正常眼黄斑区视网膜神经上皮层厚度的活体测量

目的应用光学相干断层成像（ＯＣＴ）技术对正常眼黄斑区视网膜神经上皮层厚度进行测定。方法对３０只经眼科检查确认的正常眼按同一方法进行黄斑区图像采集，并使用随机软件对其神经上皮层厚度进行测量。将所得数据按距中心点距离和方位进行分类统计计算和检验。结果显著性检验证明测量所得 １３２０个数据具有良好的可信性，且结果与以往类似报道相符。结论ＯＣＴ能够对视网膜神经上皮层厚度进行精确的量化测定，正常值测定的结果有助于对眼底疾病的理解。

新生大鼠视网膜神经干细胞的分离培养与诱导分化

目的 初步探讨新生大鼠视网膜神经干细胞的诱导分化。 方法 从新生大鼠视网膜分离具有自我更新能力的细胞克隆 ,传代。用脑源性神经营养因子 (BDNF)与血清单独或联合培养诱导其分化 ,采用免疫细胞化学及免疫荧光化学技术对分化前后的细胞进行鉴定。 结果 分离获得的细胞具有连续克隆的能力 ,表达nestin。分化后细胞分别表达多种神经元及神经胶质细胞的特异性标志物 ;BDNF与血清联合作用可使细胞向神经元分化的比例提高。 结论 新生大鼠视网膜内存在具有自我更新与多分化潜能特性的神经干细胞 ,BDNF作为辅助诱导剂 ,可促进其存活、分化、成熟 ,并可能诱导其向神经元方向分化。

视网膜神经上皮层细胞机械损伤后的再生及与核因子-κB的关系

目的探讨视网膜神经上皮层细胞机械损伤后的再生情况及与核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的关系。方法将培养2 d后的视网膜神经上皮层细胞分为损伤组和对照组,损伤组用塑料滴头划伤细胞,对照组不划伤。比色法测定损伤后2 h、24 h、72 h乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率,免疫组织化学检测损伤前后NF-κB及胶质纤维酸性蛋白在细胞内的分布情况。结果损伤组LDH释放率较相应对照组升高(P<0.05);损伤后时间越长,LDH细胞释放率越低(P<0.05)。损伤后2 h开始,刮伤边缘的扁平细胞增生进入裸区,呈现NF-κB阳性及胶质纤维酸性蛋白染色加深,并可见有再生的小圆细胞突起在损伤区大量增生的扁平细胞表面及空白区域延伸,NF-κB染色阳性。结论机械损伤后,视网膜神经上皮层细胞具有自我修复的趋向,而NF-κB的活化可能参与了这种修复过程。

C57小鼠出生后视网膜神经上皮层细胞发育中的PCNA表达及其意义

目的 研究C5 7小鼠出生后视网膜的发育和增殖细胞核抗原 (PCNA)表达及两者间的关系。方法 采用HE染色及免疫组化标记PCNA的方法 ,对出生后第 1天到第 2 1天的C5 7小鼠视网膜神经层的细胞发育作连续性观察。结果 C5 7小鼠出生后 ,视网膜神经层仍然有一个发育过程。神经节细胞层在出生时已经形成 ,外丛状层在出生后第 6天才分化出来 ,而内、外核层细胞形态上接近成熟小鼠 ,分别在出生后第 10天、19天。PCNA显示在外成神经细胞层分化为内、外核层和外丛状层之前 ,和节细胞各有一次和增殖相关的阳性表达。 3个细胞层在形态学的分化基本完成后 ,又出现了一次结束时间是由外向内变化的阳性过程 (外核层 :第 11天至 15天 :内核层 :第 8天至 16天 ,神经节细胞层 :16天到 2 1天 ) ,这一次阳性表达过程可见到细胞形态向成年形态的转化。结论 C5 7小鼠出生后视网膜神经层的发育 ,分为细胞分化和细胞成熟两个阶段 ,分化阶段的细胞分化顺序可能是以细胞的空间位置决定的 ,成熟阶段的顺序可能是按神经传导的方向发展的 ,与细胞的功能相关 ,PCNA的表达和细胞的增殖、分化、成熟在时间、空间上具有相关性。

小鼠视网膜神经上皮层移植后诱发免疫排斥和赦免反应的观察

目的 观察眼内不同部位移植视网膜神经上皮层后诱发的免疫排斥 /赦免反应。方法 将新生小鼠视网膜神经上皮层分离后移植到受鼠眼结膜下、玻璃体腔和视网膜下间隙 ,术后 2、6、12、18、35 d用光镜观察移植物的存活 /排斥情况。结果 位于结膜下移植物 2 d内发生排斥反应 ,而位于玻璃体腔和视网膜下间隙的移植物不仅未被排斥 ,而且能进一步生长发育。

频域光学相干断层成像术检测黄斑区视网膜神经上皮容积的初步研究

目的应用频域光学相干断层成像术(OCT)测量正常成年人黄斑区视网膜神经上皮层容积,分析黄斑区视网膜内层三维立体结构特征,为评价黄斑区视网膜疾病的神经上皮层容积改变提供参考数据。方法 303名健康人(303只眼)经视力、眼压、裂隙灯、屈光和眼底等常规眼科检查,排除黄斑病变、青光眼、视神经和视网膜病变等影响黄斑区视网膜厚度的疾患后,行双眼以黄斑为中心的三维光学相干断层扫描。每名受检者随机抽取一眼的测量结果进行统计。结果正常人黄斑中心凹1mm直径范围的容积最小(0.175±0.015)mm3,黄斑区内环(颞、上、鼻、下)各象限平均容积分别为(0.450±0.025)mm3、(0.463±0.025)mm3、(0.475±0.027)mm3、(0.463±0.025)mm3,黄斑区外环(颞、上、鼻、下)各象限平均容积分别为(1.284±0.072)mm3、(1.316±0.069)mm3、(1.463±0.087)mm3、(1.312±0.075)mm3;不同性别、眼别之间黄斑区各象限容积无显著性差异;除60岁以上年龄组外,黄斑区各象限容积均不随年龄增加而改变,而60岁以上年龄组各象限容积较60岁以下各年龄组偏小,差异有统计学意义。结论频域OCT能够精确地测量黄斑区视网膜神经上皮层容积,本研究初步建立正常成年人黄斑区视网膜神经上皮容积数据库,为今后临床和科研提供参考。

近视眼黄斑区视网膜色素上皮层厚度及形态与对比敏感度的联系

目的:探讨近视眼视网膜色素上皮层和神经纤维层厚度及其形态与对比敏感度值的联系。方法:21例近视眼病例,39眼做光学相干断层扫描(optical coherence tomogra-phy,OCT),扫描测量并观察黄斑区的视网膜神经纤维层和色素层的厚度和形态;以F.A.C.T对比敏感度测试卡测量各个频率的对比敏感度值;采用Spearman等级相关分析法,分析对比敏感度与近视眼底萎缩弧以及视网膜色素上皮层、视网膜神经纤维层厚度之间的联系;比较不同视网膜色素上皮病变程度的近视眼病例的对比敏感度值。结果:在黄斑区视网膜色素上皮层平均厚度与高频(121、8 cpd)对比敏感度值之间存在具有正相关,有显著性意义(r=0.452、0.437,P均<0.001),而神经纤维层厚度与对比敏感度之间无相关(P均>0.05);视网膜色素上皮存在明显病理改变的眼球其对比敏感度功能显著降低(P均<0.05)。结论:发生眼底病理性改变的近视眼,其对比敏感度降低的视网膜解剖基础是黄斑区视网膜色素上皮层发生病变。

大鼠胚胎视网膜祖细胞分离培养及其分化特性

目的:建立大鼠胚胎视网膜祖细胞体外培养方法并观察其分化特性。方法:取孕18d大鼠胚胎,用无血清培养技术扩增视网膜祖细胞;用免疫细胞化学、扫描电镜与透射电镜技术对祖细胞的特性及诱导分化的细胞类型进行鉴定。结果:从胚胎大鼠视网膜神经部分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞球能表达Nestin并具有掺入BrdU的能力。诱导分化后的细胞表达,其中,Thy1.1+细胞最多,Opsin+细胞次之,GS+细胞较少,PKC+细胞少,Syntaxin+及Peripherin+细胞极少,不表达CalbindinD28K。结论:从胚胎大鼠分离的细胞具有自我增殖能力和多向分化潜能,属于视网膜祖细胞;诱导分化产生5种视网膜细胞,以节细胞最多,未见水平细胞。

中心性浆液性脉络膜视网膜病变患者视网膜下积液和干眼严重程度的相关性

目的探讨中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)患者视网膜下积液(SRF)和干眼严重程度的相关性。方法选取2018年9月至2022年9月于郑州大学第一附属医院眼科就诊的CSC患者115例(115眼)。依据干眼的严重程度分为三组,干眼组(51例):泪液分泌试验(SⅠt)(无表面麻醉)为0~5 mm/5 min或泪膜破裂时间(BUT)为0~5 s,轻度干眼组(47例):SⅠt(无表面麻醉)>5 mm/5 min~10 mm/5 min或BUT>5~10 s,非干眼组(17例):SⅠt(无表面麻醉)>10 mm/5 min及BUT>10 s。利用OCT测量所有患者SRF高度及神经上皮层脱离宽度。分析各组患者性别比例、吸烟人数比例、睡眠不足比例、患者SRF高度及神经上皮层脱离宽度的差异。结果三组患者年龄分布差异无统计学意义(P=0.565)。三组患者性别比较差异有统计学意义(P=0.000),两两比较结果显示,干眼组与轻度干眼组患者性别比例差异无统计学意义(P=0.825),干眼组与非干眼组、轻度干眼组与非干眼组患者性别比例差异均有统计学意义(均为P<0.05)。干眼组、轻度干眼组、非干眼组患者的吸烟人数比例,睡眠不足比例依次降低,差异均有统计学意义(均为P=0.000),两两比较结果显示,三组患者的吸烟人数比例、睡眠不足比例差异均有统计学意义(均为P<0.05)。干眼组、轻度干眼组、非干眼组患者的SRF高度依次降低,分别为(387.16±48.28)μm、(236.94±49.32)μm、(142.24±52.78)μm,差异有统计学意义(P=0.000)。干眼组、轻度干眼组、非干眼组患者的神经上皮层脱离宽度依次减小,分别为(3402.12±511.76)μm、(1601.28±394.11)μm、(574.06±209.49)μm,差异有统计学意义(P=0.000)。两两比较结果显示,干眼组与轻度干眼组、干眼组与非干眼组、轻度干眼组与非干眼组患者SRF高度及神经上皮层脱离宽度差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论CSC好发于中青年男性,患者往往伴有干眼;CSC患者的SRF与干眼的严重程度具有一定的相关性。

视网膜发育中的神经干细胞

视网膜作为脑组织的延伸,存在大量神经干细胞,在内外源性因子机制及各基因调节机制作用下,增殖分化为视网膜各型神经元及神经胶质细胞。应用无血清培养及单细胞克隆技术可分离培养出特异性表达nestin的视网膜干细胞。由于视网膜于细胞具备自我更新能力及多分化潜能,有望用于退行性神经疾病如:视网膜色素变性、老年黄斑变性、晚期青光眼等的细胞替代治疗或药物、基因治疗的载体。

孔源性视网膜脱离合并脉络膜脱离自动复位1例

患者男性,69岁。于2022年5月16日因右眼视力下降伴黑影遮挡20 d来医院就诊。否认外伤及全身病史。眼科检查:视力:右眼0.1,左眼1.0,眼压:右眼9 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),左眼16 mmHg。右眼前节大致正常,晶状体混浊C1N2P1,玻璃体内混浊,眼底检查:右眼视盘色正,界清,下方视网膜脱离,累及黄斑,周边视网膜隆起(图1A)。左眼前节及眼底未见明显异常。相干光层析成像术扫描(optical coherence tomography,OCT)显示:右眼神经纤维层与色素上皮层分离,累及黄斑,其间可见积液(图1B)。

视网膜及视神经疾病

9745963 西班牙的色素性视网膜炎/Ayuso C//Clin Genet,-1995,48(3).-120～122 哈医图9745964 印度色素性视网膜炎的遗传与分离分析/Kar B//Clin Genet.-1995,47(2).-75～79

自体视网膜神经上皮层移植术治疗难治性高度近视黄斑裂孔性视网膜脱离的效果

目的:观察自体视网膜神经上皮层移植术在难治性高度近视黄斑裂孔性视网膜脱离(MHRD)患者中的治疗效果。方法:回顾性临床研究。连续纳入2021年5月至2023年3月就诊于武汉艾格眼科医院的难治性高度近视MHRD患者5例(5眼)。5眼均由同一位医师主刀,手术方式为自体视网膜神经上皮层移植及硅油填充术,术后3个月行硅油取出术。硅油取出术后随访至少6个月。记录患眼自体视网膜移植术前和术后9个月的最佳矫正视力(BCVA)。根据术后光学相干断层扫描(OCT)评估患眼视网膜复位及黄斑裂孔闭合情况;根据术后眼底荧光素血管造影(FFA)和光学相干断层扫描血管成像(OCTA)评估黄斑区视网膜移植片的血供情况。记录并分析患眼术中及术后的并发症。结果:纳入的患者中,男4例(4眼),女1例(1眼),年龄49~71岁,眼轴长度29.86~34.66 mm。术后9个月的BCVA与术前相比,1眼BCVA无改变,其余4眼均较术前有不同程度的提高。术后9个月5眼黄斑区OCT示视网膜均复位,黄斑裂孔均闭合。术后9个月的FFA和OCTA示5眼移植片存活,但未见视网膜浅层新生的毛细血管网络。术中及术后均无并发症。结论:自体视网膜神经上皮层移植术能有效治疗难治性高度近视MHRD,且术中及术后随访期间未见并发症。

大鼠皮层神经元急性分离改良方法

目的建立一种适用于膜片钳技术的大鼠皮层神经元急性分离改良方法,并对其离子通道电流进行记录。方法采用酶加机械分离法制备12～16d鼠龄的大鼠皮层神经元。其电生理学特性测定用全细胞膜片钳技术。结果分离出的神经元形态正常,有较长的轴突;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。结论成功建立了一种简单快速的适用于膜片钳技术的大鼠皮层神经元急性分离改良方法。

老年人黄斑部视网膜光学相干断层扫描分析

目的:应用光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)对老年人正常眼黄斑区视网膜神经上皮层厚度进行测定并分析。方法:51例老年人(102眼),男37例74眼,女14例28眼,平均年龄69岁。应用stratus OCT快速黄斑扫描模式(fast macular thickness)对其进行扫描,比较性别、眼别之间的厚度差异,分析年龄与厚度之间的关系。结果:除右眼内环鼻侧男性的厚度大于女性外(P<0.05),其余象限性别之间均无差异;右眼内环鼻侧、外环颞侧厚度大于左眼(P<0.05),其余各象限眼别之间均无差异;年龄与各象限视网膜神经上皮层厚度均无相关性。结论:在老年人,性别之间、眼别之间的视网膜神经上皮层厚度是有差异的。

大鼠前额叶皮层神经元的急性分离及应用

目的建立一种稳定的大鼠前额叶皮层(Prefrontal Cortex,PFC)神经元的急性分离方法,用于中枢神经元离子通道特性的研究。方法低温人工脑脊液灌流后,结合酶消化及机械吹打,急性分离6～40 d鼠龄大鼠的前额叶皮层神经元。采用全细胞膜片钳技术记录电压门控钠电流和配体门控甘氨酸激活电流。结果分离出的神经元形态正常,细胞膜光滑有弹性,保存了主要离子通道的活性。结论该方法适于中枢神经系统神经元离子通道的研究。

山羊胚胎大脑皮层神经干细胞分离、培养与鉴定

目的 :从山羊胚胎大脑皮层中分离培养并鉴定神经干细胞。方法 :利用NBS培养和单细胞克隆技术在山羊胚胎大脑皮层中分离出具有单细胞克隆能力的细胞 ,并进行培养、传代、分化观察 ,采用免疫组化检测克隆细胞的神经巢蛋白 (Nestin)抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达。结果 :从胚龄 2 4～ 30d的新鲜山羊胚胎大脑皮层中成功分离出神经干细胞 ,该细胞具有连续克隆能力 ,可传代培养 ,表达神经巢蛋白抗原。分化后的细胞表达神经元细胞、胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。结论

急性分离大鼠皮层神经元的方法与体会

目的：建立急性分离大鼠皮层神经元的方法。方法：切取活脑组织切片,经Protease酶解消化、孵育后,采用酶加机械分离法制备10~16 d鼠龄的大鼠皮层神经元。作形态学观察,用全细胞膜片钳技术记录其电生理学特性。结果：分离出的神经元倒置相差显微镜下形态保持良好,有较长的轴突;用膜片钳技术证实,80%以上细胞可以记录出电活动,其保存了主要的离子通道活性。结论：成功建立了一种经济、简便的适用于膜片钳技术的大鼠皮层神经元急性分离方法。