基于单细胞转录组学分析胰岛缺血性损伤分子机制及核心转录因子的鉴定

目的探讨胰岛移植损伤过程中的分子机制和细胞间相互作用。方法使用炎症因子处理的小鼠胰岛的单细胞转录组数据,基于Seurat包进行数据处理,并通过整合数据以去除批次效应。根据已知标志物对各个细胞亚群进行注释。基于CellChat包对炎症因子处理组中的细胞互作进行分析,基于细胞表面受体和配体的表达情况推断细胞间的相互作用。使用基因集富集分析明确炎症因子处理后β细胞中富集的生物过程。最后鉴定出差异表达的转录因子,并使用供者胰岛缺血性损伤的微阵列数据集以及蛋白质印迹法进行验证。结果在小鼠胰岛中共发现了7个不同的细胞亚群,其中β细胞占据的比例最大。细胞互作网络分析结果显示,导管细胞与其他细胞之间的相互作用数量和强度最高。基因集富集分析结果显示,炎症因子处理后,β细胞中的免疫反应正向富集,而肽类激素、胆汁酸代谢以及离子稳态下调。在小鼠的单细胞转录和供者胰岛缺血性损伤的微阵列数据集中鉴定出共同的差异转录因子早期生长反应因子1(EGR1)、核因子-κB抑制因子α(NFKBIA)、转录激活因子3(ATF3)。其中,NFKBIA、ATF3表达上调,EGR1表达下调。EGR1蛋白表达量在冷缺血24 h、48 h及72 h后下调。结论EGR1为与胰岛冷缺血密切相关的转录因子,未来的研究应重点探讨EGR1及其下游靶基因的具体机制,以期为胰岛移植的临床治疗提供更有效的策略。

转录因子κB和早期生长反应因子1在急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型中的表达

目的研究转录因子核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和早期生长反应因子1(early growthresponse factor-1,Egr-1)在急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型中的表达及意义。方法将α-异硫氰酸萘酯(ANIT)按50 mg/kg 一次灌胃大鼠,建立急性肝内胆汁淤积性肝损伤的动物模型,免疫组织化学法和实时荧光定量 PCR 分别检测灌胃后24、48、72 h 肝组织中 NF-κB p65蛋白表达和 Egr-1 mRNA 表达量,全自动生化分析仪检测血清总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)。结果模型组24、48、72 h 肝组织 Egr-1 mRNA 表达量分别为(12.73±3.02)×10^(-2)、(8.19±2.29)×10^(-2)、(5.79±0.78)×10^(-2),24、48 h 均高于对照组(P 均<0.05),72 h 与对照组差异无统计学意义(P>0.05);模型组24、48、72 h肝组织 NF-κB p65核表达阳性细胞率分别为48.3%、26.5%、2.7%,其中24、48 h 均高于对照组(P 均<0.05),72 h 与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。模型组24、48 h NF-κB p65核表达阳性细胞分级分别与同一时间点的血清 TB、DB、ALT 呈正相关(P 均<0.05);模型组24、48 hEgr-1 mRNA 表达量分别与同一时间点的血清TB、DB、AIT、GGT 呈正相关(P 均<0.05);模型组72 h 肝组织 NF-κB p65、Egr-1 mRNA 表达量与72 h 时血清 TB、DB、ALT、GGT 无相关关系(P 均>0.05);模型组24、48 h NF-κB p65核表达阳性细胞分级与同一时间点的血清 GGT 亦无相关关系(P 均>0.05);模型组24、48 h 肝组织 Egr-1 mRNA 表达量及 NF-κB p65核表达阳性细胞分级均与同一时间点肝组织病理损伤程度分级呈正相关(P 均<0.05);模型组72 h 肝组织 Egr-1 mR-NA 表达量及 NF-κB p65核表达阳性细胞分级均与同一时间点肝组织病理损伤程度分级无相关关系(P 均>0.05)。结论 NF-κB和 Egr-1在肝内胆汁淤积性肝损伤肝组织中表达增高,与肝损伤程度相关,参予了肝内胆汁淤积性肝损伤的病理过程。[临床儿科杂志,2008,26(10):879-884]

结肠癌相关转录因子1表达在结直肠癌早期筛查及预后评估中的作用

目的 :分析结肠癌相关转录因子1(CCAT-1)m RNA在结直肠癌患者外周血中的表达水平与临床病理特征及预后生存的关联,探讨CCAT-1在结直肠癌早期筛查及病程预后评估中的作用。方法:采用实时定量PCR法(q PCR)检测结直肠癌(60例)、结直肠腺瘤(30例)及健康志愿者(30例)外周血中CCAT-1 m RNA表达,采用ROC曲线判断CCAT-1对结直肠癌的诊断价值,计算Youden指数确定CCAT-1对结直肠癌的诊断阈值;采用双变量相关(bivariate correlation)Pearson检验分析CCAT-1m RNA表达水平与结直肠癌患者临床病理特征;采用Kaplan-Meier生存分析(Log-rank检验)分析CCAT-1 m RNA表达与结直肠癌患者3年生存率的相关性,绘制生存曲线。结果:结直肠癌患者外周血CCAT-1 m RNA水平相对于结直肠腺瘤患者(P<0.01)、健康志愿者(P<0.01)显著高表达,CCAT-1 m RNA在健康志愿者、结直肠腺瘤及结直肠癌患者外周血中的表达量呈逐渐递增趋势;结直肠癌患者外周血CCAT-1 m RNA表达量与肿瘤直径(P<0.05)、分化程度(P<0.01)、原发灶浸润深度(P<0.01)、淋巴结转移数(P<0.01)、远处转移(P<0.05)及TNM分期(P<0.05)呈显著正相关,与3年生存率呈负相关(P<0.05);CCAT-1 m RNA高表达组生存时间显著低于低表达组(P<0.01)。结论:CCAT-1可作为一种有价值的结直肠癌早期筛查及预后评估的标志物。

早期生长转录因子-1表达水平对食管癌三维适形放疗临床疗效及预后的影响

目的探讨早期生长转录因子-1(EGR-1)表达水平对食管癌三维适形放疗临床疗效及预后的影响。方法 64例食管癌患者随机分为常规放疗组和三维适形放疗组,每组32例。比较两组患者的近远期临床疗效,并比较不同临床疗效和生存时间患者的EGR-1水平。结果三维适形放疗组近期疗效好于常规放疗组(P<0.05);两组患者不良反应发生率、平均生存时间、1年、2年生存率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后近期完全缓解和部分缓解患者的EGR-1水平明显低于治疗前(P<0.05),而且,三维适形放疗组患者低于常规放疗组(P<0.05);两组中长期生存组患者血EGR-1水平均低于短期生存组(P<0.05)。结论三维适形放疗治疗食管癌近期临床疗效好,EGR-1表达水平可能与食管癌的疗效和预后有关联。

早期胃癌组织中TK1、STAT1、B7-H4水平变化与ESD手术预后的相关性分析

目的:探究早期胃癌组织中细胞质胸苷激酶(TK1)、信号传导及转录激活因子1(STAT1)、B7-H4表达情况及与内镜黏膜下剥离术(ESD)手术预后的相关性。方法:选取2017年1月—2019年1月我院120例行ESD治疗的早期胃癌患者,术中均取癌组织和癌旁正常组织(距癌旁>5cm)标本。采用免疫组化法检测癌组织、癌旁正常组织TK1、STAT1、B7-H4表达情况,并比较不同临床特征患者癌组织TK1、STAT1、B7-H4表达情况,分析癌组织TK1、STAT1、B7-H4表达情况与早期胃癌临床特征的关系。ESD术后随访1年,统计术后1年复发/转移情况,比较复发/转移与未复发/转移患者癌组织TK1、STAT1、B7-H4表达情况,通过交互作用分析癌组织TK1、STAT1、B7-H4表达情况对早期胃癌ESD术后复发/转移的作用,并分析其预测早期胃癌ESD术后复发/转移的价值。结果:早期胃癌患者癌组织中TK1、B7-H4阳性率均高于癌旁正常组织,STAT1阳性率低于癌旁正常组织(P<0.05)。不同肿瘤大小、分化程度、浸润深度患者癌组织TK1、STAT1、B7-H4阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织TK1、B7-H4阳性率与早期胃癌肿瘤大小、浸润深度呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05);STAT1阳性率与早期胃癌肿瘤大小、浸润深度呈负相关,与分化程度呈正相关(P<0.05)。复发/转移患者癌组织TK1阳性率、B7-H4阳性率高于未复发/转移患者,STAT1阳性率低于未复发/转移患者(P<0.05)。在早期胃癌ESD术后复发/转移中癌组织TK1阳性与STAT1阴性、TK1阳性与B7-H4阳性、STAT1阴性与B7-H4阳性呈正向交互作用(P<0.05)。癌组织TK1、STAT1、B7-H4阳性单独预测早期胃癌ESD术后复发/转移的曲线下面积(AUC)分别为0.879、0.702、0.750,联合预测的AUC最大,为0.914,预测敏感度、特异度分别为94.44%、88.42%。结论:早期胃癌患者癌组织中TK1、B7-H4表达明显升高,STAT1表达降低,在预测ESD术后复发/转移方面具有较高预测效能。

外周血中核转录因子红系2相关因子2对子宫内膜癌的诊断效能及其与淋巴结转移的关系

目的探究外周血核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)及其靶基因血红素加氧酶-1(HO-1)对子宫内膜癌(EC)的诊断效能及其与淋巴结转移的关系。方法选取2020年6月至2022年5月第二军医大学附属第三医院收治的80例EC患者与50例子宫良性病变患者分别作为EC组和子宫良性病变组,同时纳入体检中心50例无生殖系统疾病的健康女性作为对照组。检测3组外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平及血清糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)水平,并分析上述指标在不同国际妇产科联盟(FIGO)病理分期EC患者中的变化。利用Pearson相关分析对外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平与血清CA125、HE4水平进行关联探讨。采用受试者工作者特征(ROC)曲线分析外周血Nrf2、HO-1 mRNA单项及联合预测EC发生淋巴结转移的效能。结果EC组血清CA125、HE4水平均高于子宫良性病变组与对照组,且子宫良性病变组均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);EC组外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平均低于子宫良性病变组与对照组,且子宫良性病变组均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析发现,外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平与血清CA125、HE4水平均呈负相关(P<0.05),血清CA125水平与HE4水平呈正相关(P<0.05)。EC组血清CA125、HE4水平随FIGO病理分期增加均呈升高趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。EC组外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平随FIGO病理分期增加均呈降低趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平预测EC发生淋巴结转移的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.695、0.667,当两项联合诊断时AUC、灵敏度最高,分别为0.839、81.01%,均高于单独指标诊断价值,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论检测外周血Nrf2、HO-1 mRNA表达水平可辅助诊断EC,且Nrf2、HO-1 mRNA表达水平在FIGO病理分期中存在差异,能为判断肿瘤淋巴结转移及制定治疗方案提供参考依据。

大鼠牙胚发育早期核心结合因子1表达的时空特异性

目的:探讨采用成骨细胞特异性转录因子核心结合因子1cDNA探针对大鼠不同时期牙胚进行原位杂交实验,以及其在牙胚发育过程中的表达。方法:实验于2003-05/08在北京军事医学科学院组织工程研究中心实验室完成。取SD孕期大鼠12只,利用核心结合因子1cDNA克隆产物,自行制备核心结合因子1cDNA探针,并对同笼后11d(蕾状期)、14d(帽状期)、17d(钟状早期)及出生后1d和9d(钟状晚期)4个时期的大鼠牙胚进行原位杂交实验,观察核心结合因子1在大鼠牙胚不同时期中的表达。结果:①大鼠牙胚蕾状期原位杂交可见明显阳性表达结果,其表达部位主要集中于牙胚及牙蕾顶部邻近的外胚间充质。②帽状期及钟状早期牙乳头、成牙本质细胞及成釉细胞均呈阳性表达。③钟状晚期表现于成牙本质细胞的表达明显下调,而成釉细胞呈阳性表达。结论:核心结合因子1在牙胚不同时期的表达有时空特异性,在大鼠牙胚发育早期即蕾状期的强阳性表达,表明核心结合因子1参与了牙胚的早期发育。

全反视黄酸调节心脏特异转录因子蛋白表达及其机制

目的探讨全反视黄酸(atRA)对心脏特异转录因子(dHAND)蛋白表达的调节作用和分子机制。方法用atRA处理H9c2细胞,然后用Western blot分析和免疫组化方法来检测dHAND表达。结果在H9c2细胞中,atRA可抑制dHAND蛋白表达,这一抑制作用具有时间和剂量依赖性。Western blot分析和免疫组化检测均证实,5μnol／L 的atRA处理H9c2细胞2h可以显著降低dHAND和ET-1蛋白的表达。用BQ-123阻断ET -1／ETAR信号通路后,dHAND表达上调。结论在H9c2细胞中,atRA通过ET-1／ ETAR信号传导通路来抑制dHAND表达。

肠内给予精氨酸能促进肠缺血-再灌注时早期促炎转录因子的表达

美国学者最近报道了肠内给予精氨酸和谷氨酰胺对肠缺血-再灌注损伤时早期致炎因子的影响。研究人员将肠系膜上动脉夹闭60min后松夹6h，在夹闭后立即向空肠袋内注满精氨酸或谷氨酰胺(60mmol／L)，并设对照。应用电泳法对空肠组织核转录因子-κB(NF—κB)以及激活蛋白-1(AP-1)进行分析，并检测AP-1家族中c-jun和c-fos的基因表达。结果显示，NF—κB和AP-1在肠缺血-再灌注过程中均被活化。给予精氨酸的动物AP-1表达显著高于给予谷氨酰胺者，

虎杖苷对严重烧伤小鼠早期肠损伤及SIRT1/NF-κB通路的影响

目的:研究虎杖苷(PD)对严重烧伤小鼠早期肠损伤及沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法:建立严重烧伤小鼠模型,实验分为假烧伤组、烧伤组、低、中、高剂量PD组、谷氨酰胺组。观察各组小鼠一般情况,测定各组小鼠回肠黏液含量,回肠组织病理学观察,蛋白印迹法(WB)测定各组小鼠回肠组织中SIRT1、NF-κB p65表达水平,酶联免疫法(ELISA)检测各组小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-10、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(iNOS)、丙二醛(MDA)表达水平。结果:造模后可见小鼠烧伤部位有渗血、感染、水肿发生。与假烧伤组相比,烧伤组回肠黏膜水肿、充血,大量杯状细胞分泌,淋巴细胞浸润,绒毛断裂坏死,回肠黏液含量、SIRT1、IL-10水平显著降低,NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、NO、iNOS、MDA水平显著升高(P<0.05);与烧伤组相比,低、中、高剂量PD给药治疗后,小鼠烧伤创面有褐色痂壳形成,创面皱缩,随后出现创面上皮爬行、干燥,高剂量组治疗结束后痂壳脱离,创面平整、红润,基本愈合,回肠黏液含量、SIRT1、IL-10水平显著升高,NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、NO、iNOS、MDA水平显著降低(P<0.05)。谷氨酰胺组症状缓解情况与高剂量组相当。结论:PD可能通过抑制炎症和氧化应激反应以缓解严重烧伤小鼠早期肠损伤症状,可能与SIRT1/NF-κB通路相关。

膜型IL-15联合RAE-1ε增强小鼠NK细胞的杀伤活性

目的:探讨视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE-1ε)和膜型IL-15对小鼠NK细胞杀伤功能的影响。方法:前期研究以小鼠原B淋巴细胞株BaF3为基础构建了3株BaF3工程细胞株,即表达膜型IL-15的BaF3/mb15细胞、表达RAE-1ε的BaF3/RAE细胞和同时表达膜型IL-15和RAE-1ε的BaF3/mb15/RAE细胞。将γ射线灭活后的3株BaF3工程细胞株作为刺激细胞,分别刺激小鼠NK细胞。流式细胞术检测刺激后NK细胞表面分子的表达,胞内染色法检测NK细胞穿孔素和颗粒酶B的分泌,流式细胞术检测NK细胞对小鼠淋巴瘤YAC1细胞的杀伤活性。结果:与BaF3/mb15和BaF3/RAE细胞相比,BaF3/mb15/RAE细胞可有效上调NK细胞表面CD25、CD44、FasL和CD107a的表达,但对穿孔素和颗粒酶B的分泌没有明显刺激作用。当效靶比为20:1时,BaF3/mb15、BaF3/RAE和BaF3/mb15/RAE细胞刺激后NK细胞对靶细胞YAC1的杀伤率分别为(39.7±2.9)%、(45.3±2.3)%和(59.0±6.9)%,均高于BaF3组的(28.3±1.5)%(P<0.01),且BaF3/mb15/RAE组高于BaF3/mb15和BaF3/RAE组(P<0.05)。结论:膜型IL-15联合RAE-1ε可促进NK细胞活化并增强NK细胞的杀伤活性。

NKG2D配体RAE1ε对乳腺癌细胞4T1衍生MDSC功能的影响

目的:探讨表达小鼠NKG2D配体之一视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE1ε)的原B淋巴细胞Ba F3对乳腺癌细胞株4T1成瘤小鼠来源的髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)功能的影响。方法:以小鼠原B淋巴细胞株Ba F3为基础,构建表达RAE1ε的Ba F3-RAE1ε细胞以及表达空质粒的Ba F3-mock对照细胞。通过4T1原位肿瘤模型诱导产生CD11b+Gr-1+MDSC,将Ba F3-mock细胞和Ba F3-RAE1ε细胞作为刺激细胞,分别与脾MDSC共培养,流式细胞术检测MDSC表面CD40、CD80、F4/80、CD11c的表达和MDSC内活性氧(ROS)的水平;ELISA法检测共培养上清液IL-10、IL-4和IFN-γ的含量;Griess法检测共培养上清液一氮化氮(NO)的浓度。磁珠分选共培养体系中的MDSC,检测裂解后精氨酸酶的活性;另外,将分选后的MDSC与抗CD3/抗CD28抗体活化的脾细胞共培养,CFSE法检测活化的CD3+CD8+T细胞增殖情况。结果:成功获得4T1原位肿瘤模型来源的小鼠脾MDSC。与Ba F3-mock细胞相比,Ba F3-RAE1ε细胞刺激对MDSC分泌IL-4、IFN-γ、IL-10和NO的水平没有明显影响(P>0.05);对MDSC表达CD40、CD80、F4/80、CD11c和ROS也没有显著影响(P>0.05)。与Ba F3-mock细胞相比,Ba F3-RAE1ε细胞刺激显著提高MDSC的精氨酸酶活性(156.166±1.209 vs 110.135±7.356,P<0.01),并明显增强MDSC对CD8+T细胞增殖的抑制作用。结论:RAE-1ε在体外增强4T1成瘤小鼠来源的MDSC的抑制功能。

转基因细胞株BaF3-mb15-RAE对IKDC功能分子表达的影响

目的:探讨单独或共同表达视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE1ε)和膜型IL-15的B淋巴细胞BaF3对小鼠产生IFN的杀伤性DC(IFN producing killer DC,IKDC)功能分子表达的影响。方法:以小鼠原B淋巴细胞株BaF3为基础,分别构建表达膜型IL-15的BaF3-mb15细胞和表达RAE1ε的BaF3-RAE细胞及同时表达膜型IL-15和RAE1ε的BaF3-mb15-RAE细胞。通过体外细胞因子诱导产生骨髓来源的小鼠成熟DC,将丝裂霉素灭活后的3株BaF3工程细胞株作为刺激细胞,分别与DC共培养,流式细胞术检测其对DC中CD11clowB220+NK1.1+IKDC比例和DC表面CD40、CD80表达的影响。流式细胞术分选DC中的IKDC,将丝裂霉素灭活后的3株BaF3工程细胞株与其共培养24 h,流式细胞术检测共培养对IKDC表面CD40、CD80、CD86、NKG2D、MHCⅡ类分子、CD107a和FasL表达的影响。结果:成功获得骨髓来源的小鼠成熟DC。与BaF3-mb15细胞和BaF3-RAE细胞相比,BaF3-mb15-RAE细胞刺激显著提高DC中IKDC比例[(50.0±5.6)%vs(30.3±8.2)%、(36.0±4.6)%,均P<0.05],并且有效刺激IKDC表面CD40(180.1±28.2 vs 44.7±7.8、36.0±3.1,P<0.01)和FasL(P<0.05)表达上调;与BaF3细胞和BaF3-mb15细胞相比,BaF3-mb15-RAE细胞有效刺激IKDC表面CD80(P<0.05)表达上调,而3株BaF3工程细胞刺激均不影响DC表面CD40、CD80的表达(P>0.05);同时,3株BaF3工程细胞对IKDC表面CD86、MHCⅡ类分子、NKG2D和CD107a的表达也没有显著影响(P>0.05)。结论:RAE-1ε和膜型IL-15协同作用可促进IKDC增殖并诱导其高表达CD40和FasL。

转基因细胞株BaF3-RAE1ε诱导产生的MDSC的杀伤功能及对NK细胞功能的影响

目的:探讨表达NKG2D配体视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE1ε)的原B细胞株BaF3诱导产生的髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)的杀伤功能及对NK细胞功能的影响。方法:以小鼠原B细胞株BaF3为基础,构建表达空质粒的BaF3-mock对照细胞和表达RAE1ε的BaF3-RAE1ε细胞。将BaF3-mock和BaF3-RAE1ε细胞分别注射小鼠后诱导产生CD11b^+Gr-1^+MDSC,磁珠分选MDSC后与NK细胞共培养后,流式细胞术检测其对NK细胞表面NKG2D和CD107a表达的影响,ELISA法检测其对NK细胞分泌IFN-γ的影响。将MDSC分别与BaF3-mock和BaF3-RAE1ε细胞共培养后,乳酸脱氢酶释放法检测其对靶细胞BaF3-mock和BaF3-RAE1ε细胞的杀伤作用。结果:与BaF3-mock细胞相比,BaF3-RAE1ε细胞诱导产生的MDSC对NK细胞表面NKG2D和CD107a的表达没有明显影响(P>0.05),对NK细胞分泌IFN-γ的水平也没有显著影响(P>0.05)。与BaF3-mock细胞相比,BaF3-RAE1ε细胞诱导产生的MDSC对靶细胞BaF3-mock和BaF3-RAE1ε的杀伤作用明显增强[(1.99±0.39)%vs(8.63±1.45)%、(5.09±0.67)%vs(17.33±0.41)%,P<0.01]。[(1.20±0.09)%vs(10.31±0.69)%、(5.52±1.64)%vs(18.91±3.04)%,P<0.01]。结论:RAE-1ε增强MDSC对靶细胞的杀伤功能。

参附注射液对失血性休克大鼠肺损伤的影响

目的观察参附注射液对大鼠失血性休克(HS)致肺损伤的影响并探讨潜在机制。方法选择SPF级健康雄性SD大鼠36只,16~17周龄,体重400~600 g。采用随机数字表法将大鼠分为三组:假手术组(SH组)、失血性休克组(HS组)和参附注射液组(SF组),每组12只。SH组麻醉后仅分离出右股静脉和股动脉,不行动静脉置管,HS组和SF组制备HS大鼠模型。HS组经静脉导管进行液体复苏,复苏液为所失自体血加1.5倍失血量的复方氯化钠注射液与生理盐水10 ml/kg,SF组复苏液为所失自体血加1.5倍失血量的复方氯化钠注射液与参附注射液10 ml/kg,灌注时间约60 min。于术后24、48 h随机处死6只大鼠,取肺组织检测湿重与干重比(W/D),采用ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)浓度,采用PCR法检测肺组织视黄酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA表达量,采用Western blot法检测RORγt、Foxp3、HIF-1α、水通道蛋白1(AQP1)和AQP5蛋白含量,肺组织行HE染色后在光镜下观察病理学改变并行肺损伤评分。结果与术后24 h比较,术后48 h SF组肺组织W/D、IL-6和IL-17浓度、RORγt和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分均明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β浓度、Foxp3 mRNA表达量及蛋白含量、AQP1蛋白含量均明显升高(P<0.05)。与SH组比较,术后24、48 h HS组和SF组W/D、IL-6、IL-17、IL-10和TGF-β浓度、RORγt、Foxp3和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分均明显升高(P<0.05),AQP1、AQP5蛋白含量明显降低(P<0.05),光镜下可见肺泡结构破坏,肺泡间质充满大量水肿液,其间浸润着大量炎性细胞。与HS组比较,术后24、48 h SF组W/D、IL-6和IL-17浓度、RORγt和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β浓度、Foxp3 mRNA表达量及蛋白含量、AQP1和AQP5蛋白含量均明显升高(P<0.05),光镜下可见肺泡结构紊乱改善,水肿程度减轻,炎性细胞数量减少。结论参附注射液可调节促炎因子IL-6、IL-17与抗炎因子IL-10、TGF-β平衡,升高肺组织AQP1、AQP5蛋白含量,降低肺组织W/D和肺损伤评分,减轻HS大鼠肺损伤,机制可能与调节HIF-1α-RORγt/Foxp3平衡有关。

严重烧伤早期肠黏膜组织热休克蛋白70的表达规律

目的探讨大鼠烧伤后早期肠黏膜组织热休克蛋白70(HSP70)的表达变化规律及其意义。方法采用大鼠烫伤模型,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Westernblot)及免疫组化等方法,检测伤后3、6、12、24和48h不同时间点肠黏膜组织内HSP70及热休克因子1(HSF1)的表达分布情况。结果烫伤后3h肠黏膜组织内HSP70mRNA及蛋白表达均显著增加,分别在伤后6h和12h达高峰,伤后48h仍高于正常对照组(P均<0.01);伤后3h大鼠肠黏膜组织HSF1出现一过性降低,伤后6h其表达显著高于正常对照组,并呈逐渐增加的趋势直至持续到伤后48h(P均<0.01)。结论严重烧伤早期肠黏膜组织HSP70及HSF1表达均显著增加,提示严重烧伤早期即可引起肠黏膜组织细胞的应激反应,可能与细胞的自我保护机制启动有关。

胃癌组织中SnoN、Egr3和SFRP1的表达情况及临床意义

目的探讨核转录共抑制因子Sno N、早期生长反应基因3(Egr3)和分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在胃癌组织中的表达水平,分析三者与胃癌临床病理特征的关系。方法收集75例胃癌组织及62例癌旁组织标本,采用免疫组化Elivision法检测以上组织石蜡切片中Sno N、Egr3及SFRP1的表达情况,分析3种蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织中Sno N、SFRP1的高表达率为45.3%(34/75)和38.7%(29/75),均低于癌旁组织的62.9%(39/62)和58.1%(36/62);而Egr3的高表达率为69.3%(52/75),高于癌旁组织的38.7%(24/62)。以上差异均有统计学意义(P<0.05)。Sno N、Egr3和SFRP1的表达均与临床分期、分化程度有关,Sno N表达还与年龄、浸润深度及淋巴结转移有关,SFRP1表达与年龄、肿瘤大小及浸润深度有关。Sno N、SFRP1与Egr3的表达均呈负相关,相关系数依次为r=-0.324、-0.244(P均<0.05);Sno N与SFRP1的表达呈正相关(r=0.487,P<0.001)。结论胃癌组织中Sno N、SFRP1呈低表达,而Egr3呈高表达,三者表达均与临床分期、分化程度有关,提示三者在胃癌发生、发展中有重要意义,可用于辅助胃癌的诊断和病情评估。

幼年大鼠阿霉素肾病早期肾组织核转录因子κB与血管紧张素Ⅱ1型受体表达的相关性及干预治疗

目的 探讨阿霉素肾病幼年大鼠肾损伤早期 ,肾组织血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1)与核转录因子 (NF)κB(P65/Rel A)表达的趋势、相关性及其潜在的病理意义 ,及给予血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利和血管紧张素受体阻断剂氯沙坦的干预影响。方法 以阿霉素肾病幼年大鼠为实验性肾病模型 ,于肾病早期第 1、2、3周观察大鼠蛋白尿、血生化各指标的变化。用免疫组化方法检测大鼠肾组织AT1蛋白表达 ,用原位杂交方法检测大鼠肾组织P65/Rel AmRNA表达的情况 ,并从时相和组织定位表达的趋势上评价AT1和P65/Rel A表达的相关性。结果 ( 1)阿霉素注射后第 1周大鼠即出现明显蛋白尿 ,于第 3周即达大量蛋白尿程度 ( 12 3 2± 7 7)mg/ 2 4h ,同时血生化各指标趋于增高。肾小管中可见大量蛋白管型 ,肾间质中可见大量炎性细胞浸润。 ( 2 )肾小管间质区AT1蛋白和P65/Rel AmRNA表达趋势明显上调 ,第 1、2、3周AT1组化半定量分别为 ( 19 8± 1 1) %、( 2 5 0±2 6 ) %、( 37 1± 1 0 ) % ,假手术组 :( 10 3± 0 8) %、( 10 4± 1 6 ) %、( 10 2± 1 5 ) % ,AT1蛋白主要分布于各级肾小管上皮细胞胞浆和核膜 ,P65/Rel AmRNA表达于小管上皮细胞胞浆 ,随病变的进展 ,其核转位趋势明显增加 ,阳染信号由胞浆转至细胞核 。

KLF6与早期肝纤维化

Kruppel样因子6（KLF6）是一种核转录调控因子，也称Zf9（zinc finger factor 9）或CPBP（core promoter-binding protein），可以特异性结合靶基因启动子区域的GC盒、CACCC盒等核心元件而发挥生物学效应。近年来国外研究表明：在活化的肝星状细胞（HSC）中，可见KLF6的表达，KLF6可通过调节TGFβ1及Ⅰ型TGFβ、Ⅱ型TGFβ受体、尿激酶型纤维蛋白酶原激活剂、α1（1）型胶原的表达，在肝纤维化过程中发挥其作用，现就KLF6与早期肝纤维化的关系综述如下。