PDCD4沉默通过调控NLRP3/NLRP6炎症小体的平衡来减轻视网膜缺血再灌注损伤后的神经炎症反应

目的探究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)通过含NOD样受体家族Pyrin域蛋白(NLRP)3/NLRP6信号通路活性对视网膜缺血再灌注(RIR)损伤后神经炎症反应的抑制作用及机制。方法选取50只SD大鼠作为研究对象,根据不同处理方式,分为Sham组(空白对照组)、RIR模型组、MCC950组(NLRP3/NLRP6抑制组)、si-PDCD4组(PDCD4沉默组)、si-PDCD4+MCC950组(PDCD4沉默+NLRP3/NLRP6抑制组),每组10只大鼠。除去空白对照组大鼠外,剩余大鼠均构建RIR损伤模型,并进行相应处理;Western-blot检测视网膜组织内PDCD4、NLRP3、NLRP6、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、抗坏血酸过氧化物酶(ASC)表达水平;苏木精-伊红(HE)染色分析视网膜组织病理变化;终端尿苷酸核苷酸末端标记法检测视网膜组织细胞凋亡能力;酶联免疫吸附试验检测大鼠眼球血、视网膜组织内炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-18、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;Western-blot检测视网膜组织内细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3表达水平。结果与Sham组比较,RIR模型组PDCD4、NLRP3、NLRP6、Caspase-1、ASC、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平及细胞凋亡指数(AI)均升高,Bcl-2表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与RIR模型组比较,MCC950组、si-PDCD4组大鼠NLRP3、NLRP6、Caspase-1、ASC、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平及AI均降低,Bcl-2表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与si-PDCD4组及MCC950组比较,si-PDCD4+MCC950组PDCD4、NLRP3、NLRP6、Caspase-1、ASC、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平及AI进一步降低,Bcl-2表达水平进一步升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PDCD4沉默具有减轻RIR病理损伤,抑制视网膜细胞凋亡的作用,其分子机制可能与抑制NLRP3/NLRP6炎症小体诱导神经炎症反应有关。

槲皮素腹腔注射对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响及其机制

目的观察槲皮素(QU)腹腔注射对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)的影响并探讨其机制。方法96只成年雄性无眼疾SPF级大鼠采用随机数字法分为对照组6只,RIRI组、阴性对照组及QU组各30只。QU组于建模前连续7 d及建模前10 min腹腔注射QU,RIRI组、阴性对照组分别腹腔注射等量生理盐水及阴性对照溶剂DMSO,对照组不作任何处理。除对照组外,RIRI组、QU组及阴性对照组均采用升高眼压法建立RIRI模型。分别于建模后6、12、24、48、72 h制作大鼠视网膜组织标本,采用HE染色观察大鼠视网膜组织形态变化,计算机图像分析系统测量大鼠视网膜组织内层厚度。采用TUNEL法观察视网膜组织细胞凋亡情况,免疫组织化学染色检测视网膜组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果对照组大鼠视网膜细胞形态及各层分界均正常;RIRI组、阴性对照组大鼠建模6 h后视网膜呈高度水肿,12 h后视网膜神经节细胞数目减少、神经节细胞及内核层细胞排列紊乱,24 h后视网膜水肿较前有所减轻、细胞结构遭到进一步破坏,48 h后可见视网膜水肿基本消失且神经节细胞数、内核层细胞数减少;QU组在各时点视网膜组织结构较RIRI组及阴性对照组更完整,细胞损伤程度更轻。建模后6、12 h视网膜内层厚度RIRI组、阴性对照组>QU组>对照组,建模后24 h视网膜内层厚度QU组>RIRI组、阴性对照组>对照组,建模后48、72h视网膜内层厚度对照组>QU组>RIRI组、阴性对照组(P均<0.05)。对照组视网膜组织偶见凋亡细胞、Caspase-3阳性细胞表达;RIRI组、阴性对照组视网膜组织凋亡细胞数及Caspase-3阳性细胞表达在建模6、12、24h逐渐升高,于建模24h至高峰,并于建模48、72h逐渐降低;QU组各时点视网膜组织凋亡细胞数及Caspase-3阳性细胞表达变化趋势与RIRI组、阴性对照组相同,但均低于同时点RIRI组、阴性对照组(P均<0.05)。结论QU腹腔注射对大鼠RIRI具有一定的抑制作用,其机制可能与下调Caspase-3表达抑制细胞凋亡有关。

右美托咪定预处理对视网膜缺血再灌注损伤的保护效应及机制研究

目的:探究右美托咪定预处理对视网膜缺血再灌注损伤的保护效应及机制研究。方法:随机挑选30只雄性大鼠,分为健康组、缺血组和预处理组,每组各10只。健康组大鼠各项指标均正常,缺血组采用高眼压法制造的大鼠视网膜缺血再灌注模型,预处理组对缺血组小鼠进行了右美托咪定预处理。分别于缺血前15 min作用及再灌注前5 min左右,健康组及缺血组按照5 mL/kg大鼠体重进行生理盐水灌注,预处理组对缺血组小鼠按照25μg/kg大鼠体重进行了右美托咪定预处理灌注。比较三组大鼠于再灌注24 h时的视网膜电图(ERG)、细胞凋亡指数(AI)、促凋亡因子(Bax)、抑凋亡因子(Bcl-2)表达水平、肿瘤坏死因子(TNF-α)及白细胞介素-6 (IL-6)表达水平。结果:健康组ERG显著优于缺血组,缺血组ERG显著优于预处理组,三组组间比较差异有统计学意义(F=1 296.98、667.99,P<0.05);健康组AI显著优于缺血组,缺血组AI显著优于预处理组,三组组间比较差异有统计学意义(F=43.32,P<0.05);三组大鼠Bax、Bcl-2、TNF-α、IL-6比较,差异有统计学意义(F=50.09、54.04、113.06、105.19,P<0.05)。结论:右美托咪定可能通过促进Bcl-2表达、抑制Bax表达以改善细胞凋亡指数,同时能够抑制TNF-α、IL-6表达,降低视网膜缺血再灌注损伤炎症效应,进而改善视网膜缺血再灌注损伤发挥保护作用。

N-乙酰-5-羟色胺(NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。方法取健康成年Sprague-Dawley大鼠66只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(6只)、缺血再灌注组(30只)与药物组(30只),药物组于造模前30 min腹腔注射5 mg·kg-1NAS,缺血再灌注组腹腔注射同等剂量的生理盐水,缺血再灌注组与药物组按RIRI后时间,分为6 h、12 h、24 h、48 h、72 h五个亚组。采用HE染色法观察各组视网膜形态学变化,免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果HE染色显示正常对照组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列紧密;缺血再灌注组大鼠RIRI后6 h、12 h视网膜各层高度水肿,24 h后水肿逐渐减轻,神经节细胞逐渐减少,分布较紊乱,随着时间延长,视网膜神经节细胞大片缺失;药物组6 h、12 h较缺血再灌注组细胞水肿明显减轻,24 h、48 h、72 h组较缺血再灌注组细胞排列规整,神经节细胞数量减少减轻。缺血再灌注组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数在灌注后6 h开始表达增加,阳性细胞数为(561.15±37.19)个·mm^(-2),24 h达到较高水平,阳性细胞数为(1522.61±84.36)个·mm^(-2),随后逐渐下降,药物组视网膜各时间点活性Caspase-3阳性细胞数均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。正常对照组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6 h Bcl-2阳性细胞开始下降,12 h后继续减少,24 h降至较低水平;药物组各时间点Bcl-2阳性细胞数均显著多于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。正常对照组大鼠视网膜几乎未见Bax阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6 h神经节细胞层及内核层可见Bax阳性细胞,24 h达到较高水平,48 h开始下降;药物组各时间点Bax阳性细胞均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 NAS可促进RIRI大鼠视网膜Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,降低活性Caspase-3蛋白表达,减轻细胞凋亡,具有神经保护作用。

视网膜缺血再灌注损伤大鼠视网膜中白细胞介素-23和白细胞介素-17的表达及意义

目的通过建立视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)模型,观察白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)和白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)在Sprague-Dawley(SD)大鼠视网膜上的表达,探讨其在RIRI中的可能作用机制。方法采用随机数字表法将75只健康无眼疾SD大鼠随机分为正常对照组和模型组。正常对照组不作任何处理,模型组采用前房灌注生理盐水升高眼压法建立RIRI模型。分别在建模后12 h、24 h、72 h、144 h处死SD大鼠,免疫组织化学染色法检测IL-23和IL-17蛋白在视网膜上的表达及分布情况;Western blot和ELISA检测分析各时间点视网膜IL-23和IL-17的表达水平和变化规律。结果免疫组织化学染色法显示IL-23和IL-17蛋白在正常对照组视网膜中表达极少,而在模型组表达明显增多。两者主要表达于视网膜神经节细胞层和内核层细胞的细胞浆。Western blot法检测发现IL-23和IL-17蛋白在RIRI视网膜中的表达明显增强,IL-23蛋白在建模后24 h表达最强,而IL-17蛋白在建模后72 h表达达到最高峰。ELISA法结果显示建模后12 h、24 h、72 h、144 h,模型组视网膜IL-23和IL-17蛋白的表达水平均较正常对照组明显升高,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。结论 IL-23和IL-17在RIRI模型SD大鼠视网膜中表达明显增强,IL-23/IL-17通路作为致病因素,通过加重视网膜炎症反应参与RIRI的病理损伤。

白藜芦醇对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后视网膜组织中Caspase-3和Bcl-2表达的影响

目的:研究白藜芦醇对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)后视网膜组织中Caspase-3和Bcl-2表达的影响,探讨白藜芦醇对RIRI的治疗作用及其机制。方法:选取SD大鼠90只,随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组30只,通过对前房加压建立大鼠RIRI模型,模型组和治疗组大鼠缺血再灌注1、6、12、24和48h,治疗组大鼠用微量注射器于大鼠玻璃体腔内注射0.5nmol·L-1的白藜芦醇5μL。采用倒置显微镜观察视网膜组织结构,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测各组大鼠视网膜组织中Caspase-3和Bcl-2的阳性细胞数和蛋白表达水平。结果:模型组大鼠造模后视网膜组织水肿,可见神经节细胞空泡样变性,细胞层排列呈现疏松状,视网膜神经节细胞数目大量减少,边界模糊,神经纤维层明显变薄;治疗组大鼠视网膜组织结构、损伤程度及神经节细胞变性程度均轻于模型组。免疫组织化学检测,与模型组比较,治疗组大鼠视网膜组织中Caspase-3和Bcl-2阳性细胞数明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与模型组比较,治疗组大鼠各时间点视网膜组织中Bcl-2蛋白表达水平升高,24和48h时差异有统计学意义(P<0.05);治疗组各时间点大鼠视网膜组织中Caspase-3蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇对RIRI大鼠的视网膜神经节细胞结构有改善作用,其作用机制可能与降低视网膜组织中Caspase-3表达水平及升高视网膜组织中Bcl-2表达水平有关。

拳参正丁醇提取物对视网膜缺血再灌注损伤时一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的研究拳参正丁醇提取物(PBNA)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤时NO及NOS活性的影响。方法 SD大鼠随机分成4组:假手术组、视网膜缺血再灌注模型组、低剂量及高剂量PBNA治疗组。假手术组分离颈总动脉后舌下静脉给予1ml.kg-1的NS,其余各组分别在夹闭颈总动脉前分别舌下静脉注射生理盐水、低剂量(0.3mg·kg-1)及高剂量(1mg·kg-1)的PBNA。颈总动脉夹闭1h再灌注1h后,视网膜电流图(ERG)检查,取血,分离血清,测定血清NO含量、T-NOS、iNOS及eNOS的活性。结果与假手术组相比,模型组ERG幅度明显降低(P<0.01)、血清NO含量降低(P<0.001)、iNOS活性升高(P<0.05)、eNOS活性降低(P<0.05);与模型组比较,PBNA低剂量组NO含量升高(P<0.05)、iNOS活性降低(P<0.05),低剂量组及高剂量组ERG幅度升高(P<0.001)、T-NOS(P<0.01)及eNOS(P<0.05,P<0.01)活性均升高。结论 PBNA可通过提高T-NOS和具有保护作用的eNOS活性,降低具有损伤作用的iNOS的活性,升高NO含量,提高抗氧化能力和扩血管功能,对视网膜功能起保护作用。

视网膜缺血再灌注损伤的治疗进展

视网膜缺血再灌注损伤是目前临床上常见的眼病,主要发生于视网膜中央动静脉栓塞、急性闭角性青光眼、糖尿病性视网膜病等视网膜血管阻塞所引起的缺血性眼病。表现为许多缺血性眼病患者在血液再通后,视网膜损伤严重,视功能反而进一步下降。视网膜缺血再灌注损伤是多因素综合作用的结果,主要包括氧自由基的损伤作用,细胞内的钙超载现象,白细胞作用以及细胞凋亡等。本文就国内外有关视网膜缺血再灌注损伤的治疗进展综述如下。

E-64d对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中Calpain和Caspase-3表达的调控作用

目的探讨E-64d(半胱氨酸蛋白酶抑制剂及钙激活中性蛋白酶抑制剂)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)中对Calpain/Caspase-3表达的调节作用。方法将80只SD大鼠随机分为正常组、视网膜缺血再灌注组、对照组和E-64d治疗组,并分为1、3、6、24、72h5个时间段。通过前房穿刺加压法制成RIRI动物模型,采用Western-blot以及RT-PCR方法测定在大鼠RIRI模型中的Calpian、Caspase-3蛋白和mRNA表达情况。结果缺血再灌注24hm-Calpain、Caspase-3蛋白的表达缺血再灌注组较正常组上升,而E-64d组表达与正常组相似,比缺血再灌注组下降。E-64d能下调视网膜缺血再灌注后m-Calpain/Calpastatin的mRNA比值,在24h与缺血组有显著统计学差异。结论E-64d能降低视网膜缺血再灌注时m-Calpain、Caspase-3蛋白的表达,调控m-Calpain和Calpastatin的mRNA比值。

神经生长因子对视网膜缺血再灌注损伤中凋亡相关基因c-fos/c-jun表达的影响

目的探讨神经生长因子（NGF）对视网膜缺血再灌注损伤中凋亡相关基因c—fos／c—jun表达的影响。方法将28只Wistar大鼠随机分为正常组、缺血组和治疗组，后两组又按照不同再灌注时间分为再灌注后1、6、12、24、48、72h6个时间段。建立视网膜缺血再灌注损伤动物模型，以NGF或平衡盐溶液玻璃体腔注射，通过免疫组织化学法检测各组视网膜组织中c-fos／c-jun基因的表达变化。结果缺血组视网膜再灌注后1h可发现有c—fos／c-jun蛋白的表达，12h达到高峰，24h表达明显下降。治疗组变化规律与缺血组相似，但表达量明显减弱，再灌注1～24h各时段差异有统计学意义（P〈0．05）。结论视网膜缺血再灌注损伤时c—fos／c-jun基因在视网膜神经节细胞层（RGCL）与内核层表达增高；NGF可以抑制视网膜缺血再灌注损伤时c—fos／c-jun基因在视网膜的表达。

拳参正丁醇提取物对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究拳参正丁醇提取物(polygonum bistorla L.n-butylal cohol extract,PBNA)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤时抗氧化能力及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)含量的影响。方法24只SD大鼠随机分成4组,即对照组、视网膜缺血再灌注模型组(简称模型组)、低剂量(0.3mg.kg-1)及高剂量(1.0mg.kg-1)PBNA组,每组各6只大鼠。颈总动脉夹闭法制作视网膜缺血再灌注模型。颈总动脉夹闭60min再灌注60min后,行视网膜电图(electroretinogram,ERG)检查;比色法测定血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitricoxide,NO)浓度及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性,放射免疫法检测血清TNF-α含量。结果(1)与对照组ERG幅度(2.02±0.49)mV相比,模型组ERG幅度(0.55±0.28)mV显著降低,差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组比较,低剂量PBNA组ERG幅度(3.07±0.18)mV及高剂量PBNA组ERG幅度(3.71±0.48)mV均显著升高,差异均有显著统计学意义(均为P<0.001);(2)模型组血清MDA浓度(7.98±1.21)μmol.L-1较对照组(5.58±1.50)μmol.L-1升高,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,低剂量PBNA组MDA浓度(5.77±1.11)μmol.L-1降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)模型组血清NO浓度(26.31±5.34)mmol.L-1较对照组NO浓度(63.39±7.49)mmol.L-1降低,差异有显著统计学意义(P<0.001),与模型组比较,低剂量PBNA组NO含量(43.86±9.27)mmol.L-1升高,差异有统计学意义(P<0.05);(4)模型组血清GSH-Px活性(288.20±41.90)×103U.L-1较对照组(418.80±49.27)×103U.L-1降低,差异有显著统计学意义(P<0.01),与模型组比较,GSH-Px活性低剂量PBNA组(434.00±86.76)×103U.L-1及高剂量PBNA组(379.20±55.71)×103U.L-1均升高,前者差异有显著统计学意义(P<0.01),后者差异有统计学意义(P<0.05);(5)模型组血清SOD活性(64.19±7.65)×103U.L-1较对照组(77.56±7.76)×103U.L-1降低,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,低剂量PBNA组SOD活性(83.17±6.47)×103U.L-1升高,差异有统计学意义(P<0.05);(6)模型组血清TNF-α含量(3.13±0.87)ng.L-1较对照组(1.84±0.17)ng.L-1升高,差异有显著统计学意义(P<0.01),与模型组比较,高剂量PBNA组TNF-α含量(2.21±0.41)ng.L-1降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PBNA可通过提高SOD、GSH-PX的活性及NO的释放,从而提高视网膜缺血再灌注损伤时的抗氧化能力,还可通过降低TNF-α的释放,降低组织细胞损伤,对眼功能起保护作用。

蒙药额尔顿·乌日勒对视网膜缺血再灌注损伤大鼠血清中NO和NOS的影响

目的:研究蒙药额尔顿·乌日勒对血清一氧化氮(NO)和一氧化氮合成酶(NOS)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤(RIR)中的影响,探讨额尔顿·乌日勒对大鼠RIR的保护作用及其相关机制。方法:通过高眼压法造成RIR模型,采用ELISA方法对160只RIR大鼠血清中NO、NOS含量进行测定。结果:视网膜缺血再灌注后模型组NO和NOS含量非常显著地高于空白组(P<0.01),12h、24h、48h高剂量组NO含量非常显著地低于模型组(P<0.01),24h、48h低、中剂量组NO含量显著地低于模型组(P<0.05),24h、48h高剂量组NOS含量显著地低于模型组(P<0.05)。结论:蒙药额尔敦·乌日勒能降低RIR血清中NO、NOS含量,能够减轻视网膜组织损伤,对视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用。

TNF-α与视网膜缺血再灌注损伤的研究进展

视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）是眼科临床常见的一种病理过程,多见于视网膜血管阻塞疾病、糖尿病性视网膜病变等疾病。炎症反应学说参与RIRI是目前研究的热点,视网膜缺血和血流再灌通时发生随血流聚集的TNF-α、IL-6、ICAM-1等炎性介质增多,产生炎症级联反应引起视网膜损伤。

姜黄素对视网膜缺血再灌注损伤大鼠视网膜组织结构及IL-23和IL-17表达的影响

目的:通过建立视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemiareperfusion injury,RIRI)模型,观察姜黄素对SpragueDawley(SD)大鼠视网膜组织结构及白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)和白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)表达的影响。方法:采用随机数字法将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(normal control group,NCG)、模型组(model group,MG)、姜黄素低剂量组(low-dose curcumin group,LDCG)和姜黄素高剂量组(high-dose curcumin group,HDCG),每组15只。MG、LDCG、HDCG组SD大鼠右眼均采用前房灌注生理盐水升高眼压法建立RIRI模型。LDCG、HDCG组均于建模前30min和建模后每24h定时分别以20、100mg/kg的剂量腹腔注射姜黄素溶液。建模后72h作视网膜石蜡切片,采用HE染色观察各组视网膜组织结构及炎症细胞浸润程度。同时,提取视网膜分别作Westernblot、ELISA法检测和分析各组视网膜IL-23和IL-17的表达水平及变化情况。结果:光学显微镜观察发现NCG组视网膜结构正常,层次清楚,细胞排列均匀整齐,视网膜厚度正常,无炎症细胞浸润。MG、LDCG组视网膜组织水肿,各层排列紊乱,可见细胞空泡、核浓缩和炎症细胞浸润等病理改变。HDCG组视网膜组织结构与NCG组相似,视网膜组织结构完整,炎症反应相对较轻。Western-blot、ELISA法检测和分析均显示IL-23、IL-17在MG组的表达明显增强,与NCG组相比差异均具有显著统计学意义(P<0.01),但LDCG、HDCG组中IL-23、IL-17的表达较MG组明显降低,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论:姜黄素可以减轻视网膜的炎症反应,保护视网膜组织结构;抑制视网膜IL-23、IL-17的表达,且呈剂量依赖性,这为姜黄素在亚急性期治疗RIRI提供了新的理论依据。

复方五花血藤对鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨复方五花血藤对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用健康成年SD大鼠90只,随机分为正常对照组、模型组和治疗组,其中模型组和治疗组建立视网膜缺血再灌注模型,治疗组于造模前连续3 d给予复方五花血藤灌胃,每天2次(总剂量为10 g·kg-1·d-1),模型组和正常对照组灌服相同剂量的生理盐水。通过HE染色、透射电镜观察再灌注6 h、12 h、24 h、48 h与72 h各组大鼠视网膜的形态学变化,原位杂交方法检测各组视网膜凋亡相关因子survivin的表达情况。结果与正常对照组相比,模型组再灌注后6 h视网膜神经节细胞层高度水肿,内丛状层明显增厚,部分视网膜神经节细胞发生空泡变性,但随时间延长病变逐渐减轻。治疗组各时间点视网膜损伤均较模型组轻。与正常对照组相比,模型组survivin在再灌注后6 h即开始增加,24 h达到高峰,以后逐渐下降,但各时间点均高于正常对照组(均为P<0.05)。与模型组相比,治疗组survivin各时间点表达均较高(均为P<0.05)。结论初步证实复方五花血藤对于大鼠视网膜缺血再灌注损伤有较为明显的保护作用,此研究对于临床药物的开发和利用具有积极意义。

视网膜缺血再灌注损伤的机制及药物治疗进展

视网膜缺血再灌注（retinal ischemia reperfusion，RIR）损伤即缺血性眼病患者的视网膜在恢复供血后，出现明显的功能障碍，甚至发生不可逆性损伤，再灌注并不缓解视网膜细胞的损伤，反而加剧了细胞的死亡。目前对于视网膜缺血再灌注损害的发病机制研究较多，包括氧自由基学说、一氧化氮学说、钙通道学说、炎症反应学说、兴奋性氨基酸学说、基因调控学说、细胞凋亡学说等。针对不同学说，对RIR损伤的治疗研究在国内外也取得了一定的进展，现综述如下。

复方丹参滴丸对视网膜缺血再灌注损伤模型大鼠的疗效观察

目的探究复方丹参滴丸对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia reperfusion injury,RIRI)的影响。方法将42只健康成年SD大鼠随机分为正常对照组(6只)、模型组(18只)和治疗组(18只)。模型组和治疗组采用前房灌注加压建立大鼠RIRI模型,治疗组RIRI后立即给予复方丹参滴丸(450 mg·kg-1·d-1)灌胃,连续7 d,模型组和正常对照组灌胃等量生理盐水。观察RIRI后24 h、7 d视网膜电流图的改变,并取视网膜行组织病理学观察。测量RIRI后24 h、7 d视网膜各层厚度,同时计数视网膜神经节细胞数。结果 RIRI后24 h及7 d,模型组视网膜电流图的b波振幅分别为(92.33±24.36)μV及(101.28±21.97)μV,较正常对照组大鼠测量到的(215.40±35.91)μV显著降低,而治疗组的b波振幅分别为(137.07±22.71)μV及(166.24±16.72)μV,较模型组显著好转(均为P<0.05);各组a波与b波的变化趋势相同。大鼠RIRI后24 h,模型组全层视网膜高度水肿,可见大量空泡变性,RIRI后7 d,视网膜厚度明显变薄,而治疗组大鼠视网膜的组织病理学损害较模型组均明显减轻。结论复方丹参滴丸可从形态学及功能学上减轻大鼠RIRI损伤。

骨髓间充质干细胞对视网膜缺血再灌注损伤中Fas和FasL表达的影响

目的探讨骨髓问充质干细胞（bonemarrowmesenchymalsteincells，BMSC）移植对大鼠视网膜缺血再灌注损伤（retinalischemiareperfusioninjury，RIRI）凋亡相关因子Fas和FasL表达的影响。方法体外贴壁筛选法培养大鼠BMSC，将39只健康成年SD大鼠随机分成正常组3只、模型组18只、BMSC移植组18只。各组大鼠均选择右眼作为实验眼建立大鼠RIRI模型，正常组不做任何处理。另2组大鼠于RIRI后1h分别给予玻璃体腔注射PBS缓冲液（模型组）、BMSC（BMSC移植组），并于RIRI后2h、6h、12h、24h、48h、72h各随机处死3只SD大鼠，迅速摘取右眼。免疫组织化学法检测大鼠视网膜组织Fas和FasL的阳性细胞数情况。结果正常视网膜组织中Fas极少表达，FasL视网膜全层低表达。RIRI后2h、6h、12h、24h、48h、72h，模型组Fas阳性细胞数分别为（20．5±0．9）个·mm-2、（263．6±15．6）个·mm-2、（583．5±15．8）个·mm-2、（1184．6±45．5）个·mm-2、（684．5±3．5）个·mm-2、（80．6±4．5）个·mm-2，BMSC移植组分别为（19．8±0．8）个·mm-2、（238．5±14．7）个·mm-2、（473．6±13．6）个·mm-2、（964．5±23．7）个·mm-2、（632．6±5．8）个·mm-2、（72．5±6．3）个·mm-2：模型组FasL阳性细胞数分别为（42．2±0．9）个·mm-2、（57．3±0．9）个·mm-2、（365．8±7．5）个·mm-2、（1004．3±17．9）个·mm-2、（793．5±8．6）个·mm-2、（210．6±4．9）个·mm-2，BMSC移植组分别为（40．5±0．8）个·mm-2、（55．6±0．7）个·mm-2、（351．2±6．8）个·mm-2、（992．8±6．0）个·mm-2、（683．4±12．9）个·mm-2、（206．3±4．7）个·mm-2。与模型组比较，BMSC移植组各时间点Fas、FasL的阳性细胞数明显减少。Fas在6～48h各组差异有统计学意义（P〈0．05），FasL在12～48h各组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论RIRI后Fas／FasL表达水平升高，而玻璃体腔内注射BMSC抑制Fas／FasL的表达，证明BMSC移植对RIRI有治疗作用。

铁死亡在视网膜缺血再灌注损伤中的作用及中药治疗的研究进展

视网膜缺血再灌注会对人视网膜神经元造成重大的损伤,且现有干预措施疗效甚微。铁死亡是一种细胞程序性死亡,参与全身多个器官缺血再灌注的过程。本文对铁死亡理论的研究进展进行综述,发现其参与了视网膜缺血再灌注损伤的发生发展,铁死亡抑制剂可以保护视网膜损伤,但铁死亡相关机制研究如诱发途径的文献报道较少,尚处于萌芽阶段。中药在治疗视网膜缺血再灌注中具有多靶点、多通路的优势,可通过抑制铁死亡来干预视网膜缺血再灌注损伤。本文通过总结铁死亡在视网膜缺血再灌注损伤的作用,并分析相关的中药药理机制,可为临床治疗和药物研发提供新的思路。

碱性成纤维细胞生长因子及WTp53在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法:随机将28只大鼠分为正常组和手术组,其中手术组大鼠左眼为缺血再灌注组,右眼为治疗组(玻璃体腔内注射bFGF),观察再灌注后不同时间段1,6,12,24,48,72h视网膜组织中细胞凋亡情况及WTp53的表达变化。前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型。应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜组织中凋亡细胞数,免疫组织化学SABC法检测视网膜组织中WTp53蛋白的表达。结果:视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6h,并逐渐递增,24h达到高峰,48h开始下降,72h组不明显。WTp53蛋白表达改变与凋亡的神经细胞改变基本一致。治疗组各观察指标表达变化规律与缺血再灌注组基本一致,但凋亡细胞数目在6～48h犤6,12,24,48h分别为(358.3±43.4),(859.5±12.0),(1006.5±49.4),(695.7±72.2)个/mm2犦明显低于缺血再灌注组犤(444.8±89.7),(1053.0±96.1),(1254.0±164.8),(891.0±87.2)个/mm2犦(t=2.9131～4.299,P均<0.05);WTp53表达在6～48h缺血再灌注组显著下降(t=3.342～4.781,P<0.05;t=52.586,P<0.01)。结论:WTp53参与视网膜缺血-灌注损伤,促进神经节细胞的凋亡;