Long Evans和Wistar大鼠视网膜神经节细胞电生理学及形态学特性比较研究

目的 比较LongEvans大鼠和Wistar大鼠睁眼前后视网膜神经节细胞 (retinalganglioncells ,RGCs)电生理学特性及形态学特征上的差异。方法 取出生后 0～ 3 1dLongEvans和Wistar大鼠 ,各按睁眼时间分为两组 ,制备视网膜片 ,行膜片钳全细胞记录 ,同时行组织切片和细胞内染色 ,观察形态特征。结果 比较 2 2只LongEvans大鼠和 2 4只Wistar大鼠被动膜学特性和动作电位 (actionpotential,AP)幅度及阈值无显著差异 ,形态学上除两者视网膜色素上皮细胞 (retinalpig mentepithelium ,RPE)含或不含色素颗粒外未见明显区别。结论 LongEvans大鼠因其RPE含色素颗粒 ,以及在视觉和神经系统等方面的优点 ,可取代Wistar等白化鼠而作为一种良好的视觉和神经科学研究的实验动物模型。

Long Evans大鼠视网膜神经节细胞电生理学发育特性研究

目的研究Long Evans大鼠不同发育阶段视网膜神经节细胞(Retinal Ganglion Cells, RGCs)电生理学特性,认识视觉发育过程中视网膜神经元成熟的细胞内机制.方法取出生后3～31 d Long Evans大鼠,制备视网膜片,寻找RGCs行膜片钳全细胞记录,给予不同强度去极化脉冲,诱发动作电位.结果 33只Long Evans大鼠共获得94个RGCs,按动作电位类型RGCs分为单锋型、瞬变型和持续型,在视觉发育不同阶段,3种类型的RGCs所占比例不同,在电生理特性上有显著差异.结论在视觉发育过程中,RGCs的电学特性逐渐成熟,动作电位的幅度、频率存在差异,提示不同类型的RGCs在编码及传递时间、空间视觉信息中具有不同作用.

培养大鼠视网膜神经节细胞的形态学与电生理学特性△

目的比较不同培养天数大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)形态学特性与电生理功能,探讨其形态与功能的最佳培养时期。方法采用出生后0dLong Evans大鼠,取视网膜培养神经节细胞,分别于培养后第1d、4d、7d3个时间点观察细胞形态,并行膜片钳全细胞记录研究其静息膜电位(resting membrane potential,RMP)和动作电位(action potential,AP)的阈值、幅度及波宽。结果共记录到53个RGCs,根据AP类型RGCs分为单峰型(39个)、瞬变型(11个)和持续型(3个),其中以单峰型为主(占73.6%)。培养1d RGCs不易诱发AP,多数细胞需增加刺激强度后方可诱发出AP;培养4d时绝大多数RGCs给予20PA的刺激即可诱发出AP;培养7d时虽较容易诱发AP,但由于此时细胞存活状态较差,部分细胞(共记录28个细胞,其中8个不能诱发AP)给予不同强度的刺激,均不能诱发出AP。不同培养时期的RGCs静息膜电位和AP的特性无显著差异。结论随着培养时间的延长RGCs形态逐渐趋于成熟,但电生理功能仍处于幼稚状态;培养4d的RGCs形态和电生理状态最好。

视网膜锥体细胞退行性变大鼠的视觉电生理学观察

目的 研究视网膜锥体细胞功能异常大鼠的视觉电生理特点 .方法 按国际临床视觉电生理学会标准化方案 ,采用 RETIport系统和自制的氯化银角膜电极、不锈钢针状电极对成年雄性 SD大鼠观察视网膜电图暗适应视网膜电图(ERG)、振荡电位 (OPs波 )和明适应 ERG和颜色光 ERG;采用 RETIscan系统观察明暗适应条件下的白色和颜色光多焦点视网膜电图 (m ERG) .颜色光 ERG和 m ERG记录通过在被测眼前分别加红、绿、蓝色滤光片后进行 .结果 大鼠 ERG和 OPs波形与人类相似 .正常大鼠的白色和颜色光 m ERG均能够记录到 .在暗适应条件下 ,m ERG总和反应 (n=5大鼠 )的 b波幅值和潜伏期分别为 :(12 6± 4 1)μV,(44 .8± 2 .4 )ms(白 ) ;(10 4± 39) μV,(47.8± 0 .8) ms(绿 ) ;(86± 33)μV,(47.2± 1.9) ms (蓝 )和 (76± 2 1)μV,(6 5 .0± 1.9) m s(红 ) .明适应条件下正常大鼠的 m ERG仍能够记录到 ,但是波幅值较低 .电生理异常大鼠 ERG和 OPs波形未见异常 ,明适应 ERG和 m ERG波形消失 .暗适应条件下的白光 m ERG波形难以辨别 ,但是颜色光 m ERG波形可以记录到 ,其总和反应 b波幅值和潜伏期 (n=2只眼 )分别为 :(42± 7) μV,(5 0± 7) ms (绿 ) ;(31.1± 0 .4 )μV,(5 0± 8) ms (蓝 ) ;(12 5±4 1) μV,(5 7±

视网膜移植术的神经生理学研究现状

视网膜移植术神经生理学研究虽刚刚起步，但成绩菲然。乙酰胆碱，谷氨酸盐及γ－氨基丁酸能协助调理胚胎视网膜的发生和发育，并调节视网膜移植片中枢内存活和功能表达。选用特殊的植片、实验条件和各种新研究方法，视网膜植片不但能与大脑中枢建立正常的结构和功能联系，而且参与宿主的行为过程。

枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜神经细胞氧化损伤的保护作用

研究枸杞多糖在糖尿病大鼠视网膜神经细胞氧化损伤中的保护作用。方法 将24只大鼠作为研究样本,随机分设3组,每组各8只,其中8只健康大鼠作为对照组,剩余16只制备成糖尿病大鼠模型,并对这16只大鼠采取不同措施,即8只给药,另8只不给药,设置为DM组与LBP组,给药持续24周,在给药期间,分别于用药前与实验结束时测定3组大鼠的体重与血糖指标,并于实验结束时,麻醉大鼠取其眼球,提取出视网膜,测定不同组别大鼠的SDO、MDA等指标,并对视网膜组织中的VEGF表达进行测定。结果 实验过程中,对照组大鼠体重持续增长,血糖水平正常,波动较小,DM组与LBP组大鼠体重下降,血糖升高,与对照组差异明显(P<0.05);将对照组作为参照,DM组与LBP组的SOD表达更低,MDA表达更高,在DM组与LBP组的对比中,DM组SOD表达更低,MDA表达更高,组间差异具有显著性(P<0.05),且GHS-PX、CAT表达也存在组间差异(P<0.05);将对照组作为参照,DM组与LBP组的VEGF及其受体表达更高,在DM组与LBP组的对比中,DM组各项数据高于LBP组,组间差异具有显著性(P<0.05)。结论 枸杞多糖在糖尿病大鼠中的应用,确能对其视网膜神经细胞的氧化损伤起到抑制作用,进而保护其视网膜神经细胞,且其具有调节新生血管生成的作用,临床中应予以重视。

促红细胞生成素在常见视神经和视网膜疾病保护及修复中的研究进展

促红细胞生成素(EPO)和EPO受体不仅存在于造血组织中,在造血外组织中也广泛存在。组织缺血、缺氧以及炎症因子水平升高均可促进EPO表达,并通过抗凋亡、抗炎、抗氧化、抗神经毒性、促进神经再生等一系列复杂机制在中枢神经系统中发挥保护作用,促进神经修复。视神经和视网膜是中枢神经系统的延伸,许多视神经和视网膜疾病本质也由缺血、缺氧所致,因此EPO在视神经和视网膜疾病中也发挥重要作用。深入研究EPO在视神经和视网膜疾病中的保护作用,可以为相关疾病的治疗提供新思路。

石斛散对人视网膜神经细胞凋亡的影响

目的探讨石斛散治疗视网膜变性类疾病方面的作用及机制,为临床治疗同类疾病提供药理学依据。方法以人视网膜神经细胞为研究对象,用AnnexinV+PI为染料标记的凋亡试剂盒,利用流式细胞仪分析药物干预后不同组别中各类凋亡细胞及活细胞的比例。结果正常情况下,对照组活细胞占61·32%,石斛散组为73·8%,两组比较有显著统计学差异。用1mmol/L的谷氨酸干预细胞2h后,活细胞比例降为44·23%,而晚期凋亡细胞和死亡细胞分别增为24·90%和21·63%。预先给予石斛散干预的中药组,活细胞明显多于对照组,其他各类细胞少于对照组。结论石斛散具有抵抗谷氨酸损伤,延缓视网膜神经细胞凋亡过程的作用。

密蒙花方防护糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞损伤机制探讨

目的探讨密蒙花方防治糖尿病视网膜病变大鼠早期视网膜神经细胞损伤的作用机制,为临床实践提供实验依据。方法采用清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠120只,其中正常组30只,其余大鼠采用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠动物模型,造模成功后随机分为模型组及密蒙花方组,密蒙花方组采用密蒙花方灌胃3个月,模型组用与密蒙花方组等容的蒸馏水灌胃。给药1个月后,采用TUNEL法检测大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡情况;分别在给药1个月、2个月、3个月后采用高效液相色谱法检测各组大鼠视网膜中谷氨酸含量; PCR以及Western blot法检测视网膜中Sigma-1R mRNA和蛋白表达情况。结果给药1个月后,TUNEL法检测结果示,密蒙花方组RGCs凋亡数少于模型组。高效液相色谱法检测结果示,给药1个月、2个月、3个月后,模型组较正常组谷氨酸含量均增加(均为P <0. 01),密蒙花方组谷氨酸含量较模型组均降低(均为P <0. 01)。给药3个月后,正常组、模型组和密蒙花方组视网膜Sigma-1R mRNA相对表达量分别为1. 71±0. 11、0. 67±0. 09和1. 50±0. 14,Sigma-1R蛋白相对表达量分别为0. 39±0. 02、0. 16±0. 02和0. 30±0. 01;与正常组相比,模型组Sigma-1R mRNA及蛋白水平均降低(均为P <0. 01);与模型组相比,密蒙花方组Sigma-1R mRNA及蛋白水平均升高(均为P <0. 01);密蒙花方组与正常组之间差异均无统计学意义(均为P> 0. 05)。结论糖尿病视网膜病变早期即出现视网膜神经细胞的凋亡及损伤,密蒙花方可通过谷氨酸和Sigma-1R介导机制干预糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞损伤,从而起到阻止糖尿病视网膜病变进一步发展的作用。

灯盏花中单体成分对体外培养大鼠视网膜神经细胞的影响

目的:考察咖啡酸、东莨菪内酯、野黄芩苷对体外培养视网膜神经细胞存活的影响,探讨灯盏花中具视神经保护作用的有效成分。方法:采用胰酶消化法将18只出生2-3d的乳鼠视网膜制成细胞悬液,接种于经多聚鸟氨酸(HA)和层粘连蛋白(LN)包被的96孔板中。于培养3d后,分别加入PBS液及不同含量的咖啡酸、东莨菪内酯、野黄芩苷溶液继续培养2d,采用MTT比色法测量其存活细胞的吸收值,同时对部分细胞行Nissel体染色检查。结果:Nissel体染色检查结果表明,培养5d的存活细胞大部分均为神经细胞。与空白对照组比较,咖啡酸含量在3.9-1000μg·mL-1、东莨菪内酯、野黄芩苷含量在250-1000μg·mL-1时,其吸收值均明显增加(P<0.05,P<0.01),且有一定的量效关系。结论:咖啡酸、东莨菪内酯、野黄芩苷三者均能促进体外培养的视网膜神经细胞存活,且咖啡酸活性最强。

微波诱导视网膜神经细胞凋亡及硒的保护作用

目的 观察微波诱导视网膜神经细胞凋亡及硒的保护作用 .方法 体外培养视网膜神经细胞 ,按微波辐照强度分为 4组辐照 1h.选 30 m W·cm- 2组为防护组 ,在培养液中加入 Na2 Se O3后辐照 .照后测培养液温度、细胞存活率 ,激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡并进行荧光强度的定量分析 .结果 培养液温度、细胞凋亡数量及荧光强度随微波辐照强度增大而增加 .加 Na2 Se O3后辐照可使凋亡细胞数量减少 ,荧光强度减弱 .结论 微波可诱导视网膜神经细胞凋亡 ,Na2 Se

银杏叶提取物对培养大鼠视网膜神经细胞的保护作用

目的观察银杏叶提取物(EGb761)对大鼠视网膜神经细胞线粒体膜电位(MMP)的影响及其对抗谷氨酸兴奋性毒性对视网膜神经细胞的保护作用。方法培养视网膜神经细胞,用Rhodamine123标记培养7d的视网膜神经细胞线粒体,分为正常对照组、EGb761组、谷氨酸组以及EGb761+谷氨酸组,共聚焦激光显微镜动态检测MMP的变化。结果与正常对照组比较谷氨酸组MMP下降;EGb761组MMP及EGb761+谷氨酸组MMP升高,P<0.01。结论EGb761可能通过升高视网膜神经细胞MMP的途径影响线粒体的功能;并且可对抗谷氨酸兴奋性毒性,保护视网膜神经细胞。

促红细胞生成素对谷氨酸作用的视网膜神经细胞的保护作用

目的评价促红细胞生成素(Epo)对视网膜神经细胞的生存影响。方法原代新生大鼠视网膜神经细胞体外混合培养;免疫细胞化学法检测培养细胞Epo和EpoR的表达;经与不同浓度Epo共同培养,用MTT比色法检测细胞存活,评价Epo对细胞存活的影响。经不同浓度Epo预培养12 h,再用谷氨酸刺激,MTT法检测细胞存活,观察Epo是否能抵抗谷氨酸兴奋毒性。结果培养的神经样细胞表达Epo和EpoR;Epo不影响正常培养神经细胞的存活,但是能提高谷氨酸刺激后的神经细胞存活。结论Epo能部分抵抗谷氨酸对混合培养视网膜神经细胞的兴奋毒性。

银杏叶对成人视网膜神经细胞活性的影响

目的研究银杏叶对视网膜神经细胞活性的影响,为治疗退行性视网膜疾病等提供参考依据。方法以成人视网膜为研究对象,以24h和72hMTT检测,透射电镜超微形态学观察,细胞线粒体膜电位测定等为研究手段,研究银杏叶对成人视网膜神经细胞活性的影响。结果细胞超微形态学观察发现,银杏叶药物组培养2周的细胞外节段盘膜排列规整,内节段线粒体丰富,细胞核染色质均匀。MTT检测发现,银杏叶能够较好地促进视网膜神经细胞增生,且以15.625mg/ml时保护作用最明显。银杏叶能够显著升高视网膜神经细胞的膜电位并使兴奋性呈波动性变化。结论银杏叶对培养的视网膜神经细胞有良好的保护作用。

视网膜神经元回路响应运动目标的生理学建模

根据模式动物蛙视网膜神经元的生理和信息通路结构,进行了运动目标动态响应的建模和仿真研究.在建立视网膜主要神经元模型的基础上,通过不同的选择和组合仿真来获得不同的输出,分析模式动物获取外界运动目标的信息整合和传输机制,以及由单一刺激因素引起的视觉系统对运动目标动态信息的获取处理和认知过程.研究神经元回路不同连接的动态处理机制,推测响应的认知结果,并与已有生理学数据相比较.结果表明,该视网膜神经元回路模型可以很好地完成对运动目标的检测.讨论了运动目标的检测机制和R3神经元方向选择性响应的形成原因,并分析了感受野时空特性对运动目标检测的影响.

成人视网膜神经细胞的原代培养和初步鉴定

目的建立成人视网膜神经细胞培养系统，为深入研究视网膜细胞及观察药物作用提供基础。方法采用组织块培养法，以含100g·L^-1 FBS的IMDM作为细胞培养液，培养成人视网膜细胞，对培养7—10d的细胞进行初步细胞鉴定。结果体外培养成人视网膜细胞原代培养可达80d左右，早期培养的细胞中视网膜神经细胞占65％左右，其中可见多数带有外节段的感光细胞。结论这种培养方法提供的视网膜细胞早期主要以神经细胞为主，可用于视网膜神经细胞的药物作用研究。

缺氧诱导因子-1α在早期糖尿病大鼠视网膜神经细胞中的表达

目的研究缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）在早期糖尿病大鼠视网膜中的表达，以探讨其在糖尿病性视网膜神经细胞病变发生及发展中的作用。方法用链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型，在制模成功后1周、2周、4周、6周、8周、10周及12周取眼球组织，以年龄匹配正常大鼠作为对照组，分别以免疫组织化学染色及Western blotting方法检测视网膜组织中HIF-1α表达的位置及表达量；同时，以Real-timeRT-PCR方法检测视网膜组织中血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factot，VEGF）的mRNA表达水平。结果糖尿病模型诱导成功后1周，视网膜组织即有HIF-1α表达，主要位于节细胞层及内核层的细胞核内，4周时阳性细胞数大于1周（12．34±0．41vs9．32±0．74），6～10周达到高峰（分别为16．51±0．35，45．33±0．52和37．31±0．43），12周下降（9．82±0．54）。Western blotting显示HIF-1α蛋白表达模式与免疫组织化学相似，1周时即有表达，6～10周达到高峰，12周下降。Real—time RT—PCR结果显示视网膜组织VEGF的mRNA水平在基础状态下少量表达，糖尿病诱导成功后表达水平逐渐提高，8周达到高峰，之后开始下降。结论HIF-1α及其下游基因VEGF在早期糖尿病视网膜神经细胞中的瞬时高表达而不是持续表达，可能是早期糖尿病视网膜神经细胞损害的原因。

阿魏酸对视网膜神经细胞内游离钙浓度变化的影响

目的研究阿魏酸(FA)对视网膜神经细胞内游离钙([Ca2+]i)水平变化的影响。方法以胚胎7个月人视网膜,新生小牛视网膜和生后4个月小鼠视网膜为研究对象,检测FA作用后[Ca2+]i水平变化。结果500μg/mLFA作用下,胚胎人组[Ca2+]i荧光强度(基值为57.08±3.97)在10s内降至38.41±4.92,维持在38.41±4.92～43.45±3.29;新生小牛组[Ca2+]i(基值为69.48±3.87)在20s内降至52.86±3.69,维持在49.75±3.82～54.39±4.04;成年小鼠组[Ca2+]i(基值为71.54±3.73)在20s内降至54.91±3.57,维持在53.81±3.49～58.14±3.49,且发现胚胎人组[Ca2+]i基值和受光照射后变化明显异于新生期小牛组和成年小鼠组。结论FA能有效降低视网膜神经细胞内游离钙水平,对于促进增殖和保护细胞具有重要作用。

神经生长因子对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响

目的观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响,研究NGF对糖尿病视网膜神经的保护作用。方法选择清洁级雄性2月龄SD大鼠60只,随机分成正常组、糖尿病组和NGF组,每组20只,后两组制作糖尿病模型。NGF组给予NGF腹腔注射(1000 U·kg-1),每天1次,共注射10 d,正常组和糖尿病组腹腔注射等体积生理盐水,3组分别在注药后4周末和8周末随机选取10只大鼠处死,取视网膜组织,做电镜标本观察视网膜超微结构,制备视网膜石蜡切片,采用TUNEL法进行凋亡细胞原位标记,行视网膜神经细胞凋亡计数,对所有数据进行统计学分析。结果电镜下正常组视网膜结构正常;糖尿病组膜盘局部模糊,线粒体肿胀,嵴消失,染色质边集;NGF组神经细胞无明显改变,仅见视杆细胞膜盘局部模糊不清,内核层和外核层染色质轻度密集,改变较糖尿病组轻。视网膜凋亡指数4周、8周时正常组分别为(3.30±1.52)%和(3.40±1.10)%,糖尿病组分别为(21.53±5.34)%和(31.40±10.15)%,NGF组分别为(12.36±5.26)%和(15.47±6.73)%,不同时间点3组间差异均有统计学意义(均为P=0.000)。结论 NGF能有效降低糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,对糖尿病视网膜神经细胞有保护作用。

大鼠视网膜神经细胞混合培养模型的建立

应用1～3日龄SD大鼠视网膜神经细胞,本着尽可能复制视网膜神经细胞体内生存环境的原则,建立了大鼠视网膜神经细胞混合培养模型。