人胎盘间充质干细胞对呼吸道合胞病毒致毛细支气管炎大鼠肺组织视黄酸受体相关孤核受体γt基因的调控及意义

目的研究人胎盘间充质干细胞（hpMSCs）对呼吸道合胞病毒（RSV）致毛细支气管炎大鼠肺组织中视黄酸受体相关孤核受体γt（RORγt）的调控及其意义。方法将36只sD幼鼠随机分为正常对照组、RSV致毛细支气管炎组（RSV组）和hpMSCs组，每组12只。RSV组和hpMSCs组均采用RSV滴鼻法建立毛细支气管炎动物模型，hpMSCs组接种病毒后向大鼠尾静脉内注射hpMSCs进行干细胞移植治疗，正常对照组不制作模型。观察3组肺组织病理学变化；应用酶联免疫吸附试验检测血浆白细胞介素17（IL-17）、IL-23的含量；采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组外周血单个核细胞（PBMC）及肺组织中RORγtmRNA的水平；采用蛋白质印迹法检测3组肺组织中RORγt蛋白的表达。结果RSV组大鼠肺组织肺间质炎症明显，肺泡间隔增宽，肺泡腔变小，有大量嗜酸粒细胞、淋巴细胞浸润；与RSV组相比，hpMSCs组肺间质炎症明显减轻，肺泡腔相对增大，炎性细胞浸润减少；正常对照组大鼠肺组织无炎性改变。RSV组血浆IL-17、IL-23含量高于正常对照组[（56±6）ng／L比（27±4）ng／L、（61±5）ng／L比（19±3）ng／L]（P〈0．05）；hpMSCs组IL-17、IL-23含量[（30±4）ng／L、（40±6）ng／L]低于RSV组（P〈0．05）。RSV组大鼠PBMC及肺组织中RORTγt mRNA表达水平均高于正常对照组（PBMC：11．4±1．1比1．0±0．0，肺组织：8．1±0．7比1．0±0．0）（P〈0．05）；hpMSCs组PBMC及肺组织中RORγtmRNA表达水平（PBMC：4．4±0．7．肺组织：3．4±0．5）均低于RSV组（均P〈0．05）。RSV组肺组织中RORγt蛋白的表达水平高于正常对照组（1．26±0．12比0．72±0．12）（P〈0．05）；hpMSCs组肺组织中RORγt蛋白表达水平（0．88±0．14）低于RSV组（P〈0．05）。结论hpMSCs可以下调RSV致毛细支气管炎大鼠肺组织中特异性转录因子RORγt及相关细胞因子的表达水平，对减轻气道炎症有重要意义。

急性缺血性脑卒中患者血清salusin-β、RORγt水平与病情、短期预后的关系

目的:探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清salusin-β、视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)水平与病情、短期预后的关系。方法:选取AIS患者112例,根据美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIH stroke scale,NIHSS)评分将AIS患者分为轻度组(NIHSS<5分,n=40)、中度组(NIHSS为5~20分,n=54)、重度组(NIHSS>20分,n=18)。采用酶联免疫吸附法检测血清salusin-β、RORγt水平。出院后连续随访3个月,根据改良Rankin量表(modified Rankin scale,m RS)评分将AIS患者分为预后良好组(mRS评分<3分,n=83)、预后不良组(mRS评分≥3分,n=29)。采用Pearson相关分析探讨血清salusin-β、RORγt与NIHSS评分关系,采用受试者工作特性(ROC)曲线评估血清salusin-β、RORγt对AIS患者预后的预测价值,采用多因素Logistic回归分析AIS患者预后的影响因素。结果:随着病情加重,AIS患者血清salusin-β、RORγt水平逐渐升高(轻度组<中度组<重度组)(P<0.05)。AIS患者的血清salusin-β、RORγt与NIHSS评分均呈正相关(r=0.603,P<0.001;r=0.541,P<0.001)。预后良好组的血清salusin-β、RORγt低于预后不良组(P<0.05)。血清salusin-β、RORγt预测AIS患者预后的AUC(95%CI)分别为0.772(0.711~0.823)、0.848(0.807~0.889),截点值分别为5.74 nmol/L、98.29 pg/mL,特异度分别为53.01%、65.06%,灵敏度分别为93.10%、93.10%,二者联合检测的AUC(95%CI)为0.912(0.871~0.953),特异度为85.54%,灵敏度为86.21%。预后良好组年龄、高血压、糖尿病、发病至入院时间、入院NIHSS评分、WBC、CRP与预后不良组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄≥60岁(OR=2.280,95%CI 1.562~3.328)、入院NIHSS评分>20分(OR=2.088,95%CI 1.464~2.977)、salusin-β≥5.74 nmol/L(OR=2.654,95%CI 1.745~4.037)、RORγt≥98.29 pg/mL(OR=3.031,95%CI 1.943~4.730)是AIS患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论:血清salusin-β、RORγt在急性缺血性脑卒中患者中随病情严重程度增加而上升,且与患者预后密切有关。

Th17细胞分化和功能调控研究的新进展

辅助性T细胞家族新成员Th17细胞亚群在机体促炎症反应机制中发挥重要功能,尤其是促进多种自身免疫疾病发病的重要效应细胞;因此该细胞亚群的分化和免疫功能调控研究具有重要的基础和临床医学价值。本文就影响Th17细胞分化的细胞因子、转录因子、芳香烃受体、视黄酸和溴氯哌喹酮等的最新进展进行了简要综述,以期加深对Th17细胞分化和免疫功能调控机制的了解,拓宽进一步深入研究的视野和思路。

中药苦参水提取物抑制Th17细胞分化的研究

目的探讨苦参水提取物(Sophora flavescens aqueous extract,SFAE)对Th17细胞分化的影响。方法通过体外分离豚鼠淋巴结获取原代淋巴细胞,采用磁珠分选技术获得初始CD4^+T细胞。采用CCK-8法筛选SFAE对T细胞活力的最佳抑制浓度。通过白细胞介素-6(IL-6)和转化生长因子-β(TGF-β)诱导建立初始CD4^+T细胞向Th17细胞分化的细胞模型,并以SFAE进行干预;采用流式细胞仪检测各组Th17细胞比例,采用qRT-PCR及Western Blot法检测各组细胞中视黄酸相关的孤儿受体γt(RORγt)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、白细胞介素-17A(IL-17A)和白细胞介素-17F(IL-17F)的mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组比较,SFAE浓度在0.01 mg·mL^-1时对初始CD4^+T细胞的活力有抑制作用(P<0.01),选择该浓度作为后续实验浓度。与对照组比较,模型组能明显上调CD4^+IL-17A+T细胞的比例(P<0.001),上调RORγt、STAT3、IL-17A、IL-17F mRNA及蛋白的表达(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,SFAE干预后模型处理组的CD4^+IL-17A+T细胞比例明显下调(P<0.05),STAT3、RORγt、IL-17A、IL-17F mRNA及蛋白表达水平均明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论SFAE能够抑制Th17细胞分化,降低Th17细胞比例,其作用机制可能是通过抑制转录因子RORγt及STAT3的活性,降低IL-17A、IL-17F的表达。

RORγt mRNA、NF-κB、IL-10的水平变化与老年肺炎患者严重程度的关系及诊断价值研究

目的研究RORγt mRNA、NF-κB、IL-10的水平变化与肺炎严重程度的关系及预后的相关性分析。方法选取2015年2月至2018年2月期间的180例老年肺炎患者作为观察组研究对象,以同期180例在我院进行体检的健康人群为对照组。比较两组受试者的RORγt mRNA、NF-κB、IL10的水平以及患者不同疾病程度之间的差异,分析RORγt mRNA、NF-κB、IL-10水平与患者疾病严重程度的相关性,比较单项检测和联合检测效能之间的差异。结果观察组的RORγt mRNA、NF-κB、IL-10水平显著高于对照组;中高风险组患者的RORγt mRNA、NF-κB、IL-10水平显著高于低风险组患者;患者的肺炎严重程度与RORγt mRNA、NF-κB、IL-10水平相关,联合诊断效能显著高于单独检测,通过ROC曲线分析,低风险患者的RORγt mRNA、NF-κB、IL-10临界值分别为1.20、0.99、7.02ng/L,中高风险患者的RORγt mRNA、NF-κB、IL-10临界值分别为1.34、2.31、8.14ng/L。结论随着肺炎患者炎性反应的不断提升,患者的RORγt mRNA、NF-κB、IL-10水平显著升高,通过对患者的ROC曲线分析,RORγt mRNA、NF-κB、IL-10的临界值可作为临床治疗以及诊断的参考。

转录因子RORγt对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用

目的:探讨转录因子维A酸相关孤独受体γt(RORγt)对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用。方法:健康成人外周血单个核细胞用CD3单克隆抗体和IL-2激活和扩增T细胞,活化T细胞用脂质体法转染人工合成的RORγt基因特异性短干扰RNA(siRNA)序列3个片段(RORγt-siRNA-982,-1026,-1197),RT-PCR半定量法检测活化T细胞转染siRNA后RORγt基因表达,流式细胞仪检测不同T细胞亚群产生IFN-γ细胞的比例。结果:活化T细胞转染RORγt-siRNA后,对RORγt基因表达的检测显示,RORγt-siRNA-982序列无抑制作用,而RORγt-siRNA-1026和-1197序列均有明显抑制作用。活化T细胞转染RORγt-siRNA-1026后,产生IFN-γ细胞百分数在CD4+T细胞(32.78±3.41)中,明显低于未转染组(44.54±1.75)(P<0.01)。结论:转录因子RORγt对T细胞,特别是对CD4+T细胞产生IFN-γ有正调控作用。

γ促分泌酶抑制剂MW167对毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞中Th17细胞比例的影响

目的观察γ促分泌酶抑制剂MW167对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞比例、视黄酸受体相关孤核受体γt(RORγt)mRNA表达及细胞上清液中IL-17水平的影响。方法选择RSV毛细支气管炎30例患儿作为观察组,25例健康体检儿作为对照组,抽取患儿外周静脉血,分离PBMC。将对照组儿童外周血分离所得的PBMC作为正常组,观察组患儿外周血分离所得的PBMC作为RSV组、MW167组,MW167组加入MW167,培养48 h。采用流式细胞术检测三组Th17细胞比例,ELISA检测细胞培养上清液中IL-17水平,实时荧光定量PCR检测细胞中的RORγt mRNA表达。结果正常组、RSV组、MW167组PBMC中Th17细胞比例分别为0.49%±0.09%、1.56%±0.77%、0.84%±0.23%,RSV组与正常组相比P<0.01,MW167组与RSV组相比P<0.05。正常组、RSV组、MW167组PBMC细胞培养上清液中IL-17水平分别为(12.18±2.97)、(20.88±4.10)、(12.91±4.28)pg/mL,RSV组与正常组相比,MW167组与RSV组相比,P均<0.05。正常组、RSV组、MW167组PBMC中RORγt mRNA相对表达量分别为1.0、5.72±0.53、1.82±0.21,RSV组与正常组相比,MW167组与RSV组相比,P均<0.05。结论γ促分泌酶抑制剂MW167可降低RSV毛细支气管炎患儿PBMC中RORγt mRNA表达、Th17细胞比例及细胞培养上清液中IL-17水平。

甲氨蝶呤治疗对类风湿性关节炎患者RORγt基因甲基化水平和Th17/Treg平衡的影响

目的探讨RA患者MTX对视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)启动子甲基化水平和Th17/Treg平衡的影响。方法选择2016年8月至2017年7月于我院确诊并使用MTX进行治疗的RA患者89例,所有患者均接受小剂量MTX维持治疗。分别于治疗前及开始治疗后3个月抽取外周静脉血,使用流式细胞仪检测Th17及Treg含量,并分析Th17细胞RORγt甲基化水平,而后分析二者之间的相关性。结果患者治疗后Th17(2.75%±0.83%vs 3.39%±0.74%)及Th17/Treg(0.26±0.09 vs 0.41±0.13)较治疗前显著下降(P<0.001),而Treg(7.29%±1.49%vs 6.13%±1.42%)较治疗前显著上升(P<0.001)。RORγt(mRNA)(2.98±0.69 vs 4.15±0.78)表达水平较治疗前显著下降(P<0.001)。患者治疗后RORγt序列1(32.21±4.71 vs 40.15±6.58)及序列2(20.73±3.3 vs 25.65±4.61)甲基化水平显著低于治疗前(P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,患者治疗前后RORγt序列1及序列2甲基化水平均与Th17/Treg呈正相关(r=0.345,0.297;P<0.05)。结论MTX能有效抑制RORγt基因的甲基化水平,改善RA患者Th17/Treg失衡的作用,提示RORγt甲基化水平可能参与对Th17/Treg平衡的调节。

HPV阳性与阴性宫颈病变患者外周血中Foxp3 mRNA及RORγt mRNA的表达

目的:观察叉头状转录因子信使核糖核酸(Foxp3 mRNA)、视黄酸相关孤儿受体γt信使核糖核酸(RORγt mRNA)在HPV感染的宫颈病变患者外周血中相对表达量的变化,探讨其与该病变的关系。方法:收集2016-01—2017-06本院门诊及住院宫颈病变患者373例,用聚合酶链式反应(PCR)和基因芯片检测技术筛选出HPV阳性感染者158例,包括宫颈炎组40例、宫颈上皮内瘤变(CIN)76例(CINⅠ级组25例、CINⅡ级组25例、CINⅢ级组26例)、宫颈癌组42例;HPV阴性者215例,包括宫颈炎组124例、CIN 68例(CINⅠ级组26例、CINⅡ级组22例、CINⅢ级组20例)、宫颈癌组23例。选择同期体检健康者为正常对照组(39例)。采用实时荧光定量PCR方法检测受试者外周血单个核细胞中Foxp3mRNA、RORγt mRNA的相对表达量。比较HPV阳性与HPV阴性各组Foxp3mRNA、RORγt mRNA表达差异,分析Foxp3mRNA、RORγt mRNA与宫颈变变严重程度的相关性。结果:随着宫颈病变的加重,HPV阳性检出率增加。HPV阳性各组宫颈病变患者Foxp3mRNA、RORγt mRNA相对表达量的差异均有统计学意义(P<0.05)。Foxp3mRNA相对表达量在宫颈炎组与CINI级组组间差异无统计学意义(P>0.05),其余组间呈CIN I级组<CINⅡ级组<CINⅢ级组<宫颈癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。RORγt mRNA的相对表达量在宫颈炎组与CINI级组组间差异无统计学意义(P>0.05),其余组间呈CIN I级组>CINⅡ级组>CINⅢ级组>宫颈癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。Foxp3mRNA、RORγt mRNA相对表达量在HPV阴性各组宫颈病变中差异均无统计学意义(P>0.05)。HPV阳性宫颈病变患者Foxp3mRNA相对表达量与宫颈病变严重程度呈正相关(r=0.697,P<0.05),RORγt mRNA的相对表达量与宫颈病变严重程度呈负相关(r=-0.657,P<0.05)。结论:HPV阳性患者宫颈发生病变与其Foxp3 mRNA表达量升高、RORγt mRNA表达量降低有关。

全反式视黄酸与1,25-(OH)_2D_3联合应用对溃疡性结肠炎小鼠Th17相关细胞因子作用的实验研究

目的研究全反式视黄酸(all-trans retinoic aciol,ATRA)与1,25-(OH)_2D_3联合作用对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠辅助性T细胞17(Thelper17cells,Th17)细胞相关因子表达的影响。方法 50只6周龄雌性SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、ATRA组、1,25-(OH)_2D_3组与ATRA+1,25-(OH)_2D_3联合组。对照组饮用蒸馏水,其余组饮用3.0%DSS溶液造模。造模第3天起对3个干预组分别灌胃给予0.2mg/d/只ATRA或/和100ng/d/只1,25-(OH)_2D_3。第9天处死小鼠,取结肠组织,进行大体形态学评分;HE染色进行组织病理学评分;免疫组织化学法检测结肠IL-17、IL-23表达;ELISA测定结肠维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoid acid receptor related orphan receptors,RORγt)、IL-6和TGF-β表达。采用单因素方差分析进行组间比较,采用析因设计方差分析判断两因素联合是否有交互作用。结果3个干预组与模型组比较,疾病活动指数(disease activity index,DAI)、大体形态和组织病理学评分均降低,IL-17、RORγt,IL-23及IL-6表达量下降,ATRA+1,25-(OH)_2D_3联合干预组效果更显著(P<0.05)。结论联合应用ATRA和1,25-(OH)_2D_3能更有效地抑制Th17相关因子的表达,减轻炎症,缓解结肠炎症状。

参附注射液对失血性休克大鼠肺损伤的影响

目的观察参附注射液对大鼠失血性休克(HS)致肺损伤的影响并探讨潜在机制。方法选择SPF级健康雄性SD大鼠36只,16~17周龄,体重400~600 g。采用随机数字表法将大鼠分为三组:假手术组(SH组)、失血性休克组(HS组)和参附注射液组(SF组),每组12只。SH组麻醉后仅分离出右股静脉和股动脉,不行动静脉置管,HS组和SF组制备HS大鼠模型。HS组经静脉导管进行液体复苏,复苏液为所失自体血加1.5倍失血量的复方氯化钠注射液与生理盐水10 ml/kg,SF组复苏液为所失自体血加1.5倍失血量的复方氯化钠注射液与参附注射液10 ml/kg,灌注时间约60 min。于术后24、48 h随机处死6只大鼠,取肺组织检测湿重与干重比(W/D),采用ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)浓度,采用PCR法检测肺组织视黄酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA表达量,采用Western blot法检测RORγt、Foxp3、HIF-1α、水通道蛋白1(AQP1)和AQP5蛋白含量,肺组织行HE染色后在光镜下观察病理学改变并行肺损伤评分。结果与术后24 h比较,术后48 h SF组肺组织W/D、IL-6和IL-17浓度、RORγt和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分均明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β浓度、Foxp3 mRNA表达量及蛋白含量、AQP1蛋白含量均明显升高(P<0.05)。与SH组比较,术后24、48 h HS组和SF组W/D、IL-6、IL-17、IL-10和TGF-β浓度、RORγt、Foxp3和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分均明显升高(P<0.05),AQP1、AQP5蛋白含量明显降低(P<0.05),光镜下可见肺泡结构破坏,肺泡间质充满大量水肿液,其间浸润着大量炎性细胞。与HS组比较,术后24、48 h SF组W/D、IL-6和IL-17浓度、RORγt和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β浓度、Foxp3 mRNA表达量及蛋白含量、AQP1和AQP5蛋白含量均明显升高(P<0.05),光镜下可见肺泡结构紊乱改善,水肿程度减轻,炎性细胞数量减少。结论参附注射液可调节促炎因子IL-6、IL-17与抗炎因子IL-10、TGF-β平衡,升高肺组织AQP1、AQP5蛋白含量,降低肺组织W/D和肺损伤评分,减轻HS大鼠肺损伤,机制可能与调节HIF-1α-RORγt/Foxp3平衡有关。

辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠炎性因子表达的影响

目的研究辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠炎性因子表达的影响。方法将50只大鼠随机分为空白对照组(等体积生理盐水)、模型组(等体积生理盐水)和辛伐他汀高、中、低剂量组(15,10,5 mg/kg)。灌胃给药,每日1次,连续灌胃56 d(除烟熏日外)。除空白对照组外,其余各组大鼠分别于灌胃第29,43天气管内注入脂多糖200μg,并确保大鼠持续吸烟30 min,以建立COPD大鼠模型。采用免疫组化法检测大鼠肺组织白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素22(IL-22)、视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)表达水平,以及气道间隔和支气管黏膜上皮组织炎性因子阳性细胞数。结果与空白对照组比较,模型组大鼠气道间隔及支气管黏膜上皮组织IL-17,IL-22,RORγt阳性细胞数显著增加(P<0.05);与模型组比较,辛伐他汀高、中剂量组大鼠气道间隔及支气管黏膜上皮组织IL-17,IL-22,RORγt阳性细胞数显著减少(P<0.05)。结论辛伐他汀可有效减弱COPD模型大鼠炎性因子的表达,减轻气道及肺部炎性反应。

紫草素对鼻咽癌CNE1细胞免疫逃逸的影响

【目的】探讨紫草素对鼻咽癌细胞的治疗作用及机制。【方法】(1)体外研究:将人鼻咽癌CNE1细胞分为阴性对照组,紫草素1.2、2.4、3.6μmol/L组及紫杉醇2.5μmol/L组。采用四甲基偶氮唑盐(MMT)法检测CNE1细胞活性,Hoechst法检测CNE1细胞凋亡情况,Western Blot法检测CNE1细胞叉头样转录因子3(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)蛋白表达。(2)体内研究:将48只裸鼠分为正常组,模型组,紫草素低、中、高剂量组及紫杉醇组,每组8只。除正常组外,其余各组裸鼠建立鼻咽癌模型。紫草素低、中、高剂量组分别给予1.0、2.0、3.0 mg/kg紫草素灌胃,紫杉醇组腹腔注射2.0 mg/kg的紫杉醇。测量瘤体质量,计算抑瘤率,提取巨噬细胞采用流式细胞仪检测程序性死亡受体1配体(PD-L1)表达,Western Blot法检测Foxp3、RORγt蛋白表达。【结果】与阴性对照组比较,紫草素1.2、2.4、3.6μmol/L组及紫杉醇2.5μmol/L组的细胞活性均降低,细胞凋亡率增加(均P<0.05),并存在紫草素浓度依赖性,且Foxp3蛋白表达水平升高、RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与正常组比较,模型组裸鼠巨噬细胞中PD-L1、肿瘤组织RORγt蛋白表达水平升高,肿瘤组织Foxp3蛋白表达水平降低(均P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高剂量组及紫杉醇组肿瘤质量减小,PD-L1、RORγt蛋白表达水平降低,Foxp3蛋白表达水平升高(均P<0.05);紫草素高剂量组各指标与紫杉醇组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】紫草素可以抑制鼻咽癌细胞增殖,抑制瘤体生长,其机制可能与降低肿瘤微环境巨噬细胞的PD-L1活性,激活Foxp3并抑制RORγt表达,进而减少肿瘤细胞免疫逃逸有关。

T辅助细胞17在结节病发病中的作用

目的研究Th17在活动期结节病患者外周血和BALF中的表达特征及其特异性核转录因子mRNA水平在糖皮质激素治疗前后的变化，探讨Th17细胞在结节病免疫病理机制中的作用。方法选择2010年7-月在北京协和医院呼吸内科门诊经病理确诊、根据结节病诊疗建议的原则需要接受系统性糖皮质激素治疗、用药4～6周后治疗有效的活动期肺结节病患者10例（男1例，女9例）为研究组，招募性别、年龄匹配的10名健康志愿者为对照组；年龄为40-60岁，平均（52±8）岁。以CD4＋IL-17A＋标记Th17细胞，通过流式细胞分析比较研究组治疗前和对照组外周血中Th17细胞的水平，以及研究组治疗前外周血和BALF中Th17细胞的水平。通过实时PCR的方法比较研究组治疗前后外周血中Th17细胞特异性核转录因子视黄酸相关孤独受体γt（RORγt）mRNA的表达水平。结果（1）流式细胞分析结果：研究组治疗前外周血中Th17细胞的比例为（1．61±1．09）％，高于对照组外周血的（0．51±0．43）％（t=3．02，P=0．014），低于同一患者BALF中的（3．05±1．87）％（t=-2．94，P=0．001）。（2）实时PCR检测结果：研究组治疗前外周血中的RORγt的mRNA表达水平为（0．952±0．367），治疗后其表达水平为（0．168±0．272），RORγtmRNA表达水平有下调趋势，但差异无统计学意义（t=1．76，P=0．057）。结论Th17细胞可能参与结节病的发病，且可能参与糖皮质激素的治疗反应过程；抑制驱使Th17转化的细胞因子有可能成为结节病的治疗靶点。

寻常型银屑病患者三大基本中医证型外周血Th细胞分化与JAK/STAT信号通路的关系

目的:研究寻常型银屑病血热、血瘀、血燥证形成与Th分化、JAK/STAT信号通路关系。方法:收集寻常型银屑病患者33例(血热证15例、血瘀证10例、血燥证8例),正常组健康人10名,运用流式细胞术检测各组受试者外周血Th1、Th17细胞的分化比例差异,运用Western bolt法检测pSTAT4/STAT4、pSTAT3/STAT3表达差异,运用qPCR法检测T-bet、ROR-γt表达差异。结果:受试者外周血Th1、pSTAT4/STAT4、T-bet表达及Th17、pSTAT3/STAT3、ROR-γt表达互为正相关(P<0.01,P<0.05);血热证患者外周血Th1、Th17、pSTAT4/STAT4、pSTAT3/STAT3、T-bet、ROR-γt显著高于正常组(P<0.01),Th1血热证高于血燥证(P<0.05),Th17、pSTAT4/STAT4、pSTAT3/STAT3、T-bet、ROR-γt血热证高于血瘀证、血燥证(P<0.05,P<0.01)。结论:在Th细胞异常分化过程中,JAK/STAT信号转导通路的异常活跃可能是银屑病血热证形成的物质基础,且JAK/STAT信号通路可能与血热证向血瘀、血燥证转变的过程相关。

记忆T细胞在哮喘小鼠不同时间的表达量

目的研究哮喘模型小鼠肺脏和脾脏组织中记忆T细胞(Tm)不同时期的表达规律以及可能作用机制。方法将84只小鼠随机分为对照组和模型组,每组42只。模型组予以腹腔注射和雾化吸入卵清白蛋白,对照组则予以等量磷酸缓冲盐溶液。于激发前1日开始,每隔2 d处死2只小鼠,直至激发后20 d。收集小鼠脾脏和肺脏,用流式细胞术检测脾脏和肺脏中Tm的水平,实时定量聚合酶链式反应检测T盒子转录因子(T-bet)、维甲酸相关孤儿受体γ亚型(RORγt)mRNA的水平。结果激发后第7天肺脏中CD4^+Tm-(辅助T细胞)Th比例达到最大值为(46.20±2.18)%,第9天脾脏中CD4^+Tm-Th比例为(38.35±1.60)%;第3天肺脏中CD8^+Tm-Th比例达到最大值为(42.29±0.97)%,第7天脾脏中CD8^+Tm-Th比例达到最大值为(31.26±1.04)%。对照组和模型组肺组织中T-bet mRNA的表达量分别为1.00±0.01,0.73±0.07;RORγt mRNA表达量分别为1.02±0.01,2.65±0.33,模型组与对照组比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 CD4^+Tm可能参与哮喘小鼠气道的持续炎症反应,CD8^+Tm可能表达于哮喘的急性发作时期,其作用机制可能与Th17、Th1细胞的分化有关。

清胰利胆颗粒联合床旁CRRT疗法对SAP患者炎性因子、免疫功能及外周血Foxp3、RORγt mRNA表达的影响

目的:探讨清胰利胆颗粒联合床旁连续性肾脏替代治疗(CRRT)对重症急性胰腺炎(SAP)患者炎性因子、免疫功能及外周血叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)、维甲酸相关孤独受体γt(RORγt)m RNA表达的影响。方法:选取2017年3月~2019年12月期间我院收治的SAP患者80例,根据随机数字表法分为对照组(n=40)和研究组(n=40),对照组患者予以床旁CRRT疗法治疗,研究组在对照组的基础上联合清胰利胆颗粒治疗,比较两组疗效、炎性因子、免疫功能、外周血Foxp3、RORγt mRNA相对表达量及不良反应。结果:研究组治疗后临床总有效率为87.50%(35/40),高于对照组患者的70.00%(28/40)(P<0.05)。研究组治疗后免疫球蛋白G(Ig G)、免疫球蛋白A(Ig A)、免疫球蛋白M(Ig M)、Foxp3 m RNA相对表达量较治疗前升高,且高于对照组(P<0.05)。两组治疗后白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、RORγt m RNA相对表达量较治疗前降低,且研究组低于对照组(P<0.05)。两组在治疗过程中均未出现严重不良反应。结论:清胰利胆颗粒联合床旁CRRT疗法治疗SAP,疗效显著,可有效改善患者炎性因子、免疫功能,其主要作用机制可能与外周血Foxp3、RORγt m RNA相对表达量有关。

红芪多糖调控膀胱癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸的研究

目的探讨红芪多糖是否可以通过调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/叉头框蛋白P3(FoxP3)/视黄酸受体相关孤儿受体-γt(RORγt)通路来抑制辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)介导的膀胱癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸。方法BALB/c雄性裸鼠臀部注射人膀胱癌细胞系5637细胞构建膀胱癌模型。待造模成功后,随机分为模型组、对照组和低、中、高剂量实验组,每组10只;另取10只正常小鼠作为空白组。低、中、高剂量实验组分别灌胃给予100、200、300 mg·kg^(-1)·d^(-1)的红芪多糖溶液;模型组和空白组均灌胃给予20 mL·kg^(-1)·d^(-1)0.9%NaCl溶液;对照组灌胃给予5 mg·kg^(-1)·d^(-1)顺铂。6组小鼠每天给药1次,连续给药1个月。给药结束后,计算肿瘤抑制率。用TUNEL法检测细胞的凋亡情况,用流式细胞术检测小鼠肿瘤淋巴细胞中Treg和Th7细胞的含量,用蛋白质印迹法检测膀胱组织中TGF-β1、FoxP3和RORγt的表达水平。结果高剂量实验组、对照组和模型组的肿瘤质量分别为(0.89±0.12)、(0.67±0.09)和(2.09±0.31)g,凋亡指数分别为(21.93±2.53)%、(23.91±2.18)%和(4.18±0.39)%;高剂量实验组、对照组、模型组和空白组的Treg细胞含量分别为(3.18±1.15)%、(2.97±0.98)%、(17.23±5.34)%和(2.73±1.04)%,Th7细胞含量分别为(1.03±0.36)%、(0.92±0.33)%、(6.28±1.96)%和(0.86±0.33)%,TGF-β1蛋白相对表达水平分别为0.34±0.13、0.33±0.11、0.69±0.10和0.32±0.08,FoxP3蛋白相对表达水平分别为0.21±0.05、0.20±0.06、0.72±0.16和0.19±0.06,RORγt蛋白相对表达水平分别为0.34±0.12、0.32±0.12、0.66±0.17和0.36±0.09。模型组的上述指标与高剂量实验组和对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论红芪多糖能够调控TGF-β1/FoxP3/RORγt通路来抑制Treg、Th7细胞介导的膀胱癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸。

艾拉莫德治疗胶原诱导性关节炎模型大鼠的作用研究

目的研究艾拉莫德对胶原诱导性关节炎大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响及其可能作用机制。方法选取50只Wistar雌性大鼠,用Ⅱ型胶原诱导法建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、甲氨蝶呤组和艾拉莫德低、中、高剂量组,每组各10只,另设对照组10只。艾拉莫德低、中和高剂量组大鼠分别灌胃3、6、12 mg·kg^(-1)·d^(-1)艾拉莫德混悬液(生理盐水配制);甲氨蝶呤组灌胃1 mg·kg^(-1)甲氨蝶呤混悬液,每周1次;对照组及模型组给予等量生理盐水,连续4周。观察大鼠足跖肿胀度;以酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清白细胞介素-17(IL-17)、IL-10水平;以流式细胞术检测大鼠外周血中Th17/Treg细胞比例;以实时荧光定量聚合酶链反应法检测大鼠踝关节滑膜中维A酸相关孤独受体γt(RORγt)、叉头转录因子3(Foxp3)mRNA的表达情况。结果对照组、模型组、甲氨蝶呤组和艾拉莫德低、中、高剂量组治疗4周的足跖肿胀度分别为0、(36.81±3.32)%、(5.81±0.60)%、(9.35±0.89)%、(6.57±0.64)%和(3.36±0.30)%;血清IL-17水平分别为(58.47±2.33)、(176.57±9.50)、(83.27±3.87)、(153.82±8.09)、(88.44±4.64)和(64.20±3.49)pg·mL^(-1);血清IL-10水平分别为(102.35±9.45)、(39.35±3.18)、(78.55±7.85)、(72.55±6.92)、(107.27±9.31)和(124.63±13.36)pg·mL^(-1);外周血中Th17亚群比例分别为(1.34±0.31)%、(5.43±0.59)%、(3.03±0.34)%、(4.35±0.40)%、(3.14±0.30)%和(1.66±0.23)%;外周血中Treg亚群比例分别为(12.53±0.47)%、(8.76±0.23)%、(11.82±0.34)%、(10.56±0.30)%、(11.77±0.39)%和(12.87±0.47)%。上述指标,模型组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);甲氨蝶呤组和艾拉莫德低、中、高剂量组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。艾拉莫德高剂量组与艾拉莫德低、中剂量组及甲氨蝶呤组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论艾拉莫德通过调控Th17/Treg平衡,减轻炎症反应发挥对CIA大鼠踝关节保护作用,其机制可能与调节其特异性转录因子RORγt、Foxp3表达有关。