视黄酸核受体γ重组腺病毒构建及其鉴定

目的构建携带大鼠视黄酸核受体γ（retinoic acid receptor γ，RARγ）的重组腺病毒，为研究RAR3,在骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）成神经分化中的作用奠定基础。方法体外扩增大鼠础研基因，将其定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAd Trace—TOX构建重组质粒pAdTrace—RARγ，并在BJ5183菌中与骨架质粒pAd Easy-1重组获得腺病毒载体pad—RARγ，Pac I酶切后转染HEK293细胞包装腺病毒。腺病毒Ad—RARγ感染大鼠MSCs，Real—time PCR和Western印迹检测RARγ的表达。结果PCR，酶切及测序均证实础研正确克隆至腺病毒质粒载体中，Ad—RARγ对MSCs感染率达60％～70％，并明显增强础研基因和蛋白的表达。结论成功构建携带RARγ的重组腺病毒，并具有上调大鼠MSCsRA脚基因和蛋白表达的功能。