一氧化氮合成酶抑制剂(L-NAME)对缺血性视网膜损伤后视网膜神经节细胞保护的研究

本文综述缺血性视网膜损伤机制 ,一氧化氮特性及与缺血性视网膜损伤的关系 。

一氧化氮和氧自由基诱导视网膜神经节细胞凋亡

目的 探讨一氧化氮 (NO)和氧自由基 (O- 2 )诱导培养大鼠视网膜神经节细胞 (RGCs)凋亡的作用及 2种作用因素间的关系。方法 体外培养大鼠 RGCs,用细胞形态学变化和 DNA断裂百分率来确定 NO供体 -硝普钠 (SNP)以及 O- 2 产生体系黄嘌呤氧化酶 (XO)和黄嘌呤 (X)所致的RGCs凋亡情况。结果 (1) NO诱导组较对照组的细胞凋亡百分率和 DNA断裂百分率显著增高 ,且与 SNP的浓度相关 ,加入超氧化物歧化酶 (SOD)后可明显抑制 SNP所致的RGCs凋亡 ;(2 ) O- 2 损伤组的结果与 NO损伤组结果相似 ,同时应用 O- 2 和 NO组所致 RGCs的凋亡作用显著高于单独应用 O- 2 组或 NO组。结论 NO和 O- 2 都能诱导培养的RGCs凋亡 。

神经节苷脂GM．1对脑缺血再灌注大鼠诱导型．氧化氮合成酶的影响

目的:研究单唾液酸四已糖神经节苷脂(GM-1)对脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的影响并探讨其可能机制。方法:采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2h再灌注22h。将雄性SD大鼠随机分成假手术组,模型对照组和GM-1处理组(15、30、60mg/kg3个给药剂量组)。通过红四氮唑(TTC)染色和图像分析计算各组脑梗死体积,采用生物化学法测量各组伤侧脑中NO含量和iNOS活性。结果:与模型对照组相比,GM-1中、高剂量处理组脑梗死体积缩小,iNOS活性和NO量下降,低剂量组变化不明显。结论:脑缺血后iNOS升高与脑损伤关系密切,而GM-1可以对抗iNOS和NO上升,并减轻脑缺血损伤。

视网膜神经节细胞凋亡与-氧化氮和氧自由基的相关性研究

目的 探讨一氧化氮(NO)和氧自由基(听)诱导培养大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的作用及两种作用因素间的关系。方法 体外培养大鼠RGCs，用细胞形态学变化和DNA断裂百分率来确定NO供体-硝普钠(SNP)以及O2-产生体系黄嘌呤氧化酶(XO)和黄嘌呤(X)所致的RGCs凋亡情况。结果 ①NO诱导组较对照组的细胞凋亡百分率和DNA断裂百分率显著增高，且与SNP的浓度相关，加入超氧化物歧化酶(SOD)后可明显抑制SNP所致的RGCs凋亡；②O2-损伤组与NO损伤组结果相同，同时应用O2-和NO组所致RGCs的凋亡作用显著高于单独应用O2-组或NO组。结论 NO和O2-都能诱导培养的RGCs凋亡，并且二者之间存在协同作用。

散血明目片对兔视网膜静脉阻塞后视网膜组织中诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨活血通脉利水明目之散血明目片对兔视网膜静脉阻塞(RVO)模型的干预作用。方法取健康有色家兔18只分为3组,每组6只,分别为:正常对照组、模型组、散血明目片组。造模后14天用空气栓塞法将动物处死,采用免疫组化法观察视网膜组织中诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)的表达情况。结果 3组的平均光密度值和平均灰度值的组间比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。平均光密度值越低,其对应的iNOS表达就越弱;平均灰度值越低,其对应的iNOS表达就越强。结论散血明目片可以减弱兔RVO模型由于缺氧而诱导的视网膜iNOS表达,从而减轻NO过量生成对视网膜神经细胞造成的毒害作用。

早产儿视网膜病变模型鼠的视网膜细胞凋亡及一氧化氮机制

目的观察早产儿视网膜病变(ROP)模型鼠的视网膜神经节细胞层(RGCL)的细胞凋亡及与一氧化氮(NO)的关系。方法7d龄C57BL/6J新生小鼠36只随机分为3组,每组12只。于氧浓度75%的容器内饲养5d,再置正常空气下饲养至17d龄,分别在7d、8d龄时给予左旋-N-硝基-精氨酸(L-NNA)和生理盐水,分为L-NNA给氧组、生理盐水给氧组和单纯给氧组。正常空气中饲养的12只同龄新生小鼠作为对照组。眼球切片并行TUNEL染色和苏木精-伊红染色,观察4组RGCL的细胞形态。结果4组小鼠RGCL均见部分细胞凋亡及TUNEL染色阳性,单纯给氧组的TUNEL阳性细胞数显著多于对照组,L-NNA给氧组显著少于单纯给氧组和生理盐水给氧组。结论ROP小鼠模型的RGCL存在一定程度的病理性细胞凋亡,可能与NO有关。

DSX对高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用研究

目的观察中药提取物DSX对高眼压大鼠视网膜一氧化氮(NO)含量以及视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡率的影响。方法采用Akira法,烙闭大鼠上巩膜静脉,制作大鼠持续性高眼压模型,予中药提取物DSX进行治疗一个月。结果DSX能一定程度阻止眼压升高,降低大鼠视网膜中NO的含量,减少视网膜神经节细胞的凋亡。结论DSX能有效保护高眼压下的视网膜神经节细胞。

灯盏细辛提取物对高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的观察灯盏细辛[Erigeron brevicapus(Vant.)Hand.-Mazz.,EBHM]提取物对高眼压大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用。方法选取健康成年大鼠30只,随机选取10只作为对照组,其余20只采用Akira法,烙闭大鼠3支上巩膜静脉,建立大鼠慢性高眼压模型,造模后随机分为模型组、治疗组各10只。治疗组于高眼压持续7 d后行EBHM注射液肌肉注射,每日1次,连续1个月。观察EBHM对高眼压大鼠眼压、多焦视网膜电图(multifocal electroretinogram,mfERG)、RGCs凋亡率以及视网膜一氧化氮(NO)含量的影响。结果 EBHM提取物能有效地阻止眼压升高,改善大鼠mfERG,明显降低大鼠视网膜中NO的含量,减少视网膜神经节细胞的凋亡。结论 EBHM提取物对高眼压下的大鼠视网膜神经节细胞具有保护作用。

诱导型一氧化氮合酶抑制剂对兔眼受损视神经的干预

目的 通过建立兔眼视神经损伤动物模型,观察氨基胍（aminoguanidine,AG）干预的视神经损伤后的RGCs凋亡及NO含量变化.方法 健康成年大耳白兔66只,随机分为3组：A组（正常对照组,6只）、B组（损伤对照组,30只）、C组（损伤治疗组,30只）.B、C组采用同一反向动脉夹夹闭视神经20 s制作动物模型,按伤后1、3、7、14、21 d又随机分为5组（每组6只）.C组于伤后2 min耳缘静脉注射2%AG（80 mg/kg）,B组同法注射生理盐水.应用TUNEL染色计数凋亡阳性细胞;硝酸还原酶法测量NO含量,722S可见分光光度计法测定诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）活力.结果 A组视网膜切片极少见到凋亡细胞.B、C组RGCs凋亡于伤后1 d偶见[分别是（2.84±0.34）个/mm2,（2.04±0.27）个/mm2],3～7 d逐渐增多,至14 d达高峰[（28.45±2.00）个/mm2,（20.73±1.34）个/mm2],之后逐渐下降.正常视网膜组织中很少表达iNOS,但含有少量NO,在损伤后两者含量逐渐增高,同一时间点B组和C组比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 兔眼视神经夹伤后,耳缘静脉注射AG通过减少NO的合成,降低RGCs凋亡,对RGCs有保护作用.

压力对大鼠纯化视网膜神经节细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA及其蛋白表达的影响

目的 研究不同压力下纯化培养的大鼠视网膜神经节细胞 (retinalganglioncells ,RGCs)中诱导型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase ,iNOS)mRNA及其蛋白质的表达 ,探讨青光眼患者RGCs损伤的机制。方法 将纯化培养的Sprague Dawley大鼠RGCs随机分成对照组和A、B、C、及D组 ,分别在 0、2 0、4 0、6 0、及 80mmHg(1mmHg =0 133KPa)的压力下培养 4 8h后 ,用原位杂交、RT PCR及Westernblot法检测RGCs中iNOSmRNA及其蛋白质的表达 ,并用全自动图像分析系统测定其吸光度值。结果 纯化培养的RGCs纯度为 98%。原位杂交、RT PCR及Westernblot法检测RGCs中iNOSmRNA及其蛋白表达结果变化均呈平行关系 :对照组无表达 ,A组有较弱的表达信号 ,B、C及D组表达逐渐增强 ;3项检测结果用全自动图像分析显示 :A组iNOSmRNA均弱表达 ,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;B、C及D组均为强表达 ,各组与对照组比较差异有非常显著意义(P <0 0 1)。结论 压力可激活RGCs中iNOSmRNA及其蛋白质的表达 ,由此产生过量的NO损伤RGCs,成为青光眼的发病因素之一。

iNOS在LPS诱导活化小胶质细胞中的表达变化

目的:活化的小胶质细胞介导的神经炎症一直被认为是帕金森病(PD)的重要发病因素,而诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)是一种重要的炎性蛋白,本文旨在探讨i NOS在活化小胶质细胞中的表达变化。方法:进行大鼠小胶质细胞原代培养,分为对照组及实验组,其中实验组加入脂多糖(LPS)1.0μg/ml分别刺激12 h和24 h。应用免疫荧光染色检测受刺激后小胶质细胞内i NOS定位分布。应用免疫蛋白印迹法观察受刺激后i NOS在小胶质细胞内水平变化。结果:实验组小胶质细胞内i NOS表达在12 h明显升高(P<0.01),24 h后表达恢复到对照组水平,染色显示i NOS主要表达于细胞质内。结论:在LPS诱导炎症模型中,i NOS在活化小胶质细胞内表达先升高而后恢复到原有水平,提示存在炎症反应的动态变化。

丹参对低气压噪声暴露豚鼠耳蜗一氧化氮合酶活性的影响

目的探讨丹参对低压及噪声环境下豚鼠耳蜗诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响。方法豚鼠随机分为暴露1 d 及7 d 两大组,又各分为对照、治疗及防治组。3组均置于模拟高原5 500 m 低气压环境,110 dB SPL 白噪声刺激;防治组和治疗组每日肌注丹参注射液(1.3 ml·kg^(-1))。采用免疫组织化学和图像分析半定量法,观察暴露后不同时间各组耳蜗 iNOS 的表达和阳性产物的平均灰度值。结果正常耳蜗未见 iNOS阳性表达。低压噪声暴露后豚鼠耳蜗外毛细胞、内毛细胞、血管纹及螺旋神经节等部位均可见 iNOS 呈棕黄色颗粒的阳性反应。耳蜗 iNOS 阳性反应各组随暴露时间延长逐渐增强。随出舱后时间延长而逐渐减弱。除暴露1 d 组出舱1 d 的对照组与治疗组的灰度值差异不显著(P>0.05)外,其它各组间差别显著(P<0.05)。暴露7 d 组的防治组、治疗组与对照组、防治组与治疗组间差异非常显著(P<0.01)。结论低压噪声暴露后,豚鼠耳蜗内 iNOS 阳性反应随暴露时间延长逐渐增强,随出舱后时间延长而逐渐减弱;丹参的抗氧化反应.可减轻iNOS 对一氧化氮(NO)的生成.可能为丹参对低压噪声暴露后听器损伤具一定保护功能的机理之一。

人体阴茎海绵体神经一氧化氮合成酶免疫组织化学研究

目的 探讨人体阴茎海绵体神经中一氧化氮合成酶的分布情况。方法 采用人体组织切片苏木素 伊红(HE)染色和神经性一氧化氮合成酶(nNOS)免疫组织化学染色方法,对1具成人尸体阴茎海绵体神经及相关组织进行染色分析。结果 前列腺后外侧神经束中存在nNOS神经元细胞体和神经纤维。神经元细胞胞浆内可见均匀分布棕黄色颗粒,神经纤维则可见散在棕黄色颗粒。阴茎干背神经中,4条神经纤维截面发现有棕黄色颗粒,其他神经纤维均未发现棕黄色颗粒。龟头部组织中,未发现nNOS棕黄色颗粒神经纤维。结论 前列腺后外侧阴茎海绵体神经束中存在nNOS ,并且包含nNOS神经节细胞,它发出nNOS神经纤维到达阴茎海绵体。

氨基胍对受损视神经的保护性作用

视神经损伤是眼科常见病,常致视力部分或完全丧失,严重影响患者的生活及身心健康。目前视神经损伤的治疗仍是国内外眼科界的一大难题。近年来发现一氧化氮（Nitric oxide,NO）在神经系统损害中起重要作用。生物体内的NO在一氧化氮合成酶（NOS）的作用下生成瓜氨酸并释放出NO。氨基胍（Aminogunidine,AG）是一种肼化物,它具有高选择性抑制诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）。现将视神经损伤后视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell,RGCs）损伤及氨基胍对其保护性作用作一综述。

银杏叶提取物对大鼠视神经夹伤后视神经保护作用的研究

目的探讨银杏叶提取物（EGb761）对大鼠视神经钳夹伤后视神经的保护作用。方法60只大鼠随机分为3组：正常组、对照组、治疗组，对照组及治疗组制备视神经损伤的动物模型，治疗组于伤后1h开始给予EGb7610．05ml（100mg／kg）球后注射，隔日1次。对照组给予等量的生理盐水。在伤后3d、7d、14d、28d取材，采用苏木精伊红（HE）染色观察各组视神经组织形态学变化、免疫组织化学测定各组视神经诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、B细胞淋巴瘤／白血病．2（Bcl-2）、Bcl-2相关x蛋白（BAX）阳性细胞和Bcl-2／Bax的变化。结果3d、7d、14d及28d，对照组和治疗组iNOs阳性细胞表达较正常组显著升高（P〈0．01）；治疗组较对照组iNOs阳性细胞表达显著降低（P〈0．01）；差别均有统计学意义。3d、7d、14d及28d治疗组Bcl-2阳性细胞较对照组显著升高（P〈0．01），差异均有统计学意义。3d、7d治疗组Bax阳性细胞较对照组显著降低（P〈0．01），14、28d治疗组与对照组无明显差别（P〉0．05）。结论EGb761能降低视神经组织iNOs、Bax蛋白的表达，增加Bcl-2蛋白表达，提高Bcl-2／Bax的比率，抑制RGCs细胞凋亡，对视神经有保护作用。

孕酮对去卵巢大鼠的视神经保护作用

目的:用去卵巢大鼠建立更年期动物模型,给予不同浓度孕酮,检测血清中一氧化氮(NO)含量的变化,观察孕酮对视网膜神经节细胞凋亡影响。方法:用放射免疫分析方法(RIA)测定血清中孕酮浓度,用比色法测定血清中NO的含量;用TUNEL原位凋亡技术检测视网膜神经节细胞凋亡。结果:NO浓度随孕酮水平增加而升高,视网膜神经节细胞凋亡与孕酮含量呈负相关。结论:适量孕酮可能通过促进NO生成,从而抑制视网膜神经节细胞的凋亡,进而发挥其视神经保护作用。

氨基胍在视神经损伤中的作用家兔实验观察

目的观察视神经损伤后氨基胍与神经节细胞凋亡的关系。方法取健康大白兔44只,随机分为三组,对照组(A组)4只,损伤盐水组(B组)20只,损伤药物治疗组(C组)20只,B、C二组兔子双眼作视神经损伤模型后,C组给予氨基胍药物治疗,剂量每只兔子100mg/kg,2次/d,B组相同时间给予生理盐水10ml/kg。分别于造模后第一、三、七、十四、二十一天处死A组4只兔子,随机处死B组4只兔子,C组4只兔子,检测凋亡的视网膜神经节细胞数,观察神经节细胞病理形态学变化。结果视神经损伤后盐水组(B组)凋亡的视网膜神经节细胞显著多于对照组(A组),治疗组(C组)凋亡的视网膜神经节细胞数明显低于盐水组(B组),且差异有统计学意义。结论氨基胍可减少外伤后视网膜神经节细胞的凋亡,保护视神经。

氨基胍与视神经损伤

目的观察视神经损伤后氨基胍与神经节细胞凋亡的关系。方法取健康大白兔40只,随机分为二组,损伤盐水组A组20只为对照组,损伤药物治疗组B组20只为实验组,A组兔子双眼作视神经损伤模型后,B组给予氨基胍药物治疗,剂量每只兔子100mg/kg,2次/d,B组相同时间给予生理盐水10ml/kg。分别于造模后1,3,7,14,21d随机处死A组4只兔子,B组4只兔子,检测凋亡的视网膜神经节细胞数,观察神经节细胞病理形态学变化。结果视神经损伤后盐水组凋亡的视网膜神经节细胞显著多于对照组,治疗组凋亡的视网膜神经节细胞数明显低于盐水组,且差异具有统计学意义。结论 AG可减少外伤后视网膜神经节细胞的凋亡,保护视神经。