小鼠视黄酸刺激基因8(Stra8)的原核表达及兔多克隆抗体的制备与鉴定

目的原核表达小鼠视黄酸刺激基因8(Stra8)蛋白并制备兔抗小鼠Stra8多克隆抗体。方法应用分子克隆法构建pET28a-Stra8原核表达重组质粒,将该重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导Stra8蛋白表达,采用组氨酸标签(His-TAG)亲和层析柱纯化原核蛋白。以纯化后的Stra8蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔,制备Stra8多克隆抗体。ELISA测定多克隆抗体的效价,Western blot法检测制备的抗体对睾丸组织Stra8蛋白的识别能力以确定其有效性,免疫荧光组织化学染色法检测睾丸组织中Stra8蛋白的表达以确定多克隆抗体的特异性。结果pET28a-Stra8重组质粒经双酶切和测序鉴定正确,经诱导后能高效表达Stra8蛋白,应用His-TAG亲和层析法获得纯度较高的Stra8蛋白。应用纯化的Stra8蛋白连续免疫新西兰大白兔5次后,提取抗血清,经ELISA检测获得的Stra8多克隆抗体效价为1∶106,Western blot法分析显示多克隆抗体可特异性地识别睾丸组织中的内源性Stra8蛋白,免疫荧光染色法显示该多克隆抗体能够特异性的识别小鼠睾丸组织精原细胞表达的Stra8蛋白。结论在大肠杆菌中有效地诱导表达Stra8原核蛋白并制备了特异性的兔抗Stra8多克隆抗体。

视黄酸及Stra8基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞分化的影响

旨在研究视黄酸(All-trans retinoic acid,RA)及Stra8(Stimulated by retinoic acid gene 8)基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs)分化的影响。选用PCR方法鉴定雄性cESCs为研究对象,转染Stra 8基因,对Stra8基因阳性cESCs使用RA进行12d连续诱导,同时设立Stra8基因转染组、RA诱导组及空白组对照,各组均进行3次重复试验。细胞形态学、qRT-PCR检测RA及Sira8基因对cESCs分化的影响。结果表明。转染Stra8基因进行RA诱导,在诱导12d后,出现精原干细胞样的圆形小克隆,其他组cESCs出现类胚体或解体;qRT-PCR鉴定发现各组中干细胞标记基因表达量随着培养时间的延长逐渐下降,同时检测到生殖细胞相关基因表达,转染Stra8基因并使用RA诱导组中表达量均高于对照组(P<0.01),6d表达量达到最高,然后逐渐下降。Stra8基因和RA的联合作用能够促进cESCs向着生殖细胞方向的分化,不仅改变了原有细胞形态,同时出现了生殖相关基因的表达。通过该方法可以在体外建立一个。ESCs诱导分化模型,将为生殖细胞的发生、增殖、分化及调控机理的研究和人类不孕不育症的治疗奠定良好的基础。

Stra8：生殖细胞有丝分裂转变为减数分裂前特异表达的基因

Stra8(stimulated by retinoic acid gene 8)是哺乳动物生殖细胞由有丝分裂转变为减数分裂前特异表达的基因。Stra8在小鼠胚胎卵巢从前向后先后表达,从E12.5到E16.5持续约4d,Stra8表达后1d随之诱发减数分裂使减数分裂前期进行;在出生后睾丸开始Stra8的表达并诱发减数分裂,在胚胎性腺生殖细胞减数分裂的发生时间决定生殖细胞是朝雄性还是雌性的方向发育。视黄酸(retinoic acid,RA)的合成部位及CYP26b1的表达(降解RA的酶)调节Stra8基因表达。胞质Stra8蛋白增加导致生殖细胞进入减数分裂前期,但Stra8蛋白的功能还是未知的。

鸡Stra8基因真核表达载体构建及亚细胞定位的研究

试验旨在克隆苏禽黄鸡视黄酸激活基因8(Stra8)的cDNA序列,构建pEGFP-C1-Stra8载体并制备鸡Stra8抗体。通过RT-PCR克隆苏禽黄鸡Stra8基因cDNA,构建pEGFP-C1-Stra8和pcDNA3.1(+)-Stra8重组质粒,分别转染NIH-3T3细胞和免疫小鼠制备抗体,间接免疫荧光法检测抗体效价以及在细胞中的分布。结果显示,苏禽黄鸡Stra8基因cDNA全长645bp,共编码214个氨基酸,提交至GenBank获得登录号为JX204292.1;成功制备Stra8多克隆抗体,pEGFP-C1-Stra8融合蛋白在NIH-3T3细胞质中表达。该结果为深入探讨禽类Stra8生物学功能奠定了基础。

Am80和TSA对鸡Stra8基因启动子活性的调控作用

旨在确定鸡Stra8基因启动子的主要调控区域,预测调控元件结合位点,探索用他米巴洛丁(Am80)或曲古抑菌素(TSA)诱导对Stra8启动子活性的调控作用。将鸡Stra8基因5′侧翼系列缺失片段插入到pGL3-basic载体构建重组质粒,并转染DF-1和GC-1,通过检测荧光素酶活性和预测启动子区域调控元件的结合位点,选取合适的启动子片段并构建其重组质粒Stra8-EGFP;将Am80和TSA分别按一定的浓度梯度诱导转染细胞,进行荧光素酶活性检测以筛选最佳诱导浓度;用最适剂量的Am80和TSA分别单独或联合诱导转染重组质粒Stra8-EGFP的P19,并检测各诱导组的绿色荧光表达程度。结果表明,鸡Stra8基因启动子-1 055^+54bp片段的活性较强,且含有RARα、RXRα和RARβ的结合位点;分别单独或联合使用Am80和TSA对转染的细胞进行诱导,结果显示,Am80和TSA协同作用的荧光素酶活性最高;重组质粒Stra8-EGFP转染细胞后,用Am80(10-5 mol·L-1)和TSA(10-6 mol·L-1)联合诱导可见绿色荧光强度最强。本研究成功分析了鸡Stra8基因启动子的活性和调控元件的结合位点,确定Am80和TSA共同诱导可显著提高Stra8基因启动子调控活性。

小鼠Stra8基因慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的探讨GV341质粒构建小鼠Stra8基因的慢病毒表达载体的方法。方法应用PCR技术扩增目的基因,将扩增产物插入慢病毒质粒GV341,通过PCR筛选及测序对阳性克隆进行鉴定。将慢病毒表达载体转染至293T细胞后,提取转染细胞的总蛋白,用Western Blot法检测细胞中Stra8蛋白的表达情况。结果成功构建了GV341-Stra8慢病毒表达载体。结论 Stra8慢病毒表达载体的构建为体外研究Stra8基因的功能奠定了基础。

3个地方猪品种BOLL和STRA8基因结构变异位点的群体分布研究

为了探讨BOLL-I6-sv285(15号染色体BOLL基因第6内含子)和STRA8-I4-sv447(18号染色体STRA8基因第4内含子)这两个结构变异在地方猪与欧洲猪品种中的群体分布差异,试验采用PCR方法对从江香猪、江口萝卜猪、荣昌猪和大白猪4个猪品种进行基因分型,并通过在线软件miRBase、UCSC、RegRNA 2.0对结构变异序列所含的功能元件进行分析。结果显示,BOLL-I6-sv285为一段285bp的插入,经群体验证,3个地方猪品种以DI和DD基因型为主,I等位基因的频率高于大白猪,插入基因型(II)对应较高的产仔数,基因型与从江香猪产仔数之间呈显著相关(P<0.05);STRA8-I4-sv447为一段447bp的插入突变,群体中DD基因型占优势,从江香猪、江口萝卜猪和大白猪的I等位基因频率高于荣昌猪,插入基因型(II)对应较低的产仔数,基因型与从江香猪产仔数之间呈显著相关(P<0.05)。本试验鉴定的BOLL-I6-sv285和STRA8-I4-sv447两个结构变异可作为从江香猪产仔数的候选分子标记。

肿瘤坏死因子α刺激基因-6和CXC趋化因子配体8在瘢痕疙瘩不同部位中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子α刺激基因-6(TSG-6)和CXC趋化因子配体8(CXCL8)在瘢痕疙瘩不同部位中的表达及意义。方法选取2016年3月至2018年10月在河南大学淮河医院进行手术切除联合放射疗法治疗的瘢痕疙瘩病人25例,术中收集各病人浸润部、增生部和老化部瘢痕疙瘩组织,另外17例正常皮肤对照取自四肢损伤接受手术的病人,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各皮肤组织标本中TSG-6蛋白、CXCL8蛋白以及细胞凋亡、胶原代谢相关蛋白的表达量并进行比较。结果对照组、老化部组、增生部组、浸润部组相比,TSG-6,第二个线粒体衍生的半胱天冬酶激活蛋白(second mitochondria-derived activator of caspase,Smac)、半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)、胶原代谢相关蛋白IGF-1表达量均依次降低(P<0.05),CXCL8蛋白,凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、黑色素瘤凋亡抑制蛋白(Livin)、胶原代谢相关蛋白转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、I型胶原(Type I collagen,COL-I)、基质金属蛋白酶2(Matrix Metallo Proteinase 2,MMP-2)表达量均依次升高(P<0.05)。对照组、浸润部组、增生部组、老化部组TGS-6蛋白表达量分别为(1.81±0.19)、(0.34±0.07)、(0.64±0.12)、(1.37±0.14)ng/mL,CXCL8蛋白表达量分别为(37.54±5.61)、(248.65±40.62)、(174.01±26.25)、(66.43±10.23)ng/mL;Bcl-2蛋白表达量分别为(61.87±2.12)、(167.21±6.34)、(114.45±3.26)、(81.64±3.41)ng/mL,Smac蛋白表达量分别为(618.42±47.85)、(176.55±19.64)、(348.71±31.58)、(424.54±36.13)ng/mL,Caspase-3蛋白表达量分别为(17.67±2.64)、(5.48±1.74)、(8.87±1.54)、(15.25±2.67)ng/mL,Livin蛋白表达量分别为(1.25±0.28)、(3.94±0.35)、(2.26±0.31)、(1.51±0.24)ng/mL,P53蛋白表达量分别为(2.19±0.28)、(0.64±0.08)、(1.58±0.11)、(1.81±0.17)ng/mL;TGF-β1蛋白表达量分别为(275.54±76.16)、(421.57±56.01)、(361.55±52.15)、(324.16±74.72)ng/mL,COL-1蛋白表达量分别为(0.98±0.05)、(3.80±0.54)、(2.51±0.61)、(1.43±0.16)ng/mL,MMP-2蛋白表达量分别为(2.47±0.26)、(25.39±6.41)、(19.12±5.45)、(5.17±1.42)ng/mL,IGF-1蛋白表达量分别为(251.05±77.25)、(81.51±14.50)、(130.48±21.52)、(234.49±82.42)ng/mL;Pearson相关分析结果显示,瘢痕疙瘩病人TGS-6蛋白表达量与Bcl-2、Livin、TGF-β1、COL-1、MMP-2均呈负相关(P<0.05),与Smac、Caspase-3、p53、IGF-1均呈正相关(P<0.05);CXCL8蛋白表达量与Bcl-2、Livin、TGF-β1、COL-1、MMP-2均呈正相关(P<0.05),与Smac、Caspase-3、p53、IGF-1均呈负相关(P<0.05)。结论TSG-6和CXCL8在瘢痕疙瘩不同部位中表达有明显差异,可能通过调节细胞增殖、凋亡及胶原蛋白的合成、代谢,参与瘢痕疙瘩的发生与发展。

猪IFN-α8的原核表达及抗猪繁殖与呼吸综合征病毒活性研究

为确定猪干扰素α8(poIFN-α8)蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抗病毒作用,合成poIFN-α8基因,克隆入pCSMH大肠杆菌表达载体,将重组表达载体转化DH5α感受态细胞,进行温度诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳。将表达的目的蛋白利用Ni-琼脂糖凝胶纯化柱纯化后,采用Western blot试验检测重组poIFN-α8的反应原性,利用猪肺泡巨噬细胞(PAM)检测0.01、0.05、0.1、1 ng/mL的重组poIFN-α8蛋白对PRRSV的抗病毒活性,并检测重组poIFN-α8蛋白对下游干扰素刺激基因(ISG)Mx1、OAS1、ISG15的诱导激活作用。结果表明,成功构建了pCSMH-IFN-α8表达载体,实现了poIFN-α8在大肠杆菌中的包涵体表达,且重组poIFN-α8蛋白具有良好的反应原性;0.05 ng/mL的重组poIFN-α8蛋白可显著抑制PRRSV在PAM中的复制,poIFN-α8的抗病毒效果显著优于猪干扰素α2(poIFN-α2)、猪干扰素α5(poIFN-α5),且重组poIFN-α8能有效激活ISG的表达。综上,表达的重组poIFN-α8蛋白能有效抑制PRRSV的复制,且能激活ISG的表达。

小鼠精原干细胞体外分化中Stra8、mina53表达的研究

为检测Stra8、mina53在小鼠精原干细胞(mouse spermatogonial stem cells,mSSCs)体外分化中的表达,采用1)体外培养mSSCs并通过全反式视黄酸(ATRA,all-trans retinoic acid)进行诱导分化;2)通过间接免疫荧光反应鉴定mSSCs体外分化前后情况;3)通过RT-PCR检测mSSCs诱导分化前后(0h,2h,72h)Stra8、mina53mRNA的水平,初步了解Stra8、mina53的表达状况。结果表明:1)形态学变化显示ATRA使mSSCs向精母细胞方向发生了分化,并通过间接免疫荧光反应进行鉴定。2)Stra8在mSSCs诱导分化2h、72h的水平高于成年小鼠和未诱导分化的水平,其中72h时水平低于2h,各对照组间差异具有统计学意义。3)mina53的表达在诱导后增加,其水平高于成年小鼠和未诱导mSSCs的水平,但差异无统计学意义。这表明ATRA在体外使mSSCs向精母细胞方向分化,Stra8基因呈高表达,但mina53基因呈高表达不确定。

Shh和Fgf8介导的视黄酸对22q11.2微缺失综合征心肌细胞TBX1表达的影响

目的探讨Shh和Fgf8介导的视黄酸(RA)对22q11.2微缺失综合征中心肌细胞TBX1基因的调节机制。方法出生1～2 d SD乳鼠26只,分离培养乳鼠心肌细胞,48 h后用流式分选方法分选纯化心肌细胞,纯化的心肌细胞继续培养48 h。分为空白对照组;阴性对照组;处理1组:1×10-7mol/L RA;处理2组:3×10-7mol/L RA;处理3组:5×10-7mol/L RA。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测乳鼠心肌细胞Shh、Fgf8 mRNA和蛋白相对量表达的变化。结果Shh和Fgf8在乳鼠心肌细胞有少量的表达,给予RA刺激后,与空白对照组比较,3×10-7mol/L RA使细胞内Shh mRNA和蛋白水平分别增加1.51倍和1.10倍(t=11.328,15.598 Pa<0.05),5×10-7mol/LRA使细胞内Shh mRNA和蛋白水平分别增加2.21倍和2.38倍(t=13.761,18.982Pa<0.05);3×10-7mol/L RA使细胞内Fgf8 mRNA和蛋白水平分别增加2.50倍和0.80倍(t=14.368,24.226 Pa<0.05),而5×10-7mol/LRA使细胞内Fgf8 mRNA和蛋白水平分别增加3.48倍和2.04倍(t=23.926,26.364 Pa<0.05)。结论RA可以上调乳鼠心肌细胞Shh和Fgf8的表达,且呈剂量依赖效应。Shh和Fgf8参与了RA对心肌细胞TBX1的调节过程。

Stra8在精子发生中的研究进展

Stra8基因的表达具有发育阶段性,且仅表达于减数分裂前的生殖细胞,它在生殖细胞的胞质和胞核中进行穿梭。视黄酸是维生素A的一种代谢产物。视黄酸可促进生殖细胞中Stra8基因的表达。维生素A缺乏小鼠精子发生停滞,生殖细胞退化,雄性小鼠不能生育。目前对于Stra8表达调控的研究主要集中在其与视黄酸相互作用的机制,但Stra8在精子发生中的分子调控机制尚未完全阐明。

GM-CSF基因修饰肿瘤细胞疫苗治疗前后黑素瘤患者CD8^+T细胞的变化及其对预后的影响

目的:探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰的肿瘤细胞疫苗(GM-CSF modified tumor cell vaccine,GVAX)治疗前后黑素瘤患者外周血免疫指标的变化及其对预后的影响。方法:收集2007年10月至2012年12月期间于天津医科大学肿瘤医院接受GVAX治疗的56例黑素瘤患者,采用流式细胞技术检测患者治疗前后外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、调节性T细胞(Treg)、自然杀伤细胞(NK)及树突状细胞(DC1和DC2)的比例,分析治疗前后外周血各免疫细胞比例的变化,并探讨其与患者预后的关系。结果:GVAX治疗后患者外周血CD8+T细胞比例较前升高[(37.56±12.76)%vs(34.71±12.30)%,P=0.006],CD4+T细胞比例降低[(53.44±13.36)%vs(56.27±13.15)%,P=0.017],CD4+/CD8+比值降低[1.61(1.37)vs 1.75(0.71),P=0.009]。治疗后CD3+T、NK、Treg、DC1、DC2与治疗前的差异无统计学意义(P>0.05)。晚期患者GVAX治疗前外周血CD8+T细胞比例大于均值组与小于均值组相比,中位生存时间显著延长(29.16 vs 13.34个月,P=0.012)。结论:GVAX治疗黑素瘤可增强CD8+T细胞为主的抗肿瘤免疫应答,晚期患者外周血CD8+T细胞比例可作为预测GVAX疗效的指标,为判断预后起到一定的提示作用。

8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶在顺铂诱导的急性肾损伤中的作用和机制

目的:探讨在顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)中8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1)的作用及机制。方法:48只8~10周龄C57BL/6雄性小鼠构建动物模型。24只分为4组,每组6只,分别经腹注射顺铂干预0 h、24 h、48 h和72 h。剩余小鼠也随机分为4组,即生理盐水对照组、顺铂组、OGG1抑制剂组(Th5487组)和顺铂+Th5487组。分别在腹腔注射生理盐水或顺铂和Th5487。留取血液测定肌酐、尿素氮,取肾组织进行病理分析,检测肾组织8-氧代鸟嘌呤含量和超氧化物歧化酶活力,RT-qPCR测定mRNA水平,Western Blot验证OGG1和炎症蛋白表达情况。利用顺铂诱导小鼠肾小管上皮细胞建立体外模型,检测线粒体膜电位改变、活性氧生成情况和蛋白表达变化。结果:在顺铂诱导的AKI模型中,OGG1表达上调,环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)信号轴及炎症反应激活;Th5487可抑制顺铂诱导的组织损伤、cGAS-STING信号轴的激活及炎性反应;在体外,Th5487可减少顺铂诱导的细胞中ROS含量升高及线粒体膜去极化。结论:在顺铂诱导的AKI过程中,OGG1可通过cGAS-STING信号促进肾脏损伤及炎症反应。

血管内皮细胞在切应力刺激后Toll基因的表达变化

目的：本室先前的实验观察到原代培养的贴壁融合脐静脉内皮细胞层流刺激后，IL-8mRNA的增强表达和NF-κB的活化。本文探讨Toll蛋白在切应力诱导血管内皮细胞表达趋化细胞IL-8基因表达中的可能作用。方法：从正常对照和层流刺激后的原代培养的人脐静脉内皮细胞提取总RNA，根据TLR-2和TLR-4cDNA序列设计特异引物，

视黄酸激活基因Stra8对生殖细胞减数分裂起始的调节作用

Stra8(stimulated by retinoic acid gene8)是一种生殖细胞特异性表达并受视黄酸诱导的基因,它可有效促进生殖细胞启动减数分裂。Stra8是减数分裂起始的调节蛋白,参与了雌性胚胎期和雄性出生后生殖细胞的减数分裂起始过程。胚胎期睾丸减数分裂起始受阻是由于视黄酸降解酶CYP26B1和发育相关调节蛋白Nanos2抑制Stra8表达的结果。Stra8与生殖细胞减数分裂起始的研究有助于人们对精子生成和卵子发育的深入理解。

MUC1基因疫苗和GM-CSF对小鼠的细胞免疫和体液免疫应答

目的:观察MUC1基因疫苗和GM-CSF共免疫对小鼠特异性细胞免疫和抗体水平的影响.方法:采用股四头肌肌肉注射,将构建的MUC1基因疫苗pcDNA3.1-MUC1免疫雌性Balb/c小鼠,每3wk1次,共3次.MUC1基因加GM-CSF组于每次基因免疫后1,3,5d,皮下注射GM-CSF100μL.最后1次基因免疫后第3周接种表达MUC1的EMT6小鼠乳腺癌细胞.2wk后观察、记录肿瘤的生长情况.流式细胞仪检测外周血CD4+和CD8+淋巴细胞亚群的百分比和比值.ELISA方法检测小鼠血清MUC1特异性抗体的水平.4h51Cr释放法检测小鼠脾特异性CTL的杀伤活性.结果:淋巴细胞亚群:与pcDNA3.1对照组相比,MUC1基因疫苗预防组的CD8+T淋巴细胞升高,差异有统计学意义(P<0.01),CD4+T淋巴细胞升高,差别无统计学意义;加GM-CSF佐剂预防组与单独MUC1疫苗预防组相比,CD4+T淋巴细胞升高,差异有统计学意义(P<0.01),CD8+T淋巴细胞升高差别无统计学意义.小鼠血清MUC1抗体水平:与对照组相比,MUC1基因疫苗预防组抗体水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);加佐剂组与预防组相比,抗体水平升高但差别无统计学意义.在不同效靶比时,MUC1基因疫苗加GM-CSF组与单独MUC1基因免疫组相比较,特异性CTL对EMT6靶细胞的杀伤率差异显著(P<0.05).结论:MUC1基因疫苗可诱导小鼠产生特异性CD8+T淋巴细胞及体液免疫应答,GM-CSF对小鼠CD4+T淋巴细胞具有一定的调节作用.

Stra8基因启动子逆转录病毒包装细胞株的建立

目的建立小鼠Stra8基因启动子控制绿色荧光蛋白EGFP表达（Pstra8-EGFP）的逆转录病毒包装细胞株，以方便地将Pstra8-EGFP转导到目的细胞，为生殖细胞鉴定分选提供基础。方法PCR扩增小鼠基因组DNA中的Stra8基因启动子片段，构建Stra8基因启动子控制表达的EGFP报告基因逆转录病毒质粒。将质粒脂质体法转染PT67病毒包装细胞，G418抗性筛选后，梯度稀释法将包装细胞单克隆化并扩增成多个细胞株。以包装细胞培养上清液感染NIH3T3细胞的所形成的G418抗性阳性细胞数定义病毒滴度，确定高滴度病毒包装细胞株。通过染毒小鼠骨髓间充质干细胞（mouse bone marrow mesenchymal stemcells，MSCs）验证该细胞株的Pstras8-EGFP转导效果。结果所建立的病毒包装细胞株培养上清液滴度达到1．3×10^6 cfu／ml。MSC经包装细胞培养上清液感染后，在（retinoicacid，RA）诱导下能表达EGFP蛋白。结论成功构建了将Pstras．EGFP转导到目的细胞的PT67逆转录病毒包装细胞株。

维甲酸和Cyp26基因家族与生殖细胞分化

在哺乳动物胚胎期,成熟分裂首先在雌性生殖细胞启动,雄性生殖细胞则停滞于有丝分裂的G0/G1阶段。在小鼠的研究发现,成熟分裂启动时间很可能决定着生殖细胞的分化方向。另一方面,达到一定阈值浓度的维甲酸(RA)能够启动生殖细胞从有丝分裂到成熟分裂的过渡。体内RA的水平由其合成和降解速率调节,而Cyp26是调节体内RA水平最关键的酶。因此,这种由Cyp26调节的RA水平的变化可能从根本上调控着哺乳动物生殖细胞的分化方向(形成精原细胞或卵原细胞),最终影响性别的分化。本文主要综述RA、Cyp26基因家族在哺乳动物性腺分化过程中的作用,并探讨了低等脊椎动物特别是鱼类成熟分裂启动及生殖细胞分化的分子机制。

MiR-34c在奶山羊雄性生殖干细胞增殖分化中的作用

microRNA(miRNA)在奶山羊雄性生殖细胞和精子发生过程有重要的调控功能。为研究miR-34c对雄性生殖干细胞增殖与分化中的作用,本文利用视黄酸效应基因8(Stra8)在雄性生殖细胞中随年龄增长,以其表达量上调的表达特征为指针,使用实时定量PCR技术筛选分析miRNAs。结果发现,miR-34c与Stra8的表达规律基本一致。在无精症奶山羊的睾丸组织中,发现miR-34c在无精症奶山羊睾丸组织中表达缺失。利用miR-34c模拟物及抑制剂转染奶山羊雄性生殖干细胞,体外转染miR-34c模拟物及其抑制剂,发现miR-34c能够下调Rarg、Stra8与c-Myc基因的表达,减缓奶山羊雄性生殖干细胞的增殖。结果提示,miR-34c可能具有调控奶山羊雄性生殖干细胞的减数分裂的作用,同时抑制其增殖。