞产量。

视网膜小胶质细胞关于青光眼诱导的视神经损伤的研究进展

随着对青光眼性视功能丧失认识的不断深入,发现青光眼是一种以高眼压、疼痛和视网膜神经节细胞变性为特征的复杂疾病,它会造成不可逆转的视力损害和失明。尽管多种原因与青光眼视网膜神经节细胞损伤有关,但视网膜小胶质细胞因其作为中枢神经系统中最有代表性的免疫细胞而成为青光眼发病机制的研究热点之一。因此,我们就视网膜小胶质细胞及青光眼视神经损伤之间的相互作用关系进行综述。

视网膜小胶质细胞参与糖尿病视网膜神经变性的分子机制研究进展

糖尿病视网膜神经变性(DRN)是由高血糖引起的视网膜神经血管单位破坏和血视网膜屏障功能障碍的一类疾病,神经元凋亡是该疾病的主要特征,可造成患者与视觉相关的生活质量下降。视网膜小胶质细胞(RMC)是视网膜胶质细胞的主要种群之一,主要参与视网膜神经元的发育,并维持视网膜神经元的功能。已有研究表明RMC的功能改变与DRN密切相关,靶向RMC可减少视网膜神经元损伤并减缓DRN的发生发展。本文就RMC参与DRN及其调控靶点和治疗药物展开综述,以期提供更多有效的防治策略。

视网膜小胶质细胞在年龄相关性黄斑变性中的作用研究进展

年龄相关性黄斑变性(AMD)是60岁以上人群致盲的主要原因,属于神经退行性病变。目前已证实慢性炎症与老年化是AMD发病的主要因素,可增加AMD的发病风险,促使病情进展。视网膜小胶质细胞(RMG)是视网膜免疫系统的主要细胞,具有"双刃剑"作用,可影响视网膜病变的发展和转归,近年来已成为眼科领域的重点研究方向。本文就RMG在AMD中的异常免疫调节等作用进行综述。

激活的小胶质细胞在大鼠视网膜缺血再灌损伤模型中的作用

目的探讨活化的小胶质细胞在视网膜缺血再灌注损伤过程中的作用。方法前房灌注法建立视网膜缺血再灌注动物模型,在损伤发生后2 h、12 h、24 h、48 h、72 h,采用免疫组织化学染色方法检测特异性抗原标志物CD68的表达,观察活化小胶质细胞的分布、活化程度等,同时观察相应时间点的视网膜超微结构变化。结果对照组中视网膜小胶质细胞主要位于神经节细胞层。缺血再灌注损伤后2 h组视网膜小胶质细胞的分布部位、表达量等基本与对照组相同;缺血再灌注损伤后12 h组视网膜中CD68+细胞表达增多,内丛状层可见阳性细胞。缺血再灌注损伤后24 h组CD68+细胞表达明显增多,部分向视网膜外层迁移。缺血再灌注损伤后48 h组进入视网膜外层的CD68+细胞多数出现于视网膜内丛状层、内核层、外丛状层。缺血再灌注损伤后72 h组活化小胶质细胞数量达到最高水平。视网膜超微结构显示:缺血再灌注损伤后12 h组开始出现损伤表现,视网膜神经节细胞间隙扩大、光感受器细胞外节膜盘疏松变形、可见散在小胶质细胞;缺血再灌注损伤后24 h组病变继续加重,小胶质细胞数量明显增多;缺血再灌注损伤后72 h组病变继续加重,视网膜神经节细胞数量明显减少,细胞核膜肿胀溶解,细胞器溶解,大鼠视网膜神经节细胞层内可见凋亡小体、小胶质细胞,证明了小胶质细胞对光感受器的损伤作用。结论视网膜缺血再灌注损伤出现明显小胶质细胞活化,活化的小胶质细胞在视网膜超微结构的损伤中发挥着重要作用。

小胶质细胞在糖尿病视网膜病变发病机制中的作用

本文阐述近年来通过科学研究,科学工作者坚持科学精神,努力探索小胶质细胞在糖尿病视网膜病变发病机制中所起的作用,提出其可能通过炎症因子的刺激,释放炎症介质,参与免疫炎症反应,从而损伤视网膜血管。了解其作用机制,为糖尿病视网膜病变的防治提供了新的思路。

视网膜小胶质细胞与糖尿病视网膜病变的关系

小胶质细胞是视网膜组织中来源于髓系祖细胞并具有免疫活性的一类细胞。正常情况下小胶质细胞处于静息状态，对周围环境起免疫监视作用；组织发生病变时，小胶质细胞活化，参与免疫与炎症反应，一方面可对病变组织起保护与修复作用，另一方面也可加重组织的损伤。小胶质细胞活化是糖尿病视网膜病变的神经病理学特征之一，提示其在病变中发挥重要功能。本文就视网膜小胶质细胞的生物学特性、作用及其活化与糖尿病视网膜病变的关系作一综述。（国际眼科纵觉，2012，36：57—61）

体外共培养模式下神经干细胞对视网膜小胶质细胞生物学功能的影响

目的:通过构建体外共培养体系,探讨神经干细胞(NSCs)对脂多糖(LPS)活化后的视网膜小胶质细胞(RMG)生物学功能的影响及TIMP1/MMP9途径在其中的可能作用。方法:采用振荡分离法获取C57/BL6小鼠原代RMG,通过免疫荧光技术检测细胞Iba1的表达对其进行鉴定。采用含有LPS的培养基(终浓度为1μg·mL^-1)刺激RMG 24h后,将其分为LPS对照组、NSCs组、TB-NSCs组,其中NSCs组将RMG与NSCs共培养24 h,TB-NSCs组将RMG与用中和性抗体封闭TIMP1的NSCs共培养24h;同时,未予以LPS刺激的RMG作为空白对照组。采用免疫荧光技术检测各组RMG的Ki67表达情况,观察其增殖能力;TUNEL技术检测各组RMG凋亡情况;ELISA方法检测各组RMG上清液中TNF-α、IL-1β的蛋白质量浓度。结果:采用振荡分离法获取的原代RMG经免疫荧光染色鉴定Iba1呈阳性。NSCs组Ki67阳性率较LPS对照组降低(P<0.05),而TB-NSCs组Ki67阳性率较NSCs组升高(P<0.05)。NSCs组TUNEL阳性率较LPS对照组明显升高(P<0.05),而TB-NSCs组TUNEL阳性率与NSCs组间差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组、LPS对照组、NSCs组、TB-NSCs组RMG上清液中TNF-α蛋白质量浓度分别为(2.10±0.65)、(25.69±2.01)、(20.01±1.63)、(23.76±1.45)ng·mL^1,总体比较差异显著(FTNF-α=302.65,PTNF-α<0.05);IL-1β蛋白质量浓度分别为(1.77±0.74)、(15.38±1.18)、(10.88±0.95)、(13.45±1.41)ng·mL^-1,总体比较差异非常显著(FIL-1β=179.84,PIL-1β<0.05);其中,NSCs组TNF-α及IL-1β蛋白质量浓度均较LPS对照组显著降低(P<0.05),TB-NSCs组TNF-α及IL-1β蛋白质量浓度较NSCs组明显升高(P<0.05)。结论:体外共培养模式下,NSCs可抑制RMG增殖能力,提高其凋亡水平,并抑制其分泌促炎因子TNF-α及IL-1β,该效应可能与调控TIMP1/MMP9相关。

基于核苷酸结合的寡聚结构域1/受体相互作用蛋白2通路探讨N-乙酰-5-羟色胺调控大鼠视网膜缺血再灌注后小胶质细胞极化的机制

目的观察N-乙酰-5-羟色胺(NAS)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)后视网膜小胶质细胞极化的影响,并基于核苷酸结合的寡聚结构域1(NOD1)/受体相互作用蛋白2(Rip2)通路初步探讨其机制。方法采用随机数字表法将60只雄性Sprague Dawley大鼠分为假手术组(Sham组)、RIRI组、NAS组,分别为21、21、18只,以右眼为实验眼。RIRI组、NAS组大鼠采用前房高眼压法建立RIRI模型。NAS组大鼠分别于建模前及建模后30 min腹腔注射10 mg/kg NAS。建模后24 h,苏木素-伊红、免疫组织化学染色观察各组大鼠视网膜形态学变化,计数视网膜神经节细胞(RGC);免疫荧光染色观察NAS干预对大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响。转录组测序筛选Sham组、RIRI组间差异基因,蛋白质免疫印迹法(Western blot)、实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)进行验证。免疫组织化学染色、Western blot、RT-PCR观察NAS对大鼠视网膜组织及小胶质细胞中NOD1、Rip2蛋白、mRNA表达的影响。一般线性回归分析NAS组、RIRI组大鼠视网膜组织中NOD1+细胞数差值与M1、M2型小胶质细胞数差值的相关性。结果Sham组大鼠视网膜可见大量RGC;建模后24 h,与Sham组比较,RIRI组大鼠视网膜内层厚度显著增加、RGC数量显著减少;NAS组大鼠视网膜内层厚度显著变薄,RGC数量显著增多。与Sham组比较,RIRI组大鼠视网膜M1、M2型小胶质细胞数显著增多;与RIRI组比较,NAS组大鼠视网膜M1型小胶质细胞数显著减少,M2型小胶质细胞显著增多。三组大鼠视网膜M1、M2型小胶质细胞数比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。转录组测序结果显示,建模后24 h,视网膜NOD1、Rip2为重要差异基因;RIRI组视网膜中NOD1、Rip2 mRNA、蛋白相对表达量显著高于Sham组,差异均有统计学意义(P<0.05)。RIRI组视网膜小胶质细胞中NOD1+、Rip2+细胞数及mRNA、蛋白相对表达量显著高于Sham组,NAS组亦较Sham组显著升高,但低于RIRI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。RIRI组视网膜小胶质细胞中离子钙接头蛋白1(Iba-1)+/NOD1+及Iba-1+/Rip2+细胞数较Sham组显著增多,NAS组较RIRI组显著减少,但仍显著多于Sham组,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,NAS组、RIRI组视网膜NOD1+、Rip2+细胞数差值与M1型小胶质细胞数差值呈正相关(r=0.851、0.895),与M2型小胶质细胞数差值呈负相关(r=-0.797、-0.819),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NAS可促进RIRI大鼠视网膜小胶质细胞M2型极化,抑制M1型极化,其机制与NOD1/Rip2通路有关。

米诺环素对视网膜神经保护作用的研究进展

米诺环素(minocycline)是一种第2代人工半合成的四环素类药,口服吸收好,脂溶性高,可穿透血-脑屏障,对人安全,已在中枢神经系统和视网膜疾病中表现出显著的神经保护作用。已知视网膜小胶质细胞在多种视网膜疾病中均有激活并参与病变发展,而米诺环素神经保护作用机制主要为抑制小胶质细胞和caspase-3激活。本文对米诺环素神经保护作用机制及在视网膜疾病中的保护作用做一综述。

转胶蛋白-2抑制高糖诱导的小胶质细胞炎症反应的转录组测序分析

目的分析高糖诱导的BV2小胶质细胞基因表达水平和信号通路改变,初步探讨转胶蛋白-2(TAGLN2)调控细胞炎症反应和代谢进程的机制。方法基础研究。BV2细胞分为甘露醇(Man)组、葡萄糖(Glu)组、过表达对照(Con)Glu组、过表达TAGLN2 Glu组、沉默Con Glu(shCon Glu)组、沉默TAGLN2 Glu(shTAGLN2 Glu)组。Man组细胞置于含25 mmol/L Man、25 mmol/L Glu的改良Eagle培养基(DMEM培养基)中培养;Glu组、Con Glu组、TAGLN2 Glu组、shCon Glu组、shTAGLN2 Glu组细胞置于含50 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基中培养。培养24 h后,采用高通量测序技术对各组细胞进行转录组测序,筛选显著差异表达基因(DEG)。DEG筛选标准为|log2(差异表达倍数)|≥1且P≤0.05。对筛选得到的DEG进行基因注释(GO)功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)的信号通路富集分析和蛋白-蛋白互作网络分析。采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测DEG mRNA相对表达量。组间数据比较采用独立样本t检验。结果与Man组比较,Glu组共筛选出517个DEG,其中上调、下调基因分别为277、240个。KEGG通路分析结果显示,上调的DEG显著富集在核因子(NF)-κB和Jak-信号转导和转录激活因子(STAT)信号通路等免疫系统进程;下调的DEG显著富集在糖胺多聚糖的降解和甘油酯等代谢进程。与Con Glu组比较,TAGLN2 Glu组共筛选出480个DEG,其中上调、下调基因分别为147、333个。上调的DEG显著富集在脂肪酸、甘油脂和丙酮酸等代谢进程;下调的DEG显著富集在NF-κB、Jak-STAT和肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等免疫系统进程。与shCon Glu组比较,shTAGLN2 Glu组共筛选出582个DEG,其中上调、下调基因分别为423、159个。上调的DEG显著富集在TNF、趋化因子信号通路等免疫系统进程;下调的DEG基因主要富集在模式识别受体信号通路。RT-PCR检测结果显示,与Con Glu组比较,TAGLN2 Glu组细胞中Card11(t=13.530)、Icos(t=3.482)、Chst3(t=6.949)、Kynu(t=5.399)、白细胞介素(IL)-1β(t=2.960)、TNF-α(t=5.800)、IL-6(t=3.130)、干扰素-γ(t=7.690)、IL-17(t=6.530)mRNA相对表达量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TAGLN2可能通过NF-κB和Jak-STAT信号通路抑制高糖诱导的小胶质细胞炎症反应;Card11、Icos、Chst3、Kynu在TAGLN2抗炎过程中可能发挥了重要作用。