骨髓增生异常综合征患者外周血单个核细胞中视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1的表达

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1(RIZ1)的表达及其临床意义。方法选取2012年7月至2015年7月于新乡医学院第一附属医院收治的MDS患者86例为研究对象(MDS组),并选取同期体检健康者90例作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测PBMC中RIZ1蛋白及其mRNA表达水平,并分析RIZ1表达与MDS患者临床病理特征的关系。结果对照组和MDS组受试者PBMC中RIZ1 mRNA表达水平分别为1.73±0.41和0.47±0.18,MDS组患者PBMC中RIZ1 mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05)。对照组和MDS组受试者PBMC中RIZ1蛋白表达水平分别为1.32±0.36和0.35±0.22,MDS组患者PBMC中RIZ1蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。RIZ1蛋白表达与MDS患者的年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白水平及血小板计数无关(P>0.05),而与骨髓原始细胞比例、世界卫生组织(WHO)分型及染色体核型有关(P<0.05)。结论 RIZ1在MDS患者PBMC中呈低水平表达,并与患者的骨髓原始细胞比例、WHO分型及染色体核型显著相关,这为MDS的早期诊断和靶向治疗提供了新的思路。

上调视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1后食管癌细胞基因表达谱的变化

目的 观察转染视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1（RIZ1）后,食管鳞状细胞癌TE13细胞株基因表达谱的改变.方法 培养TE13细胞株,1∶10传代后培养至对数生长期,脂质体法分别转染pcDNA3.1（＋）和pcDNA3.1（＋）/RIZ1真核表达载体,转染成功后,应用Agilent人类全基因表达谱基因芯片筛选转染前后的差异基因（差异倍数≥2.0或≤0.5）,用聚合酶链反应（PCR）验证结果和对差异基因功能分析.结果 差异基因总共有2123个,其中上调960个,下调1163个,功能主要集中在细胞发育、病毒复制的监管等.RIZ1基因可能参与包括细胞因子受体互相作用等多种信号通路.结论 RIZ1基因通过多种途径发挥作用,为进一步研究RIZ1基因与食管癌间的关系提供了依据.

视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1调控肥胖和肿瘤信号通路研究综述

视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1(retinoblastoma-interacting zinc finger protein 1,RIZ1)基因,又称PRDM2(positive regulatory domain 2)基因,是PRDM基因家族一员,其蛋白序列包含1个PR结构域、1个核激素受体结合基序、8个锌指结构域和1个视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)相互作用基序。RIZ1主要定位于细胞核内,在核内发挥转录抑制因子、基因调控、蛋白质-蛋白质相互作用等功能。RIZ1是代谢通路的重要参与者,其通过调控代谢相关基因影响基础代谢,抑制肥胖的形成;RIZ1功能突变或含量不足与多种肿瘤发生发展相关,其通过激活下游致癌基因或调控代谢参与肿瘤进程。RIZ1通过v-akt鼠科胸腺瘤病毒癌基因同源物Ⅲ(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog 3,AKT3)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1),以及作为协同激活剂等方式分别调控AKT/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、IGF-1、雌激素这3条肿瘤和肥胖相关分子信号通路。3条分子通路功能有差异且其下游分子存在交叉,提示RIZ1在不同年龄、性别和器官中的作用可能不同。详细研究RIZ1与RIZ2在代谢进程中的调控作用有助于全面了解RIZ1参与肥胖和肿瘤形成的机制。未来基于RIZ1靶点进行诊断研究或功能恢复可能对代谢性疾病和肿瘤的诊断和治疗有重要意义。

视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1真核表达质粒对人食管癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用

食管癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病和死亡平均水平位于恶性肿瘤前列。目前，食管癌的治疗主要以手术切除、化疗为主，但这些治疗手段不能明显改善患者5年生存率，因此寻求新的食管癌的治疗方法尤为重要。近年来肿瘤的基因治疗成为人们关注的焦点，有关研究认为，视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1（RIZ1）其正常表达可导致细胞生长阻滞并诱导细胞凋亡，发挥抑癌基因的作用。我们通过建立人食管癌TE13细胞裸鼠移植瘤模型，采用瘤体内直接注射RIZ1真核表达质粒的方法，观察抑癌基因RIZ1对人食管癌细胞TE13裸鼠移植瘤生长的影响。

视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因RIZ1／RIZ2表达失衡调控食管鳞癌细胞凋亡的研究

目的探讨在食管鳞癌中视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因（RIZl／RIZ2）表达失衡对食管鳞癌细胞凋亡的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）的方法检测食管鳞癌组织及正常食管上皮组织中RIZl及RIZl＋RIZ2mRNA表达水平，选取前期实验中RIZl基因表达缺失的食管鳞癌细胞株ECl09，采用脂质体转染的方法实验组转染pcDNA3．1（＋）／RIZl，对照组转染空真核表达载体pcDNA3．1（＋），Real—timePCR、Westernblot分别检测RIZlmRNA及蛋白表达水平，验证转染效率，转染成功后Real—timePCR法检测RIZl＋RIZ2mRNA表达水平的变化，同时采用流式细胞仪检测食管鳞癌细胞的凋亡。结果食管鳞癌组织中RIZlmRNA表达水平低于正常食管上皮组织，相对表达量分别为1．00和28．10±2．30，差异有统计学意义（t=一57．758，P=0．ooo），而两者间RIZl＋RIZ2mRNA表达水平分别为1．00和1．08±0．31，差异无统计学意义（t=一1．180，P=0．249），食管鳞癌细胞株ECl09转染RIZl成功后，与对照组比较，RIZl基因mRNA表达水平上调，相对表达量分别为10．83±1．94和1．00，差异有统计学意义（t：一11．308，P=0．000），RIZl＋RIZ2mRNA的表达水平未见变化，相对表达量分别为0．98±0．08和1．00，差异无统计学意义（t=0．581，P=0．592），转染RIZl后食管鳞癌细胞株ECl09凋亡率升高，细胞凋亡率分别为（54．97±2．33）％和（38．29±8．44）％，差异有统计学意义（t=一4．560，P=0．010）。结论食管鳞癌中存在RIZl／RIZ2的表达失衡，这种表达失衡有可能引发细胞凋亡，参与食管鳞癌的发生、发展。

SNHG17通过调节miR-23b-3p和ZHX1对胶质母细胞瘤恶性表型的调控作用研究

目的研究小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)通过miR-23b-3p和锌指结构同源框蛋白1(ZHX1)调控胶质母细胞瘤(GBM)的恶性表型的作用。方法选取2020年1月至2022年10月广西壮族自治区脑科医院神经外科诊断为GBM的33例患者的手术标本,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测GBM样本和癌旁正常组织中的SNHG17、miR-23b-3p和ZHX1的表达,通过Pearson相关分析评估SNHG17,miR-23b-3p及ZHX1之间的表达相关性。使用GBM细胞系A172和DK-MG作为细胞模型,利用细胞转染技术将细胞分为si-NC组(转染空白抑制剂)、si-SNHG17组(转染si-SNHG17#2)、si-SNHG17+miR-23b-3p inhibitor组(转染si-SNHG17#2+miR-23b-3p inhibitor),采用CCK-8和EdU法检测GBM细胞的增殖能力,使用Transwell实验评估GBM细胞的迁移和侵袭能力。使用qRT-PCR技术及Western blot实验检测SNHG17和miR-23b-3p的相互调节及两者对ZHX1的调控作用。结果GBM组织中的SNHG17和ZHX1表达水平高于癌旁正常组织,miR-23b-3p表达水平低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。在GBM组织中,SNHG17与miR-23b-3p的表达呈负相关(r=-0.711,P<0.05),而与ZHX1的表达呈正相关(r=0.648,P<0.05);miR-23b-3p和ZHX1的表达呈负相关(r=-0.637,P<0.05)。si-SNHG17组中miR-23b-3p表达高于si-NC组,GBM细胞的增殖、迁移、侵袭能力及ZHX1的表达水平均低于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-SNHG17+miR-23b-3p inhibitor组中miR-23b-3p表达低于si-SNHG17组,GBM细胞的增殖、迁移、侵袭能力及ZHX1的表达水平高于si-SNHG17组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SNHG17通过调节miR-23b-3p/ZHX1轴促进GBM细胞的增殖、迁移和侵袭进程,提示SNHG17可能是GBM的一个潜在的治疗靶点。

瘢痕疙瘩患者视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因第8外显子A（8）和A（9）位点突变研究

目的研究瘢痕疙瘩患者视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因（RIZ）第8外显子A（8）和A（9）位点突变情况。方法2003年1月-2007年12月，笔者单位收治符合入选标准的门诊及住院瘢痕疙瘩患者19例。采集患者瘢痕疙瘩组织3～5g、外周静脉血3mL，分别提取基因组DNA并测定浓度，PCR法扩增获取RIZ第8外显子A（8）和A（9）位点片段，产物行琼脂糖凝胶电泳检测大小，柱层析法纯化后进行DNA测序，寻找A（8）和A（9）位点片段突变，并判定突变种类和类型，对比瘢痕疙瘩组织和外周静脉血的基因突变是否一致。对数据行McNemar检验。结果提取的瘢痕疙瘩组织和外周静脉血DNA质量浓度分别为0．54、0．37μg／μL，均〉0．10μg/μL；瘢痕疙瘩组织和外周静脉血RIZ第8外显子A（8）位点片段DNA的PCR产物大小分别为235、238bp，A（9）位点分别为242、244bp，与所设计DNA片段大小基本一致；瘢痕疙瘩组织和外周静脉血RIZ第8外显子A（8）位点片段DNA的PCR产物纯度分别为1．81、1．75，A（9）位点分别为1．82、1．78，均〉1．50。18例患者瘢痕疙瘩组织RIZ第8外显子A（8）位点发生突变，共6种基因突变，包括4种点突变、2种移码突变；9例患者瘢痕疙瘩组织RIZ第8外显子A（9）位点发生突变，共9种基因突变，包括7种点突变、2种移码突变。无一例患者外周静脉血RIZ第8外显子A（8）、A（9）位点发生突变。与外周静脉血比较，患者瘢痕疙瘩组织RIZ第8外显子A（8）和A（9）位点的突变均有统计学意义（X2=16．06、7．11，P〈0．05）。结论患者瘢痕疙瘩RIZ第8外显子A（8）和A（9）位点发生点突变和移码突变，这可能与瘢痕疙瘩的发生有关。

人脑胶质瘤细胞株中RIZ1基因启动子甲基化状态的研究

目的:检测4种人脑成胶质细胞瘤细胞株中成视网膜细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1(retinoblastoma protein-interacting zinc finger gene1,RIZ1)基因启动子区的甲基化状态,进一步认识RIZ1在胶质瘤发病机制中的作用。方法:应用甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR,MSP)检测4种人脑成胶质细胞瘤细胞株U87、U251、A172和T98中RIZ1基因启动子区的甲基化水平,其中U87细胞发生甲基化,被选为后续实验对象。RT-PCR检测U87细胞经5-Aza-CdR处理前后RIZ1 mRNA表达量的变化,MTT检测5-Aza-CdR对U87细胞生长增殖的影响。结果:4种人脑成胶质细胞瘤细胞株中U87和U251细胞中检测到RIZ1基因启动子区域发生甲基化;U87细胞经5-Aza-CdR处理后其RIZ1 mRNA的表达量上调;MTT法检测显示5-Aza-CdR能抑制U87的生长增殖,且与5-Aza-CdR的浓度和作用时间呈负相关。结论:RIZ1基因启动子高甲基化是人脑成胶质细胞瘤细胞株中RIZ1基因表达下调的重要机制。

NB4细胞诱导分化过程中WT1、RbAp46及IGFBP-rP1基因表达水平的变化

目的:探讨WT1、RbAp46及IGFBP-rP1基因与NB4细胞诱导分化的关系。方法:利用实时定量RT-PCR方法检测NB4细胞诱导分化不同时间点WT1、RbAp46和IGFBP-rP1基因的表达水平,并用流式细胞仪检测NB4细胞表面抗原CD11b的变化。结果:随着NB4细胞向粒系终末分化,WT1、IGFBP-rP1基因的表达水平迅速下降。0.5μmol/L全反式维甲酸(all transretinoic acid,ATRA)作用0、4、8、12、24与48 h后WT1N分别为1.91、1.21、0.60、0.44、0.18与0.04;IGFBP-rP1N分别为1.10、0.80、0.54、0.28、0.17与0.15。RbAp46基因的平均表达水平则下降缓慢,分别为2.65、1.86、1.40、1.27、1.48与0.49。NB4细胞处理组WT1基因的改变分别与RbAp46和IGFBP-rP1基因的变化存在相关性(r=0.829,P=0.021;r=1,P<0.001),三者均与CD11b的变化呈负相关(r=-1.0,P<0.001;r=-0.829,P=0.021与r=-1.0,P<0.001)。结论:WT1、RbAp46和IGFBP-rP1基因的高表达可能参与了阻滞NB4细胞分化的过程。

人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区甲基化状态的研究

目的:探讨6种人食管鳞癌细胞株KYSE150,KYSE510,TE13,EC9706,CaEs17和EC109中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;观察特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对存在甲基化的细胞株RIZ1基因的转录调控作用及其对该细胞生长增殖的影响。方法:甲基化特异PCR(MSP)法检测6种人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;实时定量PCR法检测5-Aza-CdR处理前后RIZ1基因启动子区CpG岛高度甲基化的人食管鳞癌细胞株TE13中RIZ1 mRNA表达量的变化;MTT法检测5-Aza-CdR对TE13细胞生长增殖的影响。结果:(1)6种人食管鳞癌细胞株中TE13,CaEs17,EC109三株细胞RIZ1基因启动子区存在甲基化;(2)5-Aza-CdR处理细胞株TE13后,RIZ1 mRNA表达量上调;(3)5-Aza-CdR能抑制TE13的生长增殖,并随时间的延长和浓度的增加抑制作用变明显。结论:启动子区CpG岛高度甲基化是人食管鳞癌细胞株TE13 RIZ1基因表达沉默的重要原因;5-Aza-CdR能使TE13 RIZ1 mRNA表达上调;并能抑制TE13细胞的生长增殖,并呈时间和浓度依赖性。

正性调节区锌指蛋白8的研究进展

正性调节区锌指蛋白8（PR domain zinc finger protein 8，PRDM8）是 PRDM家族中非常具有代表性的蛋白，它拥有典型的 PR结构域和锌指结构，是神经系统发育和睾丸发育中重要的调控因子。PRDM 名称来源于N端保守的结构域-PR结构域（PR domain）。PR结构域最初是在正性调节区I-结合因子1（positive regulatory domain I-binding factor 1,PRDI-BF1）和视网膜母细胞瘤蛋白质结合的锌指蛋白I（retinoblastoma protein-interacting zinc finger protein 1,RIZI）两个蛋白（现在常分别称为PRDM1、PRDM2）中发现，从而被命名为PR（PRDI-BF1-RIZ1 homologous）domain。

骨髓增生异常综合征RIZ1基因启动子甲基化状态研究

视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因（RIZ）足功能性筛选可与视网膜母细胞瘤（Rb）结合的蛋白质时分离而。不同转录起始位点，可表达RIZI及其替代蛋白RIZ2，RIZI包含重要功能区域PR结构域，

PRDM2和c-Myc在垂体生长激素腺瘤发生发展中作用的实验研究

目的探讨视网膜母细胞瘤相互作用锌指蛋白1(PRDM2)和c-Myc在垂体生长激素腺瘤发生、发展中的作用。方法垂体腺瘤标本来自2013年7月至2016年12月首都医科大学附属北京天坛医院神经外科行手术治疗的70例垂体生长激素腺瘤患者,3例正常垂体组织标本来自遗体自愿捐献者。通过免疫组织化学染色方法检测肿瘤和正常垂体组织中PRDM2和c-Myc蛋白的水平。探讨肿瘤组织中PRDM2与c-Myc蛋白水平之间的关系,以及PRDM2和c-Myc蛋白与肿瘤侵袭能力、肿瘤体积的关系。体外培养大鼠垂体腺瘤GH3细胞株,设立对照组(空白细胞)、空载体组(转染空载体)和PRDM2组(转染PRDM2质粒)。通过细胞增殖实验检测PRDM2对细胞活力的影响;采用流式细胞术观察PRDM2对细胞凋亡的影响;行Transwell小室实验观察PRDM2对细胞侵袭能力的影响;采用蛋白质免疫印迹实验检测PRDM2对GH3细胞c-Myc表达水平的影响。结果根据70例肿瘤标本的免疫组织化学染色评分中位数(PRDM2:40分,c-Myc:170分)分组,PRDM2低评分组(<40分)较PRDM2高评分组(≥40分)有更高的侵袭机会(19/35对比9/35,P=0.015)和更大的肿瘤体积[(17.8±4.5)cm3对比(5.2±0.9)cm3,P<0.01]。c-Myc高评分组(≥170分)较c-Myc低评分组(<170分)有更高的侵袭机会(20/35对比8/35,P=0.003)和更大的肿瘤体积[(15.5±3.5)cm3对比(6.6±2.0)cm3,P=0.027]。70例肿瘤标本中的PRDM2与c-Myc水平呈负相关(r=-0.407,P=0.004)。GH3细胞转染24、48、72 h后,PRDM2组的细胞活力分别为对照组的(82.2±6.3)%、(68.5±5.2)%、(54.7±3.6)%(均P<0.05);而空载体组与对照组的差异均无统计学意义(均P>0.05)。流式细胞术检测结果显示,转染24 h后,PRDM2组膜联蛋白V(AnnexinⅤ)染色阳性细胞和碘化丙啶(PI)染色阳性细胞所占的比率分别为(14.66±3.72)%和(6.21±2.17)%,均高于对照组[分别为(3.35±1.03)%和(1.34±0.48)%,均P<0.05];而空载体组AnnexinⅤ阳性细胞和PI阳性细胞所占比率与对照组间的差异均无统计学意义(均P>0.05)。Transwell小室实验结果显示,PRDM2组透膜细胞数量为(145±37)个,低于对照组[(415±76)个](P<0.01)。蛋白质免疫印迹实验显示,转染PRDM2质粒72 h后,PRDM2组的c-Myc水平为对照组的(0.32±0.12)倍(P<0.01)。结论PRDM2和c-Myc均参与垂体生长激素腺瘤的发生、发展;在GH3细胞中PRDM2可抑制c-Myc的表达,具有抑制细胞增殖和侵袭的作用。