视网膜母细胞瘤患儿血清LncRNA-NEAT1水平表达及对瘤细胞生物学功能的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核富集转录体1(nuclera-enriched autosomaltranscript,NEAT1)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)患儿血清中表达,以及下调Rb细胞Y79中NEAT1对细胞生物学功能的影响。方法以2015年3月~2021年3月鄂东医疗集团黄石市中心医院诊疗的83例Rb患儿为研究对象,同期,在儿童保健中心选取健康儿童50例(对照组),实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血清中NEAT1表达,分析Rb患儿和对照组血清NEAT1表达差异,以及不同临床指标Rb患者血清中NEAT1表达差异。培养Y79细胞并分为si-NEAT1组(转染NEAT1的干扰序列)、si-NC组(转染对照序列)和Ctl组(仅加入转染试剂),分别使用qRT-PCR,MTT,流式细胞术和Transwell检测NEAT1表达、细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况。结果Rb患儿血清中NEAT1表达量(1.43±0.28)高于对照组(1.01±0.21),差异具有统计学意义(t=9.116,P<0.001);国际视网膜母细胞瘤分期(Intraocular International Retinoblastoma classificaton,IIRC)CDE期、低分化、视神经浸润和淋巴结转移的Rb患儿血清中NEAT1表达量明显高于AB期、中高分化、未发生视神经浸润和淋巴结转移的Rb患儿,差异具有统计学意义(t=2.190~3.693,均P<0.05);血清中NEAT1表达诊断Rb曲线下面积为0.882(95%CI:0.826~0.937),当NEAT1表达量取1.20时,灵敏度和特异度分别为80.00%和79.52%;相比于si-NC组(1.03±0.09)和Ctl组(1.02±0.15),si-NEAT1组细胞中NEAT1表达(0.35±0.06)明显降低,差异具有统计学意义(t=14.829,9.994,均P<0.001);si-NEAT1组24,48,72和96 h时吸光度(A值)明显低于si-NC组和Ctl组(tsi-NC=2.796~4.362,tCtl=2.641~5.555,均P<0.05),而细胞凋亡率相比于si-NC组和Ctl组明显升高,差异具有统计学意义(t=4.999,3.915,均P<0.05);与si-NC组和Ctl组比较,si-NEAT1组迁移细胞数(116.50±9.35 vs 132.00±7.32,134.00±7.95)和侵袭细胞数(96.33±8.94 vs 117.67±12.39,119.17±10.05)均降低,差异具有统计学意义(tsi-NC=3.196,3.421,tCtl=3.492,4.159,均P<0.05)。结论Rb患儿血清中NEAT1表达量升高,对Rb患儿具有一定的诊断价值,沉默Y79细胞中NEAT1表达可减少Rb细胞增殖、加速细胞凋亡,同时抑制细胞迁移和侵袭。

lncRNA HIF1A-AS1对长春新碱耐药视网膜母细胞瘤细胞化疗敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA-HIF1A-AS1(lncRNA HIF1A-AS1)调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达对长春新碱(VCR)耐药视网膜母细胞瘤(RB)细胞化疗敏感性的影响。方法:建立人RB VCR耐药细胞株SO-RB50/VCR,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测SO-RB50与SO-RB50/VCR细胞lncRNA HIF1A-AS1表达;在SO-RB50/VCR细胞中抑制lncRNA HIF1A-AS1表达或同时过表达HIF-1α,检测SO-RB50/VCR细胞对VCR的半数抑制浓度(IC_(50))及细胞增殖、凋亡情况;Western blot检测HIF-1α、多药耐药相关蛋白(MRP)、P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达。结果:与SO-RB50细胞相比,SO-RB50/VCR细胞中lncRNA HIF1A-AS1与HIF-1α蛋白表达水平升高(P<0.05);在SO-RB50/VCR细胞中抑制lncRNA HIF1A-AS1表达后,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),细胞吸光度(OD_(450))值显著降低,VCR对细胞的IC_(50)值及HIF-1α、MRP、P-gp蛋白表达水平显著降低(P<0.05);过表达HIF-1α可减弱下调lncRNA HIF1A-AS1表达对SO-RB50/VCR细胞耐药性的抑制作用。结论:lncRNA HIF1A-AS1在SO-RB50/VCR细胞中高表达,抑制lncRNA HIF1A-AS1表达可通过下调HIF-1α表达,降低SO-RB50/VCR细胞对VCR的耐药性。

视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1调控肥胖和肿瘤信号通路研究综述

视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1(retinoblastoma-interacting zinc finger protein 1,RIZ1)基因,又称PRDM2(positive regulatory domain 2)基因,是PRDM基因家族一员,其蛋白序列包含1个PR结构域、1个核激素受体结合基序、8个锌指结构域和1个视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)相互作用基序。RIZ1主要定位于细胞核内,在核内发挥转录抑制因子、基因调控、蛋白质-蛋白质相互作用等功能。RIZ1是代谢通路的重要参与者,其通过调控代谢相关基因影响基础代谢,抑制肥胖的形成;RIZ1功能突变或含量不足与多种肿瘤发生发展相关,其通过激活下游致癌基因或调控代谢参与肿瘤进程。RIZ1通过v-akt鼠科胸腺瘤病毒癌基因同源物Ⅲ(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog 3,AKT3)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1),以及作为协同激活剂等方式分别调控AKT/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、IGF-1、雌激素这3条肿瘤和肥胖相关分子信号通路。3条分子通路功能有差异且其下游分子存在交叉,提示RIZ1在不同年龄、性别和器官中的作用可能不同。详细研究RIZ1与RIZ2在代谢进程中的调控作用有助于全面了解RIZ1参与肥胖和肿瘤形成的机制。未来基于RIZ1靶点进行诊断研究或功能恢复可能对代谢性疾病和肿瘤的诊断和治疗有重要意义。

LncRNA FAM83A-AS1通过miR-150/HMGA2轴对视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)序列相似家族83成员A-反义核糖核酸1(FAM83AAS1)在视网膜母细胞瘤(RB)细胞中的作用及其潜在的分子机制。方法体外培养RB细胞,将Vector、pcDNA-FAM83A-AS1、NC-siRNA、FAM83A-AS1-siRNA分别转染至细胞中(依次为pcDNA-FAm83A-AS1组、NC-siRNA组、FAm83A-AS1-siRNA组),检测RB细胞中FAM83A-AS1的表达、RB细胞增殖能力、凋亡率。生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验预测和验证FAM83A-AS1与miR-150以及miR-150与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的靶向关系。RT-qPCR检测RB细胞中miR-150、HMGA2 mRNA的表达;Western blot检测RB细胞中HMGA2蛋白的表达;MTT实验和流式细胞术检测转染后RB细胞增殖和凋亡能力。结果pcDNA-FAM83A-AS1组细胞中FAM83A-AS1的表达显著高于Vector组,低于NC-siRNA组(P<0.05)。pcDNA-FAM83A-AS1组较Vector组的细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。FAM83AAS1-siRNA组较NC-siRNA组的细胞增殖能力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。miR-150 mimic可显著抑制RB细胞增殖能力,促进细胞凋亡。而pcDNA-HMGA2可显著逆转miR-150 mimic对RB细胞增殖和凋亡的作用。结论敲低lncRNA FAM83A-AS1通过调控miR-150/HMGA2轴抑制RB细胞增殖,促进细胞凋亡。

过表达miR-515-5p的视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力变化及其机制

目的探讨过表达miR-515-5p对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响及其机制。方法利用StarBase数据库进行生物信息学分析并预测miR-515-5p的靶基因为CBX4,并经双荧光素酶报告基因实验验证。选择视网膜母细胞瘤细胞系SO-RB50、Y79、HXO-RB-44细胞中miR-515-5p表达降低最明显的SO-RB50细胞进行实验,分为miR-515-5p NC组、miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组,分别转染miR-515-5p阴性对照、miR-515-5p mimics、miR-515-5p mimics+CBX4过表达载体、miR-515-5p mimics+CBX4空载体。采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-515-5p及CBX4 mRNA表达,Western blotting法检测CBX4蛋白表达,CCK-8法检测转染12、24、48、72 h的细胞增殖能力(OD值),TUNEL法检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组miR-515-5p相对表达量均高于miR-515-5p NC组(P均<0.05)。miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组、miR-515-5p mimics+CBX4组CBX4 mRNA相对表达量及培养48、72 h的OD值均低于miR-515-5p NC组,且miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组降低更明显(P均<0.05)。培养12 h,各组细胞OD值比较P>0.05。培养24 h,miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组OD值均低于miR-515-5p NC组(P均<0.05)。与miR-515-5p NC组、miR-515-5p mimics+CBX4组比较,miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组细胞凋亡率均升高,CBX4蛋白相对表达量及侵袭细胞数均降低(P均<0.05)。结论过表达miR-515-5p能够抑制视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50的增殖、侵袭能力并促进其凋亡,其机制可能与抑制CBX4表达有关。

LncRNA LUCAT1靶向miR-502-5p对人视网膜母细胞瘤细胞生物学行为的影响

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)肺癌相关转录产物1(LUCAT1)靶向微小RNA(miR)-502-5p对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响。方法收集2019年5月至2021年1月在河南省立眼科医院确诊并行眼球摘除术的27例RB患者的RB组织样本,正常视网膜组织标本(12例眼球破裂伤、7例眼球萎缩、8例眼球穿通伤合并有色素膜嵌顿)取自同期在河南省立眼科医院行眼球摘除术的27例患者。采用实时荧光定量PCR检测LncRNA LUCAT1和miR-502-5p在RB组织、细胞系(Y-79、WERI-Rb-1、HXO-RB44)及人视网膜上皮细胞(ARPE-19)中的表达。将RB细胞Y-79分为对照组、小干扰RNA(si)-LncRNA LUCAT1组、si-对照(con)组、pcDNA组、pcDNA-LncRNA LUCAT1组、miR-con组、miR-502-5p组、si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组和si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组,分别转染相应试剂。采用Western blot法检测MMP2和MMP9蛋白表达;采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增生活力;采用克隆形成实验检测细胞增生能力;采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验和实时荧光定量PCR验证LncRNA LUCAT1对miR-502-5p的靶向调控作用。结果RB组织中LncRNA LUCAT1表达量为2.73±0.34,明显高于正常视网膜组织的1.00±0.15;miR-502-5p表达量为0.42±0.06,明显低于正常视网膜组织的1.00±0.13,差异均有统计学意义(t=24.190、21.049,均P<0.001)。人RB细胞系Y-79、WERI-Rb-1和HXO-RB44中LncRNA LUCAT1表达水平明显高于ARPE-19细胞,miR-502-5p表达水平明显低于ARPE-19细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05)。si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量,MMP2、MMP9蛋白相对表达量,吸光度(A)值,细胞增生、迁移、侵袭数量较对照组均明显减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-502-5p组miR-502-5p表达量高于miR-con组,MMP2、MMP9蛋白相对表达量,细胞活力A值,细胞增生、迁移、侵袭数量少于miR-con组,差异均有统计学意义(t=20.274、14.884、14.181、12.692、17.749、20.889、21.913,均P<0.001)。si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组miR-502-5p表达量低于si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组,MMP2、MMP9蛋白相对表达量,细胞活力A值,细胞增生、迁移、侵袭数量高于si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组,差异均有统计学意义(t=14.097、15.839、15.757、11.860、16.235、16.565、16.487,均P<0.001)。与LncRNA LUCAT1-野生型共转染时,miR-502-5p组相对荧光素酶活性值低于miR-con组,差异有统计学意义(t=16.379,P<0.001)。pcDNA-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量高于pcDNA组,miR-502-5p表达量低于pcDNA组,si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量低于si-con组,miR-502-5p表达量高于si-con组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制LncRNA LUCAT1表达通过靶向上调miR-502-5p可减弱人RB细胞的增生、迁移和侵袭能力。

骨髓增生异常综合征患者外周血单个核细胞中视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1的表达

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1(RIZ1)的表达及其临床意义。方法选取2012年7月至2015年7月于新乡医学院第一附属医院收治的MDS患者86例为研究对象(MDS组),并选取同期体检健康者90例作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测PBMC中RIZ1蛋白及其mRNA表达水平,并分析RIZ1表达与MDS患者临床病理特征的关系。结果对照组和MDS组受试者PBMC中RIZ1 mRNA表达水平分别为1.73±0.41和0.47±0.18,MDS组患者PBMC中RIZ1 mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05)。对照组和MDS组受试者PBMC中RIZ1蛋白表达水平分别为1.32±0.36和0.35±0.22,MDS组患者PBMC中RIZ1蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。RIZ1蛋白表达与MDS患者的年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白水平及血小板计数无关(P>0.05),而与骨髓原始细胞比例、世界卫生组织(WHO)分型及染色体核型有关(P<0.05)。结论 RIZ1在MDS患者PBMC中呈低水平表达,并与患者的骨髓原始细胞比例、WHO分型及染色体核型显著相关,这为MDS的早期诊断和靶向治疗提供了新的思路。

膜型基质金属蛋白酶-1表达水平与胶质母细胞瘤患者放射治疗抵抗的相关性

目的探讨膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)表达水平与胶质母细胞瘤(GBM)患者放射治疗抵抗的相关性。方法选取2021年1月至2022年1月新疆维吾尔自治区人民医院收治的112例GBM患者为研究对象,根据放射治疗反应性不同将研究对象分为放射治疗敏感组(放射治疗敏感,75例)和放射治疗抵抗组(放射治疗抵抗,37例)。比较分析两组患者的临床特征。分析GBM患者放射治疗抵抗的独立影响因素。结果两组患者的年龄、性别、体重指数、吸烟史比例、发病部位、Karnofsky功能状态评分比较差异均无统计学意义(P>0.05),放射治疗抵抗组患者的肿瘤最大径、非全部切除比例、MT1-MMP表达水平均大于或高于放射治疗敏感组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,肿瘤最大径、MT1-MMP表达水平、非全部切除均为GBM放射治疗抵抗的独立危险因素(P<0.05)。结论MT1-MMP表达水平升高为GBM患者放射治疗抵抗的独立危险因素,可为GBM的诊断与治疗提供新思路。

细胞周期素D1、视网膜母细胞瘤样蛋白2及微小染色体维持蛋白7在肝细胞癌中的表达及对预后的意义

目的:研究细胞周期素D1(cyclin D1)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(RBL2/p130)及微小染色体维持蛋白7(MCM7)在肝细胞癌(以下简称肝癌)中的表达及对预后诊断的意义。方法:用免疫组织化学法检测44例肝癌组织、26例癌旁硬化肝组织及18例正常肝组织中cyclin D1、RBL2/p130及MCM7的表达情况,并分析其与肝癌患者临床参数间的关系。结果:肝癌组织中cyclin D1和MCM7的阳性表达率分别是68.2%和72.7%,显著高于正常肝组织及癌旁硬化肝组织(P<0.01);RBL2/p130的阳性表达率为34.1%,显著低于正常肝组织及癌旁硬化肝组织(P<0.01),MCM7与cyclin D1的表达呈正相关(r=0.349,P<0.05),与RBL2/p130的表达呈负相关(r=-0.421,P<0.01);cyclin D1与RBL2/p130的表达呈负相关(r=-0.435,P<0.01)。Cyclin D1及MCM7的表达与肿瘤包膜的完整性、肿瘤分化程度及肝癌临床分期有关,RBL2/p130的表达与有无门脉癌栓、肿瘤分化程度及肝癌临床分期有关(P<0.05)。MCM7还与肿瘤大小及甲胎蛋白(AFP)值的大小有关。多因素分析显示肿瘤大小、MCM7及cyclin D1与肝癌预后相关(P<0.05)。MCM7及cyclin D1阳性表达的患者、RBL2/p130阴性表达的患者预后差(P<0.05)。结论:Cyclin D1、RBL2/p130和MCM7的异常表达在肝癌形成过程中发挥了重要作用。监测其在肝癌中的表达情况将有助于判断肝癌患者的预后。

circROBO1对视网膜母细胞瘤细胞增殖的影响及其机制

目的探讨circROBO1对视网膜母细胞瘤细胞增殖的影响及其机制。方法体外传代培养视网膜母细胞瘤细胞Y79。取传2代、对数生长期、生长状态良好的Y79细胞,随机分为si-circROBO1组、si-control组,分别转染si-circROBO1、si-control。转染6 h,继续培养24 h,收集细胞,采用RT-qPCR法检测circROBO1表达,采用CCK-8法检测细胞活力,采用细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力。通过CircInteractome在线网站预测circROBO1与miR-217的结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫沉淀实验验证两者的靶向调控关系。结果si-circROBO1组circROBO1相对表达量显著低于si-control组(P<0.05)。si-circROBO1组细胞活力、克隆形成率均显著低于si-control组(P均<0.05)。经CircInteractome在线网站预测,circROBO1序列中可能存在两个与miR-217结合的位点。经双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫沉淀实验验证,共转染野生型circROBO1和miR-217可降低Y79细胞荧光素酶活性,并且miR-217主要富集在野生型circROBO1 MS2bs载体转染的Y79细胞中。结论circROBO1可能通过靶向调控miR-217促进视网膜母细胞瘤细胞增殖。

抑制lncRNA HIF1A-AS1表达对长春新碱耐药视网膜母细胞瘤细胞株裸鼠移植瘤生长及转移的影响

目的探讨抑制长链非编码RNA(lncRNA)缺氧诱导因子1α-反义RNA1(HIF1A-AS1)表达对长春新碱(VCR)耐药视网膜母细胞瘤(Rb)细胞株裸鼠的生存期、移植瘤生长和转移的影响。方法体外培养人Rb细胞株HXO-RB44、Y79、SO-RB50,通过逐步增加VCR浓度的方法刺激诱导建立其相应的VCR耐药Rb细胞HXO-RB44/VCR、Y79/VCR、SO-RB50/VCR,以实时荧光定量PCR(qPCR)实验检测上述细胞中lncRNA HIF1A-AS1、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达。于裸鼠背部皮下注射Y79/VCR细胞悬液建立VCR耐药Rb细胞株裸鼠模型,随机分为模型组、VCR组、VCR+lncRNA HIF1A-AS1敲低组、VCR+lncRNA HIF1A-AS1空载组,以VCR和相应质粒分组干预处理后,检测各组裸鼠移植瘤的肿瘤体积、抑瘤率、转移情况及存活率;qPCR实验检测各组裸鼠移植瘤lncRNA HIF1A-AS1及HIF-1α、多药耐药1(MDR1)、乳腺癌相关耐药蛋白(BCRP/ABCG2)mRNA表达;免疫印迹法检测VCR耐药Rb细胞株裸鼠移植瘤HIF-1α、P-gp、ABCG2蛋白表达。结果与人Rb正常细胞HXO-RB44、Y79和SO-RB50相比,lncRNA HIF1A-AS1、HIF-1α在其相应VCR耐药细胞HXO-RB44/VCR、Y79/VCR、SO-RB50/VCR中的表达均显著升高(P<005)。与模型组比较,VCR+lncRNA HIF1A-AS1敲低组VCR耐药Rb细胞株裸鼠移植瘤肿瘤体积、转移器官数、转移灶总数、lncRNA HIF1A-AS1及HIF-1α、MDR1、ABCG2 mRNA表达、HIF-1α及P-gp、ABCG2蛋白表达均显著降低(P<005),裸鼠给药后30 d存活率、抑瘤率显著升高(P<005);VCR组、VCR+lncRNA HIF1A-AS1空载组VCR耐药Rb细胞株裸鼠各指标无显著变化(P>005)。与VCR组比较,VCR+lncRNA HIF1A-AS1敲低组VCR耐药Rb细胞株裸鼠移植瘤肿瘤体积、转移器官数、转移灶总数、lncRNA HIF1A-AS1及HIF-1α、MDR1、ABCG2 mRNA表达、HIF-1α及P-gp、ABCG2蛋白表达均显著降低(P<005),裸鼠给药后30 d存活率、抑瘤率显著升高(P<005);VCR+lncRNA HIF1A-AS1空载组VCR耐药Rb细胞株裸鼠各指标无显著变化(P>005)。结论下调lncRNA HIF1A-AS1表达可降低HIF-1α表达,增强VCR耐药Rb细胞株裸鼠移植瘤对VCR的敏感性,抑制移植瘤的生长和转移,提高裸鼠存活率。

基质金属蛋白酶-14和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase-14,MMP-14)和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extra-cellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中的表达及其与临床病程的关系。方法用免疫组织化学SP法分别检测39例Rb中MMP-14及EMMPRIN的表达;用LEICA IM 50型全自动医学图像分析系统测量其平均灰度值,比较不同临床和病理阶段Rb中表达MMP-14和EMMPRIN的差异及二者阳性表达之间的关系。结果39例Rb中MMP-14阳性表达34例,占87.18%;EMMPRIN阳性表达33例,占84.62%;青光眼期Rb中MMP-14和EMMPRIN的表达明显高于眼内期(P<0.01及P<0.05),眼外期二者表达明显高于青光眼期(P<0.01及P<0.05);视神经浸润组Rb中MMP-14和EMMPRIN的表达明显高于无视神经浸润组(P<0.01及P<0.05);Rb中MMP-14和EMMPRIN的阳性表达水平呈密切相关(P<0.01)。结论MMP-14及EMMPRIN的表达水平可能与Rb的浸润转移有关,二者共同促进Rb的浸润转移。

RNA干扰抑制高迁移率族蛋白-1表达对人视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究siRNA抑制高迁移率族蛋白-1(high mobility group protein box-1,HMGB1)表达对人视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:RT-PCR和Western blot检测HMGB1在人视网膜母细胞瘤中的表达。体外化学合成靶向HMGB1 siRNA,RT-PCR和Western blot检测其抑制效率。MTT法检测HMGB1沉默后Y79细胞的增殖情况。Caspase-3活性检测试剂盒检测HMGB1沉默后Y79细胞的凋亡情况。采用流式细胞仪来分析细胞周期的分布以及细胞凋亡率的变化。结果:HMGB1 mRNA和蛋白在人视网膜母细胞瘤细胞中高表达,siRNA抑制HMGB1表达后,Y79细胞增殖抑制,促进凋亡。结论:抑制HMGB1的表达可以降低人视网膜母细胞瘤细胞的增殖,并促进其凋亡,为人视网膜母细胞瘤的生物学治疗提供新的思路。

基质金属蛋白酶-1、血管内皮生长因子在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的:检测基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)-1及血管内皮生长因子(Vascularendothelial growth factor,VECF)在视网膜母细胞瘤组织中表达情况,分析其与临床分级之间关系的临床意义。方法:采用免疫组化方法检测31例视网膜母细胞瘤组织MMP-1、VEGF表达,对两者的相关性进行统计学分析。结果:MMP-1、VEGF蛋白在视网膜母细胞瘤组织中呈高表达,MMP-1主要表达于肿瘤细胞胞浆或胞膜中,VEGF主要表达于肿瘤细胞胞浆中,MMP-1、VEGF表达和临床分期密切相关(P<0.05),且其表达在不同临床分期间差异有统计学意义(P<0.05),MMP-1、VEGF两者表达存在正相关(r=0.787,P<0.05)。结论:MMP-1、VEGF蛋白在视网膜母细胞瘤组织中呈高表达,两者表达与肿瘤临床分级密切相关,可能均参与视网膜母细胞瘤新生血管的生成,在肿瘤的浸润转移等中起重要作用。

基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1和血管内皮生长因子在视网膜母细胞瘤组织中的表达

目的探讨视网膜母细胞瘤(RB)组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其与新生血管形成、视神经浸润和RB分化程度的关系。方法收集2010年1月至2014年3月在湖北医药学院附属襄阳医院接受治疗的RB患者的RB组织标本和癌旁正常组织标本各30例,采用免疫组织化学法测定VEGF、TIMP-1和MMP-9的表达。结果 RB组织中MMP-9和VEGF的阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.01);但RB组织与癌旁正常组织中TIMP-1的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。未分化型RB组织中MMP-9和VEGF的阳性表达率显著高于分化型RB(P<0.05,P<0.01);未分化型RB组织与分化型RB组织中TIMP-1的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。有视神经浸润的RB组织中MMP-9和VEGF的阳性表达率显著高于无视神经浸润的RB(P<0.01);有视神经浸润与无视神经浸润的RB组织中TIMP-1的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 VEGF和MMP-9可能与RB的发生发展、新生血管形成、视神经浸润及RB分化程度有关。

视网膜母细胞瘤miRNA-215和Rb1蛋白表达及意义

目的 探讨视网膜母细胞瘤组织microRNA-215(miRNA-215)、视网膜母细胞瘤蛋白(Rb1蛋白)表达及其与临床病理学特征的相关性。方法 选取视网膜母细胞瘤病人65例(73眼)手术切除的癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-PCR法检测两者miRNA-215表达、Westernblot方法检测两者Rb1蛋白水平,并分析miRNA-215与Rb1蛋白相关性及二者与病人临床病理特征的相关性及预后的关系;进行细胞转染实验,采用噻唑蓝比色法(MTT)、Caspase-3活性检测、流式细胞术分析miRNA-215类似物及miRNA-215抑制物对人视网膜母细胞瘤细胞(Y79细胞)活力、增殖及凋亡的影响。结果 视网膜母细胞瘤肿瘤组织中miRNA-215的表达水平显著高于癌旁组织,Rb1蛋白表达水平显著低于癌旁组织,差异有显著性(t=-14.14、92.80,P<0.01)。分化型肿瘤组织中miRNA-215表达低于未分化型,Rb1蛋白表达高于未分化型;伴随神经浸润和淋巴结转移病人肿瘤组织中miRNA-215表达高于未出现神经浸润和淋巴结转移病人,Rb1蛋白表达低于未出现神经浸润和淋巴结转移病人(t=-55.30~344.30,P<0.05)。细胞转染结果显示,miRNA-215类似物能显著升高Y79细胞中miRNA-215的表达水平并导致细胞活力升高、增殖能力增强及凋亡细胞百分比降低,同时显著降低细胞内Rb1蛋白表达水平;miRNA-215抑制物则显著降低Y79细胞中miRNA-215的表达水平并导致细胞活力降低、增殖能力下降、胞内Caspase-3活性增加及凋亡细胞百分比增加,同时升高细胞内Rb1蛋白表达水平,差异有显著性(F=148.5~3938.0,P<0.01)。结论 视网膜母细胞瘤组织中miRNA-215和Rb1蛋白表达与临床病理学特征相关,可作为视网膜母细胞瘤预后的监测指标。

乳腺癌中视网膜母细胞瘤基因蛋白的表达及其与p16和c-erbB-2表达的关系

目的 探讨视网膜母细胞瘤基因蛋白 (p Rb)在乳腺癌中的作用及其与 c- erb B- 2和 p16的关系。方法 应用免疫组织化学 S- P法检测 5 9例乳腺癌组织中 p Rb、p16和 c- erb B- 2蛋白的表达状况 ,并观察其与临床病理特征的关系。结果 p Rb免疫染色主要定位于细胞核 ,其失表达率和低表达率分别为 17%和 2 2 %。 p Rb表达与乳腺癌的组织学类型、分化程度、瘤体大小、淋巴结转移和患者年龄等临床病理特征及 c- erb B- 2表达无相关 (p >0 .0 5 ) ,但与 p16表达相关 (p<0 .0 5 )。结论 乳腺癌中存在广泛的 Rb基因表达的下调或失表达 ,它与 p16的失表达共同参与了乳腺癌的发生。其调控细胞增殖的途径独立于 c- erb B- 2。

视网膜母细胞瘤组织SUZ12及MMP-9蛋白的表达及意义研究

目的探讨Zeste基因抑制子12（SUZ12）及基质金属蛋白-9（MMP-9）在视网膜母细胞瘤（RB）中的表达及意义。方法 56例RB石蜡包埋标本作为研究对象,其中眼内生长期10例,眼内压增高期28例,眼外扩展期18例;侵袭程度（N）由N0~N3分别为22、16、12、6例;细胞分化程度（D）由D0~D3分别为10、16、18、12例。免疫组织化学方法检测SUZ12、MMP-9蛋白在不同临床分期、侵袭程度及分化程度的RB标本中的表达并进行相关性分析。结果 SUZ12及MMP-9蛋白在RB组织中的表达较癌旁组织明显增高（P〈0.01）。SUZ12及MMP-9的表达与RB的临床分期、侵袭程度（N0~N3）及细胞分化程度（D0~D3）相关。眼内压增高期SUZ12及MMP-9蛋白表达均显著高于眼内生长期（t=10.299,16.253;P〈0.01,P〈0.01）;眼外生长期显著高于眼内生长期（t=20.819,36.417;P〈0.01,P〈0.01）及眼压增高期（t=10.348,15.061;P〈0.01,P〈0.05）。SUZ12及MMP-9由N0~N3呈逐渐升高趋势,由D0~D3呈逐渐下降趋势,且SUZ12与MMP-9在RB中的表达相关性显著（r=0.840）。结论 SUZ12及MMP-9在RB组织中呈高表达,并且可预测RB的恶性程度。

喉鳞状细胞癌患者视网膜母细胞瘤蛋白和细胞周期调节蛋白D1异常表达

目的:探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)患者视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)和细胞周期调节蛋白D1(Cyclin D1)的异常表达及其相关性。方法:选择36例喉部疾病手术患者,包括LSCC(LSCC组)、声带息肉(息肉组)和癌前病变(癌前组)各12例,各组均于手术后取病变组织,采用Western-blotting检测pRb和Cyclin D1蛋白表达水平,统计学分析各组两指标差异及相关性。结果:与息肉组比较,癌前组pRb表达水平降低(P<0.01),Cyclin D1表达水平升高(P<0.01);与癌前组比较,LSCC组pRb水平更低(P<0.01),Cyclin D1水平更高(P<0.01)。三组pRb与Cyclin D1蛋白水平均呈显著负相关(r分别为-0.94、-0.83和-0.92,P均<0.01)。结论:LSCC的发生和发展与pRb表达降低和Cyclin D1表达增加有关。

核糖体蛋白L41对人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究核糖体蛋白L41(ribosomal protein L41,RPL41)对人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法将人视网膜母细胞瘤Y79细胞接种于含体积分数10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中传代培养。根据药物处理浓度分为对照组(RPL41浓度为0μmol·L^(-1))、40μmol·L^(-1)RPL41处理组、80μmol·L^(-1)RPL41处理组、120μmol·L^(-1)RPL41处理组。Cell Titer-Glo荧光细胞活性检测系统检测各组细胞活性;流式细胞仪检测100μmol·L^(-1)RPL41处理后细胞凋亡率,Hoechst染色观察细胞凋亡形态;Western blot检测各组细胞中活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)的含量。结果与对照组相比,40μmol·L^(-1)RPL41处理组细胞活性为(97.9±1.5)%,无明显变化,差异无统计学意义(P=0.055);80μmol·L^(-1)RPL41处理组细胞活性为(87.6±1.8)%,120μmol·L^(-1)RPL41处理组为(63.9±2.0)%,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。RPL41对Y79细胞增殖有明显的抑制作用。100μmol·L^(-1)RPL41能够促进Y79细胞凋亡,凋亡率为(17.33±2.47)%。100μmol·L^(-1)RPL41处理组凋亡细胞与正常细胞相比,细胞颜色较亮,细胞体积较小。40μmol·L^(-1)RPL41处理组ATF4蛋白含量为0.76±0.04,80μmol·L^(-1)RPL41处理组为0.29±0.04,120μmol·L^(-1)RPL41处理组为0.29±0.05,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。RPL41能够降低Y79细胞中ATF4的蛋白含量。结论RPL41能抑制人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与ATF4有关。