新生大鼠视网膜神经干细胞的分离培养与诱导分化

目的 初步探讨新生大鼠视网膜神经干细胞的诱导分化。 方法 从新生大鼠视网膜分离具有自我更新能力的细胞克隆 ,传代。用脑源性神经营养因子 (BDNF)与血清单独或联合培养诱导其分化 ,采用免疫细胞化学及免疫荧光化学技术对分化前后的细胞进行鉴定。 结果 分离获得的细胞具有连续克隆的能力 ,表达nestin。分化后细胞分别表达多种神经元及神经胶质细胞的特异性标志物 ;BDNF与血清联合作用可使细胞向神经元分化的比例提高。 结论 新生大鼠视网膜内存在具有自我更新与多分化潜能特性的神经干细胞 ,BDNF作为辅助诱导剂 ,可促进其存活、分化、成熟 ,并可能诱导其向神经元方向分化。

microRNA-126在多能干细胞定向分化为视网膜神经干细胞过程中表达量的变化及意义

目的研究microRNA-126(miR-126)在湿性老年黄斑变性(wet AMD)疾病患者来源的多能干细胞(i PSC)定向分化为视网膜神经干细胞(RNSC)中表达量的变化及意义。方法选取新发现的wet AMD患者10例作为观察组,无眼底病变及全身病的10例作为对照组。抽取受试者的外周静脉血,提取单个核细胞(PBMC),进一步提取CD34+细胞,行腺病毒转染,诱导产生i PSC且进行鉴定;应用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测miR-126在10个不同诱导发育阶段的RNSC中的相对表达量。结果 wet AMD疾病患者的外周血成功诱导分化出RNSC;观察组miR-126的不同诱导时间相对表达量的差异除了时刻8、9、10其余测试时间点均有统计学意义(P<0.05);对照组miR-126的不同诱导时间相对表达量的差异无统计学意义(P>0.05);观察组与对照组细胞miR-126相对表达量在不同诱导时间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 wet AMD患者早期miR-126的表达量显著升高,且有逐渐降低的趋势。

microRNA-126在多能干细胞定向分化为视网膜神经干细胞过程中表达量的变化及意义

目的研究microRNA-126（miR-126）在湿性老年黄斑变性（wetAMD）疾病患者来源的多能干细胞（iPSC）定向分化为视网膜神经干细胞（RNSC）中表达量的变化及意义。方法选取新发现的wetAMD患者10人作为观察组，无眼底病变及全身性疾病的10人作为对照组。抽取受试者的外周静脉血，提取单个核细胞（PBMC），进一步提取CD34’细胞，行腺病毒转染，诱导产生iPSC且进行鉴定；应用实时定量PCR（qRT—PCR）技术检测miR-126在10个不同诱导发育阶段的RNSC中的相对表达量。结果wetAMD疾病患者的外周血成功诱导分化出RNSC；观察组miR-126的不同诱导时间相对表达量的差异除时刻8、9、10外的测试时间点均有统计学意义（P〈0．05）；对照组miR-126的不同诱导时间相对表达量的差异无统计学意义（P〉0．05）；观察组与对照组细胞miR-126相对表达量在不同诱导时间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论wetAMD患者早期miR-126的表达量显著升高，且有逐渐降低的趋势。